一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法技术

本发明专利技术提供一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法，属于生物医药领域，该多硫酸化硫酸软骨素的制备方法具体步骤为软骨准备并进行预处理，制备多硫酸化硫酸软骨素，加工提取多硫酸化硫酸软骨素，酶解提取多硫酸化硫酸软骨素，吸附沉淀酶解后的多硫酸化硫酸软骨素和冻制加工多硫酸化硫酸软骨素。本发明专利技术通过处理器通过活性炭吸附网筛，不锈钢过滤网以及不锈钢网筒组成，所述的不锈钢过滤网采用两个，并且均通过螺钉安装在不锈钢网筒内部左右两侧，并且所述的活性炭吸附网筛位于不锈钢过滤网之间，可使得不锈钢网筒与搅拌桶下部出口处相连接，可通过活性炭吸附网筛和不锈钢过滤网过滤处理沉淀后的杂质废液的设置，可对弃渣进行处理，避免环境污染。

A preparation method of chondroitin sulfate

【技术实现步骤摘要】
一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法。
技术介绍
随着世界人口进入老龄化，骨关节炎疾病，包括（Osteoarthritis,OA）的患病率不断上升，患病人群日益增多。OA会导致疼痛、疾病，严重影响患者的劳动能力。对OA的治疗目前常用非甾体类抗炎药和多硫酸类软骨保护剂。多糖类软骨保护剂一般都是肝素类药物，如多硫酸氨基聚糖、多硫酸戊糖钠、多硫酸化硫酸软骨素等。硫酸软骨素（Chondroitinsulfate,CS）是关节软骨的重要成分。OA发生时，软骨受到损害，CS含量下降。补充CS能有效缓解症状，减轻炎症区域的肿胀度减轻OA对软骨的损害；还可能降低发病率、关节温度、痛感。临床上已有CS的复方口服药物或膳食补充剂，用于骨关节炎患者的治疗和保健。但是硫酸软骨素可被天然的硫酸软骨素酶降解，如果对硫酸软骨素进行磺化，得到多硫酸化硫酸软骨素，后者不易被天然的硫酸软骨素酶所降解，性质相对稳定很多。Petitou等人在美国专利“硫酸软骨素和硫酸皮肤素类硫酸化的硫酸软骨素类衍生物的制备”（Sulfatedglycosaminoglycanoidderivativesofthedermatansulfateandchondroitinsulfatetype,专利号US5382570）曾经公开了硫酸化硫酸软骨素的制备方法。软骨素（Chondroitinsulfate）是由D－葡萄糖醛酸和乙酰氨基已糖（葡萄糖和半乳糖）通过1,3-b--苷键相连结的组成的高聚物，分子量一般为2-5万，白色粉末，具有较强吸水性、易溶于水并成为粘稠溶液，不溶于乙醇、乙醚、丙酮等有机溶剂。用途：硫酸软骨素，是一种酸性粘多糖，为临床较常用的药物，用于某些神经性头痛、神经痛、关节痛、偏头痛、动脉硬化症等；也可用于链霉素引起的听觉障碍及肝炎等的辅助治疗。现有技术专利公告号CN1789287A公开了一种多硫酸化硫酸软骨素及其制备方法，其中公开了使用氯磺酸、浓硫酸制备多硫酸化硫酸软骨素的方法。但是，现有的软骨素的制备方法存在着制备工艺落后，操作安全系数小和产生废料容易污染环境的问题。因此，专利技术一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法显得非常必要。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法，以解决现有的软骨素的制备方法存在着制备工艺落后，操作安全系数小和产生废料容易污染环境的问题，一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法具体包括以下步骤：步骤一：软骨准备并进行预处理，将新鲜的软骨用不锈钢剃刀除去脂肪以及结缔组织，用清水冲洗，可用滤筛去除碎屑，再置于通风干燥处进行晾干，置于30分钟-45分钟自然晾干即可，再通过粉碎机粉碎，粉碎后可置于不锈钢盆，并置于冷库内进行暂存，用时取出即可；步骤二：制备多硫酸化硫酸软骨素，具体操作包括以下步骤：第一步：搅拌处理，将取出的软骨粉末置于搅拌桶内，再通过搅拌器进行搅拌；第二步：降解反应，搅拌状态下，将30%-45%质量百分比浓度的硫酸软骨素甲酰胺溶液与氯磺酸和甲酰胺混合液混合后，在35-40℃下搅拌5-7小时，再升温至75-80℃降解后搅拌6-8小时，然后加入反应液4-5体积倍量的97%乙醇搅拌后静置；第三步：分离处杂，经固液分离后得到多硫酸化硫酸软骨素沉淀，搅拌器可通过PLC进行控制，沉淀后的杂质废液取出，可通过处理器进行处理排放；步骤三：加工提取多硫酸化硫酸软骨素，具体操作包括以下步骤：第一步：蒸煮搅拌，对多硫酸化硫酸软骨素进行煮沸，可通过PLC控制PTC加热器进行蒸煮操作，蒸煮合理范围内时间后，加入4倍量的3%氢氧化钠溶液搅拌提取24-26h；第二步：过滤提取，用纱布过滤，滤渣再用2倍量的3%氢氧化钠溶液搅拌提取12-18h，过滤；第三步：弃渣处理，将过滤后形成的提取液，弃去滤渣，滤渣可通过步骤二中的处理器进行处理加工；步骤四：酶解提取多硫酸化硫酸软骨素，将滤液取出并置于酶解罐中，搅拌下加入1:1盐酸调节pH值，加热至50-60℃，加入合理范围内质量的胰酶酶解6-8h，取酶解液；步骤五：吸附沉淀酶解后的多硫酸化硫酸软骨素，具体操作包括以下步骤：第一步：吸附沉淀，将酶解液置于吸附沉淀罐内，并调整pH值6.8-7.2，加入6-8kg质量的白土，并不断通过搅拌器进行搅拌，搅拌5-8h后，再加入1%-2%的活性炭块进行吸附1-3h，再通过过滤网筛进行过滤除杂；第二步：滤杂回收，将滤渣通过步骤二中的处理器进行处理，最后形成多硫酸化硫酸软骨素，可取出置于室温内，再通过加入90%以上的乙醇进行搅拌，搅拌45-50min后，静置1-2h，取出上清液，回收乙醇，将下层沉淀脱水干燥得到多硫酸化硫酸软骨素，准备最后的工序；步骤六：冻制加工多硫酸化硫酸软骨素，将多硫酸化硫酸软骨素沉淀加入10倍硫酸软骨素投料质量的纯化水溶解，调节pH值，后经0.45-0.55µm的膜过滤后冻干，得到多硫酸化硫酸软骨素冻干品。优选地，在步骤一中，所述的软骨采用牛骨、马骨或者羊骨的一种，所述的冷库温度设置为0℃至-3℃。优选地，在步骤二中，所述的第二步中的氯磺酸和甲酰胺混合液中氯磺酸与硫酸软骨素的质量比为1.8-1.9:1，甲酰胺与硫酸软骨素的质量比为5-6:1。优选地，在步骤二中，所述的第三步中的处理器通过活性炭吸附网筛，不锈钢过滤网以及不锈钢网筒组成，所述的不锈钢过滤网采用两个，并且均通过螺钉安装在不锈钢网筒内部左右两侧，并且所述的活性炭吸附网筛位于不锈钢过滤网之间，可使得不锈钢网筒与搅拌桶下部出口处相连接，可通过活性炭吸附网筛和不锈钢过滤网过滤处理沉淀后的杂质废液。优选地，在步骤三中，所述的第一步中的蒸煮时间设置为6-8h。优选地，在步骤四中，所述的pH值设置为8.8-9.0，所述的胰酶质量设置为5-8kg。优选地，在步骤六中，所述的pH值设置为6.9-7.2。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：由于本专利技术的一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法广泛应用于生物医药
本专利技术工艺成熟，操作安全，通过处理器通过活性炭吸附网筛，不锈钢过滤网以及不锈钢网筒组成，所述的不锈钢过滤网采用两个，并且均通过螺钉安装在不锈钢网筒内部左右两侧，并且所述的活性炭吸附网筛位于不锈钢过滤网之间，可使得不锈钢网筒与搅拌桶下部出口处相连接，可通过活性炭吸附网筛和不锈钢过滤网过滤处理沉淀后的杂质废液的设置，可对弃渣进行处理，避免环境污染，提高环保效果，并通过PLC的控制，保证操作更加流畅，安全，提高制备工艺。附图说明图1是多硫酸化硫酸软骨素的制备方法流程图。图2是制备多硫酸化硫酸软骨素流程图。图3是加工提取多硫酸化硫酸软骨素流程图。图4是吸附沉淀酶解后的多硫酸化硫酸软骨素流程图。具体实施方式以下结合附图对本专利技术做进一步描述：图本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法，其特征在于，该种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法具体包括以下步骤：/n步骤一：软骨准备并进行预处理，将新鲜的软骨用不锈钢剃刀除去脂肪以及结缔组织，用清水冲洗，可用滤筛去除碎屑，再置于通风干燥处进行晾干，置于30分钟-45分钟自然晾干即可，再通过粉碎机粉碎，粉碎后可置于不锈钢盆，并置于冷库内进行暂存，用时取出即可；/n步骤二：制备多硫酸化硫酸软骨素；/n步骤三：加工提取多硫酸化硫酸软骨素；/n步骤四：酶解提取多硫酸化硫酸软骨素，将滤液取出并置于酶解罐中，搅拌下加入1:1盐酸调节pH值，加热至50-60℃，加入合理范围内质量的胰酶酶解6-8h，取酶解液；/n步骤五：吸附沉淀酶解后的多硫酸化硫酸软骨素；/n步骤六：冻制加工多硫酸化硫酸软骨素，将多硫酸化硫酸软骨素沉淀加入10倍硫酸软骨素投料质量的纯化水溶解，调节pH值，后经0.45-0.55µm的膜过滤后冻干，得到多硫酸化硫酸软骨素冻干品。/n

【技术特征摘要】
1.一种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法，其特征在于，该种多硫酸化硫酸软骨素的制备方法具体包括以下步骤：
步骤一：软骨准备并进行预处理，将新鲜的软骨用不锈钢剃刀除去脂肪以及结缔组织，用清水冲洗，可用滤筛去除碎屑，再置于通风干燥处进行晾干，置于30分钟-45分钟自然晾干即可，再通过粉碎机粉碎，粉碎后可置于不锈钢盆，并置于冷库内进行暂存，用时取出即可；
步骤二：制备多硫酸化硫酸软骨素；
步骤三：加工提取多硫酸化硫酸软骨素；
步骤四：酶解提取多硫酸化硫酸软骨素，将滤液取出并置于酶解罐中，搅拌下加入1:1盐酸调节pH值，加热至50-60℃，加入合理范围内质量的胰酶酶解6-8h，取酶解液；
步骤五：吸附沉淀酶解后的多硫酸化硫酸软骨素；
步骤六：冻制加工多硫酸化硫酸软骨素，将多硫酸化硫酸软骨素沉淀加入10倍硫酸软骨素投料质量的纯化水溶解，调节pH值，后经0.45-0.55µm的膜过滤后冻干，得到多硫酸化硫酸软骨素冻干品。


2.如权利要求1所述的多硫酸化硫酸软骨素的制备方法，其特征在于，在步骤二中，所述的制备多硫酸化硫酸软骨素，具体操作包括以下步骤：
第一步：搅拌处理，将取出的软骨粉末置于搅拌桶内，再通过搅拌器进行搅拌；
第二步：降解反应，搅拌状态下，将30%-45%质量百分比浓度的硫酸软骨素甲酰胺溶液与氯磺酸和甲酰胺混合液混合后，在35-40℃下搅拌5-7小时，再升温至75-80℃降解后搅拌6-8小时，然后加入反应液4-5体积倍量的97%乙醇搅拌后静置；
第三步：分离处杂，经固液分离后得到多硫酸化硫酸软骨素沉淀，搅拌器可通过PLC进行控制，沉淀后的杂质废液取出，可通过处理器进行处理排放。


3.如权利要求1所述的多硫酸化硫酸软骨素的制备方法，其特征在于，在步骤三中，所述的加工提取多硫酸化硫酸软骨素，具体操作包括以下步骤：
第一步：蒸煮搅拌，对多硫酸化硫酸软骨素进行煮沸，可通过PLC控制PTC加热器进行蒸煮操作，蒸煮合理范围内时间后，加入4倍量的3%氢氧化钠溶液搅拌提取24-26h；
第二步：过滤提取，用纱布过滤，滤渣再用2倍量的3%氢氧化钠溶液搅拌提取12-18h，过滤；
第三步：弃渣处理，将过滤后形成的提...

【专利技术属性】
技术研发人员：田景全，田丽文，赵冰，孙健，赵涛，
申请(专利权)人：山东冰文生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37