动态人重链抗体文库制造技术

本文提供含有多核苷酸的文库，其中所述多核苷酸中的一者编码具有特定高变区HVR‑H1和HVR‑H2的抗体重链。本文进一步提供含有编码多种独特抗体的多核苷酸的文库，其中各抗体包含重链可变区和轻链可变区。也提供与所述文库相关的抗体、多肽文库、载体文库、细胞、非人动物、抗体重链、制备抗体文库的方法、试剂盒和产生双特异性抗体的方法。

Dynamic human heavy chain antibody library

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】动态人重链抗体文库
本公开涉及含有编码抗体重链(例如动态人抗体的重链)的合成多核苷酸的文库以及与其相关的抗体重链、抗体、细胞、动物、方法和试剂盒。
技术介绍
单克隆抗体已变得极其适用于包括生物学研究、医学诊断和药物产品的广泛多种领域中。潜在结合特异性的可变性允许获得具有有价值的特异性和效能的抗体。然而，这个可变性使得在巨大数目的抗体之中进行筛选以鉴定一种或多种具有所需性质的抗体是困难的和繁重的。一种鉴定目标抗体的方法是通过抗体文库诸如经克隆B细胞序列的文库、噬菌体展示文库、酵母展示文库等来进行筛选。这些文库允许在代表众多独特抗体序列的许多抗体之中进行筛选，以鉴定具有特定目标性质例如与特定靶标的结合、结合亲和力、选择性等的抗体。然而，当前文库具有特定限制。源于生物来源诸如人B细胞谱系的文库局限于可从所述来源克隆的那些抗体序列。相较于生物源性文库，合成文库可包括非天然存在的序列，但它们也受限于可在特定时间段合成的抗体的数量。此外，极其大型的文库需要更加耗时和更具消耗性的筛选方法；另外，文库中仅有一小部分可实际上被关于目标抗体加以筛选。因此，存在对开发动态抗体文库的需要，所述文库含有一组用于设计和构建在功能上具有潜在更大相关性的动态抗体的具有明确确定的可开发序列概况的稳健动态单元。所述文库不仅将极大改进文库内抗体上的抗体结合位点的多样性，而且也将极大改进筛选具有在给定抗原上的新型和/或构象性表位的抗体的效率。此外，所述文库将使可能鉴定到具有高亲和力和可开发性概况的特定目标抗体的可能性增加。本文引用的所有参考资料，包括专利申请、专利公布和UniProtKB/Swiss-Prot登录号，都以引用的方式整体并入本文，所述引用的程度就好像明确地和个别地指示将各个别参考资料以引用的方式并入一样。
技术实现思路
为满足以上需要和其他需要，本文公开允许获得动态人抗体的抗体序列，诸如重链高变区(HVR)和重链可变区(例如VH区)。这些序列被设计来允许获得具有高度柔性HVR序列环的抗体，所述抗体能够以高效能结合它们的靶标和/或识别多种适用表位，和/或与在不同物种之间以低序列同一性(约60％序列同一性或更小)共有的表位交叉反应。有利的是，这些抗体序列允许创建小得多，然而含有众多适用抗体的文库，和/或在给定文库大小下产生大得多的多样性。所述文库可用于鉴定对广泛范围的靶标具有特异性，或在一些情况下，与多种目标靶标交叉反应的新目标抗体。此外，在本文中引入和实施一种用于使用新近鉴定的动态单元来捕集精简实体性文库中抗体结合位点的广泛范围的构象柔性以设计和构建动态抗体文库的新型构思和方法。此外，使用所述抗体获得的结果(如下所述)强调能够从这些文库鉴定靶向来自不同物种的具有低序列同一性(例如低于60％至70％)的给定抗原上的构象性表位和/或进化保守位点的抗体。因此，在一个方面，本文提供一种或多种HVR-H1氨基酸序列和/或一种或多种编码所述一种或多种HVR-H1氨基酸序列的多核苷酸(例如合成多核苷酸)，其中所述HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(I)：X1TFX2X3YX4IHWV(SEQIDNO:198)，其中X1是F或Y，X2是S或T，X3是D、G、N或S，并且X4是A、G或W；式(II)：YSIX1SGX2X3WX4WI(SEQIDNO:199)，其中X1是S或T，X2是H或Y，X3是H或Y，并且X4是A、D、G、N、S或T；和式(III)：FSLSTX1GVX2VX3WI(SEQIDNO:200)，其中X1是G或S，X2是A或G，并且X3是A、G、S或T。在一些实施方案中，HVR-H1包含选自由SEQIDNO:1-52和137-158组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H1包含选自由SEQIDNO:1-52组成的组的氨基酸序列。在另一方面，本文提供一种或多种HVR-H2氨基酸序列和/或一种或多种编码所述一种或多种HVR-H2氨基酸序列的多核苷酸(例如合成多核苷酸)，其中所述HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(IV)：LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(SEQIDNO:201)，其中X1是L或R，X2是D或Y，X3是A、D、S或Y，X4是D或G，X5是R、S或Y，并且X6是P或T；式(V)：IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(SEQIDNO:202)，其中X1是A、D、E、S或Y，X2是S或Y，并且X3是H或Y；式(VI)：IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(SEQIDNO:203)，其中X1是D、E、R、S或Y，X2是H或Y，X3是N或S，并且X4是N或Y；式(VII)：VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(SEQIDNO:204)，其中X1是A、G、S、V或Y，X2是A、D、S或Y，X3是D、G或S，并且X4是S或T；式(VIII)：IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(SEQIDNO:205)，其中X1是I、R或W，X2是F或R，X3是D、G或S，并且X4是K或N；式(IX)：IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(SEQIDNO:206)，其中X1是I、R或W，X2是S或Y，X3是G或S，X4是D、G或S，并且X5是K或N；和式(X)：VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(SEQIDNO:207)，其中X1是K或R，X2是A或T，X3是D或Y，X4是G或Y，X5是D或E，并且X6是P或S。在一些实施方案中，HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：式(IV)；式(VII)；式(VIII)；式(IX)；式(XI)：IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(SEQIDNO:208)，其中X1是A、D或E，X2是S或Y，并且X3是H或Y；式(XII)：IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(SEQIDNO:209)，其中X1是D、E或S，X2是H或Y，X3是N或S，并且X4是N或Y；和式(XIII)：VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(SEQIDNO:210)，其中X1是K或R，X2是A或T，X3是D或Y，X4是G或Y，X5是P或S。在一些实施方案中，HVR-H2包含选自由SEQIDNO:53-136和159-164组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含选自由SEQIDNO:53-136组成的组的氨基酸序列。在另一方面，本文提供一种或多种HVR-H3氨基酸序列和/或一种或多种编码所述一种或多种HVR-H3氨基酸序列的多核苷酸(例如合成多核苷酸)，其中所述HVR-H3包含选自由SEQIDNO:223-256组成的组的氨基酸序列。在另一方面，本文提供一种或多种HVR-L1氨基酸序列和/或一种或多种编码所述一种或多种HVR-L1氨基酸序列的多核苷酸(例如合成多核苷酸)，其中所述HVR-L1包含选自由SEQIDNO:257-264组成的组的氨基酸序列。在另一方面，本文提供本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含多核苷酸的文库，其中所述多核苷酸中的一者编码包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的抗体重链可变区，其中所述HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：/n(式I)X

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含多核苷酸的文库，其中所述多核苷酸中的一者编码包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的抗体重链可变区，其中所述HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式I)X1TFX2X3YX4IHWV(SEQIDNO:198)，其中X1是F或Y，X2是S或T，X3是D、G、N或S，并且X4是A、G或W；
(式II)YSIX1SGX2X3WX4WI(SEQIDNO:199)，其中X1是S或T，X2是H或Y，X3是H或Y，并且X4是A、D、G、N、S或T；和
(式III)FSLSTX1GVX2VX3WI(SEQIDNO:200)，其中X1是G或S，X2是A或G，并且X3是A、G、S或T；并且
其中所述HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式IV)LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(SEQIDNO:201)，其中X1是L或R，X2是D或Y，X3是A、D、S或Y，X4是D或G，X5是R、S或Y，并且X6是P或T；
(式V)IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(SEQIDNO:202)，其中X1是A、D、E、S或Y，X2是S或Y，并且X3是H或Y；
(式VI)IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(SEQIDNO:203)，其中X1是D、E、R、S或Y，X2是H或Y，X3是N或S，并且X4是N或Y；
(式VII)VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(SEQIDNO:204)，其中X1是A、G、S、V或Y，X2是A、D、S或Y，X3是D、G或S，并且X4是S或T；
(式VIII)IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(SEQIDNO:205)，其中X1是I、R或W，X2是F或R，X3是D、G或S，并且X4是K或N；
(式IX)IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(SEQIDNO:206)，其中X1是I、R或W，X2是S或Y，X3是G或S，X4是D、G或S，并且X5是K或N；和
(式X)VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(SEQIDNO:207)，其中X1是K或R，X2是A或T，X3是D或Y，X4是G或Y，X5是D或E，并且X6是P或S。


2.如权利要求1所述的文库，其中所述多核苷酸中的至少两者、至少三者、至少四者、至少五者或至少十者编码包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链可变区，
其中所述HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式I)X1TFX2X3YX4IHWV(SEQIDNO:198)，其中X1是F或Y，X2是S或T，X3是D、G、N或S，并且X4是A、G或W；
(式II)YSIX1SGX2X3WX4WI(SEQIDNO:199)，其中X1是S或T，X2是H或Y，X3是H或Y，并且X4是A、D、G、N、S或T；和
(式III)FSLSTX1GVX2VX3WI(SEQIDNO:200)，其中X1是G或S，X2是A或G，并且X3是A、G、S或T；并且
其中所述HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式IV)LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(SEQIDNO:201)，其中X1是L或R，X2是D或Y，X3是A、D、S或Y，X4是D或G，X5是R、S或Y，并且X6是P或T；
(式V)IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(SEQIDNO:202)，其中X1是A、D、E、S或Y，X2是S或Y，并且X3是H或Y；
(式VI)IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(SEQIDNO:203)，其中X1是D、E、R、S或Y，X2是H或Y，X3是N或S，并且X4是N或Y；
(式VII)VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(SEQIDNO:204)，其中X1是A、G、S、V或Y，X2是A、D、S或Y，X3是D、G或S，并且X4是S或T；
(式VIII)IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(SEQIDNO:205)，其中X1是I、R或W，X2是F或R，X3是D、G或S，并且X4是K或N；
(式IX)IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(SEQIDNO:206)，其中X1是I、R或W，X2是S或Y，X3是G或S，X4是D、G或S，并且X5是K或N；和
(式X)VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(SEQIDNO:207)，其中X1是K或R，X2是A或T，X3是D或Y，X4是G或Y，X5是D或E，并且X6是P或S。


3.如权利要求1或权利要求2所述的文库，其中所述HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式XI)IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(SEQIDNO:208)，其中X1是A、D或E，X2是S或Y，并且X3是H或Y；
(式XII)IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(SEQIDNO:209)，其中X1是D、E或S，X2是H或Y，X3是N或S，并且X4是N或Y；和
(式XIII)VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(SEQIDNO:210)，其中X1是K或R，X2是A或T，X3是D或Y，X4是G或Y，X5是P或S。


4.如权利要求1-3中任一项所述的文库，其中所述多核苷酸中的每一者编码包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链，并且其中所述HVR-H1包含选自由SEQIDNO:1-52和137-158组成的组的氨基酸序列。


5.如权利要求1-4中任一项所述的文库，其中所述多核苷酸中的每一者编码包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链，并且其中所述HVR-H1包含选自由SEQIDNO:1-52组成的组的氨基酸序列。


6.如权利要求1-5中任一项所述的文库，其中所述多核苷酸中的每一者编码包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链，并且其中所述HVR-H2包含选自由SEQIDNO:53-136和159-164组成的组的氨基酸序列。


7.如权利要求1-6中任一项所述的文库，其中所述多核苷酸中的每一者编码包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链，并且其中所述HVR-H2包含选自由SEQIDNO:53-136组成的组的氨基酸序列。


8.如权利要求1-7中任一项所述的文库，其中所述多核苷酸含有HVR-H1序列和HVR-H2序列的小于约6.5*104种独特组合。


9.如权利要求8所述的文库，其中所述多核苷酸含有HVR-H1序列和HVR-H2序列的小于约6700种独特组合。


10.如权利要求9所述的文库，其中所述多核苷酸含有HVR-H1序列和HVR-H2序列的约6660种或更少种独特组合。


11.如权利要求1-10中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:1-52和137-158组成的组的氨基酸序列的HVR-H1，并且所述抗体的HVR-H2包含选自由SEQIDNO:53-136和159-164组成的组的氨基酸序列。


12.如权利要求1-11中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:1-52组成的组的氨基酸序列的HVR-H1，并且所述抗体的HVR-H2包含选自由SEQIDNO:53-136组成的组的氨基酸序列。


13.如权利要求1所述的文库，其中所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3中的三者，其中所述HVR-H1和所述HVR-H2选自由以下组成的组：包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(IX)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VII)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VII)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(IX)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(IV)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(V)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VI)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VI)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(III)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VI)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(III)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VII)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VIII)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(V)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(III)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(V)氨基酸序列的HVR-H2；以及包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VIII)氨基酸序列的HVR-H2。


14.如权利要求1所述的文库，其中所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3中的三者，其中所述HVR-H1和所述HVR-H2选自由以下组成的组：包含氨基酸序列SEQIDNO:157的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:1的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:122的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:138的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:154的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:158的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:161的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:158的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:145的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:128的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:22的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:61的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:31的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:153的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:155的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:67的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:156的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:100的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:51的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:162的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:138的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:123的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:139的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:110的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:8的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:126的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:13的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:129的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:31的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:124的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:25的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:130的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:150的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:132的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:158的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:162的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:12的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:82的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:149的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:117的HVR-H2；以及包含氨基酸序列SEQIDNO:7的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:134的HVR-H2。


15.如权利要求1-14中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:223-256组成的组的氨基酸序列的HVR-H3。


16.如权利要求1-15中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有氨基酸序列SEQIDNO:165的FW-H1、含有氨基酸序列SEQIDNO:166的FW-H2、含有氨基酸序列SEQIDNO:167的FW-H3和/或含有氨基酸序列SEQIDNO:168的FW-H4。


17.如权利要求1所述的文库，其中所述重链可变区包含选自由SEQIDNO:169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193和195组成的组的序列。


18.如权利要求1-17中任一项所述的文库，其中所述多核苷酸编码全长抗体重链。


19.如权利要求1-18中任一项所述的文库，所述文库还包含编码抗体轻链可变区的多核苷酸。


20.如权利要求19所述的文库，其中所述抗体轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，其中所述HVR-L1包含选自由SEQIDNO:257-264组成的组的氨基酸序列和/或所述HVR-L3包含选自由SEQIDNO:265-274组成的组的氨基酸序列。


21.如权利要求19或权利要求20所述的文库，其中编码抗体轻链可变区的所述多核苷酸包括至少一种独特序列。


22.如权利要求19-21中任一项所述的文库，其中编码抗体轻链可变区的所述多核苷酸包括至少约280种独特序列。


23.如权利要求19-22中任一项所述的文库，其中编码抗体轻链可变区的所述多核苷酸包括至少约105种独特序列。


24.一种包含编码多种独特抗体的多核苷酸的文库，其中各抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述多种独特抗体中的各抗体的所述重链可变区包含相同序列，并且包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，并且其中所述HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式I)X1TFX2X3YX4IHWV(SEQIDNO:198)，其中X1是F或Y，X2是S或T，X3是D、G、N或S，并且X4是A、G或W；
(式II)YSIX1SGX2X3WX4WI(SEQIDNO:199)，其中X1是S或T，X2是H或Y，X3是H或Y，并且X4是A、D、G、N、S或T；和
(式III)FSLSTX1GVX2VX3WI(SEQIDNO:200)，其中X1是G或S，X2是A或G，并且X3是A、G、S或T；并且
其中所述HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式IV)LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(SEQIDNO:201)，其中X1是L或R，X2是D或Y，X3是A、D、S或Y，X4是D或G，X5是R、S或Y，并且X6是P或T；
(式V)IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(SEQIDNO:202)，其中X1是A、D、E、S或Y，X2是S或Y，并且X3是H或Y；
(式VI)IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(SEQIDNO:203)，其中X1是D、E、R、S或Y，X2是H或Y，X3是N或S，并且X4是N或Y；
(式VII)VSX1ISGX2GX3X4TYYADSVKGRF(SEQIDNO:204)，其中X1是A、G、S、V或Y，X2是A、D、S或Y，X3是D、G或S，并且X4是S或T；
(式VIII)IGX1INPNX2GX3TX4YAQKFQGRV(SEQIDNO:205)，其中X1是I、R或W，X2是F或R，X3是D、G或S，并且X4是K或N；
(式IX)IGX1IX2PSX3GX4TX5YAQKFQGRV(SEQIDNO:206)，其中X1是I、R或W，X2是S或Y，X3是G或S，X4是D、G或S，并且X5是K或N；和
(式X)VGRIX1SKX2X3GX4TTX5YAAX6VKGRF(SEQIDNO:207)，其中X1是K或R，X2是A或T，X3是D或Y，X4是G或Y，X5是D或E，并且X6是P或S。


25.如权利要求24所述的文库，其中所述HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式XI)IGX1IX2X3SGSTYYSPSLKSRV(SEQIDNO:208)，其中X1是A、D或E，X2是S或Y，并且X3是H或Y；
(式XII)IGX1IYX2SGX3TX4YNPSLKSRV(SEQIDNO:209)，其中X1是D、E或S，X2是H或Y，X3是N或S，并且X4是N或Y；和
(式XIII)VGRIX1SKX2X3GX4TTEYAAX5VKGRF(SEQIDNO:210)，其中X1是K或R，X2是A或T，X3是D或Y，X4是G或Y，X5是P或S。


26.如权利要求24或权利要求25所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:1-52和137-158组成的组的氨基酸序列的HVR-H1。


27.如权利要求24-26中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:1-52组成的组的氨基酸序列的HVR-H1。


28.如权利要求24-27中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:53-136和159-164组成的组的氨基酸序列的HVR-H2。


29.如权利要求24-28中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:53-136组成的组的氨基酸序列的HVR-H2。


30.如权利要求24-29中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:1-52和137-158组成的组的氨基酸序列的HVR-H1和含有选自由SEQIDNO:53-136和159-164组成的组的氨基酸序列的HVR-H2。


31.如权利要求24-30中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:1-52组成的组的氨基酸序列的HVR-H1，并且所述抗体的HVR-H2包含选自由SEQIDNO:53-136组成的组的氨基酸序列。


32.如权利要求24所述的文库，其中所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3中的三者，其中所述HVR-H1和所述HVR-H2选自由以下组成的组：包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(IX)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VII)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VII)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(IX)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(IV)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(V)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VI)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VI)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(III)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VI)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(III)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VII)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(II)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VIII)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(V)氨基酸序列的HVR-H2；包含式(III)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(V)氨基酸序列的HVR-H2；以及包含式(I)氨基酸序列的HVR-H1和包含式(VIII)氨基酸序列的HVR-H2。


33.如权利要求24所述的文库，其中所述重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3中的三者，其中所述HVR-H1和所述HVR-H2选自由以下组成的组：包含氨基酸序列SEQIDNO:157的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:1的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:122的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:138的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:154的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:158的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:161的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:158的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:145的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:128的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:22的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:61的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:31的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:153的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:63的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:155的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:67的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:156的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:100的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:51的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:162的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:138的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:123的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:139的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:110的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:8的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:126的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:13的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:129的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:31的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:124的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:25的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:130的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:150的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:132的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:158的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:162的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:12的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:82的HVR-H2；包含氨基酸序列SEQIDNO:149的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:117的HVR-H2；以及包含氨基酸序列SEQIDNO:7的HVR-H1和包含氨基酸序列SEQIDNO:134的HVR-H2。


34.如权利要求24-33中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有选自由SEQIDNO:223-256组成的组的氨基酸序列的HVR-H3。


35.如权利要求24-34中任一项所述的文库，其中所述重链可变区包含含有氨基酸序列SEQIDNO:165的FW-H1、含有氨基酸序列SEQIDNO:166的FW-H2、含有氨基酸序列SEQIDNO:167的FW-H3和/或含有氨基酸序列SEQIDNO:168的FW-H4。


36.如权利要求24所述的文库，其中所述重链可变区包含选自由SEQIDNO:SEQIDNO:169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193和195组成的组的序列。


37.如权利要求24-36中任一项所述的文库，其中所述轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，其中所述HVR-L1包含选自由SEQIDNO:257-264组成的组的氨基酸序列和/或所述HVR-L3包含选自由SEQIDNO:265-274组成的组的氨基酸序列。


38.如权利要求24-37中任一项所述的文库，其中所述文库中的所述抗体的所述轻链可变区具有至少一种独特序列。


39.如权利要求24-38中任一项所述的文库，其中所述文库中的所述抗体的所述轻链可变区具有至少约280种独特序列。


40.如权利要求24-39中任一项所述的文库，其中所述文库中的所述抗体的所述轻链可变区具有至少约105种独特序列。


41.如权利要求1-40中任一项所述的文库，其中如通过结构测定和/或计算建模所测定，所述抗体重链可变区的所述HVR-H1和所述HVR-H2中的至少一者采用多种构象。


42.如权利要求1-41中任一项所述的文库，其中所述编码所述抗体重链可变区的多核苷酸中的至少一者处于载体中。


43.如权利要求42所述的文库，其中所述载体是表达载体。


44.如权利要求42所述的文库，其中所述载体是展示载体。


45.如权利要求1-44中任一项所述的文库，其中所述编码所述抗体重链可变区的多核苷酸中的至少一者处于细胞中。


46.如权利要求45所述的文库，其中所述细胞是细菌、酵母或哺乳动物细胞。


47.一种包含多核苷酸的非人动物，其中所述多核苷酸中的一者编码包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的抗体重链可变区，
其中所述HVR-H1包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式I)X1TFX2X3YX4IHWV(SEQIDNO:198)，其中X1是F或Y，X2是S或T，X3是D、G、N或S，并且X4是A、G或W；
(式II)YSIX1SGX2X3WX4WI(SEQIDNO:199)，其中X1是S或T，X2是H或Y，X3是H或Y，并且X4是A、D、G、N、S或T；和
(式III)FSLSTX1GVX2VX3WI(SEQIDNO:200)，其中X1是G或S，X2是A或G，并且X3是A、G、S或T；并且
其中所述HVR-H2包含根据选自由以下组成的组的式的氨基酸序列：
(式IV)LAX1IX2WX3X4DKX5YSX6SLKSRL(SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·P·罗，Y·李，杜方勇，
申请(专利权)人：天演药业公司，
类型：发明
国别省市：开曼群岛;KY