一种食品中多肽的MALDI-TOF检测方法技术

本发明专利技术公开了一种应用MALDI‑TOF检测食品中多肽分布的测定方法。该方法包括将多肽从食品基质中提取出来，排除干扰物质，利用MALDI‑TOF MS检测获得到食品中多肽的分布情况，质谱工作条件为正离子模式下检测，337nmN

A method of MALDI-TOF detection for polypeptide in food

【技术实现步骤摘要】
一种食品中多肽的MALDI-TOF检测方法
本专利技术属于化学物质检测
，具体涉及一种用于检测食品中多肽的MALDI-TOF检测方法。
技术介绍
肽是一类源于蛋白质的具有多种生物活性的化合物，含有丰富的信息，可以用来寻找生物体的差异标志物。作为生命过程的调控者和指示者，多肽还与生物体的健康状况息息相关，经常具有特定的功能，调节生理代谢，还可以作为蛋白活性、降解和变性的指示者。生物体中的许多生理功能也由肽介导，充当神经递质，激素或抗生素。许多天然食品蛋白质经体外或消化道酶水解后，释放出的一些肽分子因拥有某种特殊结构而具有一些有益的生物活性，如降血压、抗氧化、抑菌等。基质辅助激光解吸电离(MALDI)是20世纪80年代发展起来的一种用于质谱分析的电离化技术，其独特的软电离技术使得利用质谱分析非挥发性和热不稳定性的生物大分子成为可能，在对大分子的分析和检测方面获得了良好应用。加之其灵敏度、分辨率及精确度高，且检测迅速，样品用量极少，最低检测线低(至pmol)，使得质谱法迅速成为测定生物大分子最有发展前景的工具之一。MALDI通常与无质量检测上限的飞行时间质谱(TOF-MS)联用，广泛应用于对蛋白质的分析鉴定。相较于其他质谱而言，MALDI对于盐浓度和常用缓冲液的容耐性显著增加，使得样品的前处理步骤更加简单快捷；靶板样点位众多，可以快速检测多个样点，具有高通量筛选的特性。
技术实现思路
本专利技术提供了一种食品中多肽的MALDI-TOF检测方法。该检测方法的建立有利于为食品的营养评判、产地溯源鉴定、成分掺假及质量过程控制的快速检测提供新的方向。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种食品中多肽的检测方法，包括如下步骤：将食品中多肽提取制成供试品溶液，应用MALDI-TOFMS检测得到多肽分布的检测结果，工作方法为：样品溶液与基质溶液按照1:1比例充分混合，干燥结晶，N2激光照射，激光波长337nm，检测范围0-10kDa，正离子模式下检测，脉冲离子引出250ns。作为优选，MALDI-TOF工作模式为线性模式。在本专利技术提供的一些实施例中，测定工作模式为反射正离子模式。在本专利技术提供的另一些实施例中，测定工作模式为线性正离子模式。作为优选，MALDI-TOF使用靶板为AnchorChip靶板，GroundSteel靶板。作为优选，进样前点样方法为干燥液滴法，薄层法。在本专利技术提供的一些实施例中，点样方法选择干燥液滴法，将1μL样品溶液与1μL基质溶液反复吸打混匀，取混合液1μL点于靶上，待其自然干燥结晶。在本专利技术提供的另一些实施例中，点样方法选择先样品后基质的薄层法，先将1μL样品溶液点在靶板上，待其干燥成膜后，再将1μLCHCA基质溶液点在干燥的样品上，自然干燥。作为优选，MALDI-TOF的激光能量设定为50-70％。在本专利技术提供的一些实施例中，MALDI-TOF的激光能量为60％。在本专利技术提供的另一些实施例中，MALDI-TOF的激光能量为70％。作为优选，MALDI-TOF的信号放大倍数设定为20-40倍，增益电压设定为2859V-2960V。在本专利技术提供的一些实施例中，信号放大倍数为20倍，增益电压为2859V。在本专利技术提供的另一些实施例中，信号放大倍数为40倍，增益电压为2960V。本专利技术所述的基质CHCA溶液，使用TA50溶液配制，即50％的乙腈水溶液与0.1％的三氟乙酸溶液按照1:1比例混合所得溶液。本专利技术所述的多肽供试品溶液，是对食品经过一定步骤的提取得到的。在本专利技术提供的一些实例中，液体食品用含有0.1％三氟乙酸的乙腈沉淀蛋白后，震荡10min，4℃下以10000rmp/min条件下离心15min，取其上清液，得到多肽待测液。在本专利技术提供的另一些实例中，固体食品粉碎后分散在0.01mol/L的Tris-HCl溶液中，pH调至8.5，再用10％三氯乙酸沉淀蛋白，离心后取其上清液，使用ZipTipC18微量层析柱对样品进行净化脱盐处理，经0.1％三氟乙酸溶液淋洗去除杂质，最后经50％的乙腈溶液洗脱，得到所述的多肽待测液。本专利技术提供了一种食品中多肽的检测方法。该多肽的检测方法包括将食品中多肽提取制成供试品溶液，应用MALDI-TOFMS检测得到食品多肽的检测结果。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术食品多肽的检测方法对各供试品的前处理方法简单，避免了传统液相或液质方法中复杂样品除杂、分离纯化等复杂操作与繁琐步骤，对样品杂质具有较高容耐性，特征成分保留完整，且供试品溶液稳定性良好。(2)本专利技术建立的检测方法灵敏度好，精密度高，检测范围广，检测用时极短，信息量较大，且由于其特殊的软电离技术，不会产生分子碎片，所得结果多为分子离子峰，分析方法简单。(3)本专利技术靶板载点数目众多，可一次性检测多个样品，具有高通量特性，有利于实际应用中的快速检测。具体实施方式为使本发的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述。本专利技术公开了一种应用MALDI-TOFMS得到食品中多肽分布的检测方法。实施例1：一种应用MALDI-TOFMS检测牛奶中多肽分布的方法，包括如下步骤：牛奶样品为市购袋装超高温瞬时灭菌奶。(1)CHCA基质溶液配制：称取4mgCHCA样品溶于1mLTA50溶液中，超声5min，涡旋震荡使其完全溶解。(2)供试品溶液制备：将牛奶与含有0.1％三氟乙酸的乙腈按1:3比例混合，摇床震荡10min，在10000r/min，4℃环境中离心15min，取上清液测定。(3)选择AnchorChip靶板，取1μL样品溶液与1μL基质溶液于离心管中，用移液器反复吸打混匀，吸取1μL混合液点于靶上自然干燥(4)质谱条件：选择反射正离子工作模式，N2激光能量设定60％，信号放大倍数20倍，增益电压2859V，检测范围0-6kDa，基质抑制0-500Da。手动选择样点进行测定，选择结晶区域明显且均匀的位置进行激光照射，待激光停止后保存谱图。实施例2：一种应用MALDI-TOFMS检测小麦中多肽分布的方法，包括如下步骤：小麦样品来自新疆农业科学院。(1)CHCA基质溶液配制：称取4mgCHCA样品溶于1mLTA50溶液中，超声5分钟，涡旋震荡使其完全溶解。(2)供试品溶液制备：小麦种子经粉碎机粉碎后过80目筛得到小麦粉。称取一定质量的小麦面粉与正己烷涡旋混合，5000r/min、4℃离心10min得到脱脂小麦粉。将脱脂小麦粉与pH调至8.5的0.01mol/LTris-HCl溶液混合，料水比为20：1mL/g，在25℃下磁力搅拌2h进行提取。之后加入10％三氯乙酸溶液沉淀蛋白，最后在4℃、10000r/min条件下离心15本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种食品中多肽的MALDI-TOF检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n将多肽从食品中提取制成样品溶液，采用MALDI-TOF MS检测获得食品中多肽的检测结果，检测条件为：/n样品溶液与基质溶液充分混合，室温下自然干燥后进样，337nmN

【技术特征摘要】
1.一种食品中多肽的MALDI-TOF检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
将多肽从食品中提取制成样品溶液，采用MALDI-TOFMS检测获得食品中多肽的检测结果，检测条件为：
样品溶液与基质溶液充分混合，室温下自然干燥后进样，337nmN2激光照射，能量设定50％-70％，正离子工作模式下检测，脉冲离子引出250ns。


2.根据权利要求1所述的食品中多肽的MALDI-TOF检测方法，其特征在于，基质溶液使用TA50，即50％的乙腈水溶液与0.1％的三氟乙酸溶液按照1:1比例混合所得溶液。


3.根据权利要求1所述的食品中多肽的MALDI-TOF检测方法，其特征在于，检测范围在0-10kDa。


4.根据权利要求1所述的食品中多肽的MALDI-TOF检测方法，其特征在于，工作模式为反射正离子模式或线性正离子模式。


5.根据权利要求1所述的食品中多肽的MALDI-TOF检测方法，其特征在于，基质溶液与样品溶液按照1:1的比例混合。


6.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊平，马玉敏，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12