一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法技术

本发明专利技术提供一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法，属于医药技术领域，所述方法包括：配制引物混合液，测量并记录引物混合液的初始荧光值S

A method to compare the biocompatibility of different liquid preparations

【技术实现步骤摘要】
一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法
本专利技术属于医药
，具体为一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法。
技术介绍
常用的液体制剂主要包括疫苗、药品、医疗器械的试剂，以及生物制品等，通常用管、瓶、袋或专用模具制作成的包材来盛装。这些液体制剂的主要成分包括蛋白、核酸、脂肪以及其他化学物质，因其本身存在固有的不稳定性和脆弱性，极易受到外界因素的影响，如温度、内包材、光照、微生物、酶等，易发生分解、降解或化学反应，最终导致其生物试剂的功能被破坏，无法发挥试剂盒应有的性能。目前针对液体制剂包材常用的检测方式包括微生物检测、热源检测、洁净度检测、酶活检测等，这些检测方式能够对相应的指标起到严格的把控。但是，即使能够通过这些检测，在实际使用过程中，也仍然出现各种因保存在其中的液体制剂性能降低甚至失效的质量问题。这种情况说明，现有的常规检测方法并不能有效地防止包材对液体制剂的影响。包材的主要成分为聚氯乙烯(PVC)、聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚酯树脂(PET)等，本身具有优良的耐酸耐碱、抗腐蚀等优良特性，难以和生物大分子发生反应。但加工商在进行注塑时，为了保证加工过程的顺利、物理上的强度或柔韧性，或为了增加美观程度等，往往会加入脱模剂、增塑剂、热稳定剂、色素等多种添加剂，而这些添加剂对液体制剂的影响，常规的微生物检测、热源检测、洁净度检测等，都无法进行验证。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法，利用引物混合液被降解后发生的荧光变化值以及对扩增效率的影响来评估导致荧光变化的因素，解决现有的常规的包材检测方法无法有效把控其生物相容性的问题。本专利技术目的通过以下技术方案来实现：一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法，所述方法包括：配制引物混合液，测量并记录引物混合液的初始荧光值S0，将引物混合液装入对照包材和待测包材中，在一定温度下放置一段时间后测量荧光值S1，然后从各个包材中分别取一定体积的引物混合液，分别加入到PCR扩增体系中扩增，通过扩增得到的CT值或荧光值S0和S1的比对，可比较待测包材之间的生物相容性或对照包材和待测包材的生物相容性。本专利技术所适用包材为直接与生物液体试剂相接触的任何包材，如管(EP管，点样管，试剂管)，瓶，袋等均适用。进一步，根据扩增得到的CT值计算△CT＝|CT待测-CT对照|，当△CT≥CT阈值时，则CT值小的包材的生物相容性较好；当△CT﹤CT阈值时，则计算各个包材的荧光变化值△S＝|S1-S0|，△S值小的包材生物相容性较好。进一步，所述CT阈值为CT值的阈值，其取值范围为1～10。优选为1、2、3、4。同一种试剂进行相同模板的扩增，扩增曲线进入指数期的拐点(CT值)基本都是接近的数值，相差不会大于10。进一步，所述引物混合液的浓度为0.1μM～100μM。引物混合液为引物溶解稀释后得到的溶液。进一步，所述引物混合液为包括上游引物和下游引物的混合液，其中至少有一条引物带有荧光标记。进一步，所述荧光标记的基团为FAM、HEX、ROX、CY3、CY5、TET、TexasRed、VIC、TAMRA、NED、tripleSH、JOE、OregonGreen、PacificBlue、LightCycler中的一种或几种。进一步，所述放置温度为-30～60℃，优选为16～40℃；所述放置时间为0.1～30天，优选为1～7天。采用市面常用的荧光定量PCR仪进行荧光值的检测和PCR的扩增，优选使用ABI7300/7500进行荧光值的测定。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术方法可用于不同包材个体的比较或不同材料的包材的生物相容性的比较，也可用于不同批次的相同类型的包材的比较，更可以用于检测一个批次包材内不同包材个体的批内差异。若企业或实验室按照历史使用数据，将部分已知性能的包材设置为合格对照或不合格对照，还可以作为检验未知批次包材的检验方法。附图说明图1为本专利技术方法的流程及判断示意图；具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1本实施例以某公司生产的两个不同批次0.5mL试剂管为例判断比较其生物相容性，以成都博奥晶芯现使用的0.5mL试剂管为对照试剂管：1)设计引物并进行合成溶解定量；引物信息如表1：表1引物信息引物名称序列信息(5’→3’)溶解定引物ATGCACGAGTTGGGTGAGTTTGGGTGGACTGCTACATTGGCC50μM引物BTAMARA-CACGCTATCACGTTAGACTCGAGGCTTGTCCTTGTGC50μM2)配制引物混合液作为试剂管生物相容性测试溶液；配置表如表2：表2引物混合液配制名称单人份配制量(μL)理论用量100份(μL)引物A0.0080.8引物B0.1616纯化水12.3321233.2Total12.512503)方案测试：配好引物混合液之后，取12.5μL进行荧光信号值测定，信号值为S0，再取50μL引物混合液加入到两个批次的待测试剂管和对照试剂管中，每个批次6管，33℃放置1天；从各个试剂管取12.5μL进行荧光信号值测定，信号值为S1；再从各个试剂管中分别取12.5μL的引物混合液，分别加入到PCR扩增体系中同时扩增。扩增体系如下表3：表3PCR扩增体系配制ABI7300PCR扩增：设置扩增程序如下表4，进行PCR扩增。表4ABI7300PCR扩增程序选择绝对定量模式，SYBRGreen、TAMRA染料，同时选择SYBR、TAMRA通道，并将荧光通道名称改为SYBR、TAMRA，荧光采集点选择70℃、45s。4)结果数据统计分析反应完成后，对CT值和信号值进行统计。判定标准如下：△CT＝|CT待测-CT对照|，当△CT≥CT阈值时，则CT值小的包材的生物相容性好，当△CT<CT阈值时，则计算荧光变化值△S＝|S1-S0|，△S小的包材生物相容性更好，本实验CT阈值为3。结果统计如下表5，其中S0为38.2：表5实验结果统计5)按照以上方案结果，可判断两批待测试剂管的CT值均满足△CT<CT阈值，则计算荧光变化值△S＝|S1-S0|，其中S0为38.2，经本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法，其特征在于，所述方法包括：配制引物混合液，测量并记录引物混合液的初始荧光值S

【技术特征摘要】
1.一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法，其特征在于，所述方法包括：配制引物混合液，测量并记录引物混合液的初始荧光值S0，将引物混合液装入对照包材和待测包材中，在一定温度下放置一段时间后测量荧光值S1，然后从各个包材中分别取一定体积的引物混合液，分别加入到PCR扩增体系中扩增，通过扩增得到的CT值或荧光值S0和S1的比对，可比较待测包材之间的生物相容性或对照包材和待测包材的生物相容性。


2.如权利要求1所述一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法，其特征在于，根据扩增得到的CT值计算△CT＝|CT待测-CT对照|，当△CT≥CT阈值时，则CT值小的包材的生物相容性较好；当△CT﹤CT阈值时，则计算各个包材的荧光变化值△S＝|S1-S0|，△S值小的包材生物相容性较好。


3.如权利要求2所述一种比较不同液体制剂包材生物相容性的方法，其特征在于，所述CT阈值为CT值的阈值...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟禹，张冠斌，杨群，邓杰，
申请(专利权)人：成都博奥晶芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51