包含MDA-7/IL-24蛋白的组合物和使用方法技术

在各个方面，本公开提供了预防患癌受试者的骨转移的方法，以及用于该方法的组合物和试剂盒。在各个方面，本公开提供了治疗患癌受试者的骨转移的方法，以及用于该方法的组合物和试剂盒。在实施方式中，组合物包含MDA‑7/IL‑24蛋白。

Composition containing mda-7 / IL-24 protein and method of use

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含MDA-7/IL-24蛋白的组合物和使用方法相关申请本申请要求2017年10月27日提交的美国临时申请号62/577,932和2018年6月21日提交的美国临时申请号62/687,905的权益，其全部内容通过引用并入本文并用于所有目的。序列表写于文件053151-503001WO_Sequence_Listing_ST25.txt中的序列表(创建于2018年10月25日，5,694字节，机器格式IBM-PC，MS-Windows操作系统)通过引用并入本文。
技术介绍
对于许多恶性肿瘤，死亡率源自广泛转移，例如向骨转移。骨转移还与严重的发病率、疼痛和功能障碍有关。目前尚无单一或组合的治疗方法可有效地降低发病率或治愈骨转移。前列腺癌(PC)是影响全世界男性的最常见的癌症之一，其具有很强的骨转移倾向，传统治疗方法难以治疗(1)。目前，晚期PC不可治愈，导致显著的疾病发病率和死亡率(2)。骨转移开始于肿瘤细胞向骨扩散、粘附骨髓细胞、渗透/侵入骨髓至矿物质基质以及生长微转移病灶(3)。骨骼中癌细胞的定殖(colonization)受到多种因素的调节，这些因素决定了癌细胞与骨髓(特别是成骨细胞和破骨细胞)结合和交流的程度，而成骨细胞和破骨细胞是肿瘤骨塑建(bonemodeling)的两个主要成分(4)。了解影响这一多步过程和相关信号通路的分子因素对于设计抑制和治疗骨转移的有效疗法仍然至关重要。
技术实现思路
鉴于前述，需要预防和治疗癌症的骨转移的改进方法。本公开提供了解决此需求并同时提供附加益处的方法和组合物。在一些方面，本公开提供了一种预防患癌受试者中向骨转移的方法。在一些方面，本公开提供了一种治疗患癌受试者的骨转移的方法。在实施方式中，该方法包括向受试者施用有效量的包含MDA-7/IL-24蛋白的组合物。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白为经纯化的蛋白。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白为成熟蛋白。在实施方式中，施用包括向所述受试者的骨骼施用。在实施方式中，癌症为前列腺癌。在实施方式中，前列腺癌包含癌细胞，相对于正常前列腺细胞，所述癌细胞的Mcl-1、RANKL、Bcl-2、Bcl-xL和Akt中的一种以上表达增加。在实施方式中，组合物还包含Mcl-1抑制剂，例如BI-97D6。在实施方式中，该组合物还包含磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂，例如LY294002。在实施方式中，有效量为对原代骨髓细胞或正常原代人前列腺上皮细胞基本上无毒的量。在实施方式中，有效量为抑制破骨细胞分化的量。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白包含与SEQIDNO：3具有至少90％序列同一性(例如，至少95％序列同一性)的氨基酸序列。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白能够活化受试者癌细胞的IL-20/IL-22受体复合物。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白包含SEQIDNO：3的氨基酸序列。在一些方面，本公开提供了一种组合物。在实施方式中，组合物包含MDA-7/IL-24蛋白并包含Mcl-1抑制剂和PI3K抑制剂中的一种或两种。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白为经纯化的蛋白。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白为成熟蛋白。在实施方式中，组合物包含Mcl-1抑制剂(例如，BI-97D6)。在实施方式中，组合物包含PI3K抑制剂(例如，LY294002)。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白包含与SEQIDNO：3具有至少90％序列同一性(例如，至少95％序列同一性)的氨基酸序列。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白能够活化癌细胞的IL-20/IL-22受体复合物。在实施方式中，MDA-7/IL-24蛋白包含SEQIDNO：3的氨基酸序列。在实施方式中，组合物还包含药学上可接受的赋形剂。在实施方式中，组合物用于预防或治疗患癌受试者的骨转移。在实施方式中，癌症为前列腺癌。在实施方式中，前列腺癌包含癌细胞，相对于正常前列腺细胞，所述癌细胞的Mcl-1、RANKL、Bcl-2、Bcl-xL和Akt中的一种以上表达增加。在一些方面，本公开提供了本文所述的组合物在药物生产中的用途。在实施方式中，药物用于预防或治疗患癌受试者的骨转移。在实施方式中，药物根据本文所述的方法使用。在一些方面，本公开提供了一种试剂盒。在实施方式中，试剂盒包含本文所述的MDA-7/IL-24蛋白并包含本文所述的Mcl-1抑制剂和PI3K抑制剂中的一种或两种。附图说明图1A显示了用于产生有His标签的MDA-7/IL-24蛋白的示例方法的示意图。图1B显示了证实MDA-7/IL-24蛋白产生的示例蛋白质印迹。图1C是显示了通过MTT测定法测量MDA-7/IL-24蛋白对PC3-ML细胞增殖的影响的示例结果的柱状图。这些结果表明，MDA-7/IL-24蛋白显著抑制细胞增殖。图1D显示了一个示例蛋白质印迹，显示了相对于未经处理的对照(“对照”)，用MDA-7/IL-24蛋白处理的细胞(“MDA-7”)中的下游MDA-7/IL-24信号级联分子p27、Beclin-1和BiP/GRP78的表达上调。EF1α表示上样对照。图1E是显示了用不同前列腺癌细胞(一式三份)进行的集落形成测定的示例结果的柱状图，其比较了用MDA-7/IL-24蛋白处理的细胞(“MDA-7”)和未经处理的对照(“对照”)。大约铺板200个细胞，用His-MDA-7/IL-24处理，处理后2周，用结晶紫染色。计数集落数量并绘制数据。数据表示两次独立实验的平均值±标准差；**，P<0.01；***，P＜0.001vs对照。图2A-E显示了MDA-7/IL-24蛋白的抗转移活性和对破骨细胞分化的抑制。图2A提供了显示体内骨转移测定(评估His-MDA-7对骨转移发展的影响)的示例结果的图像，其中，经处理的小鼠(“MDA-7”)每周两次接受5mg/kg的His-MDA-7蛋白，持续3周(每组n＝5)。图2B是定量图2A的小鼠中荧光素酶强度的柱状图。图2C是显示MDA-7/IL-24蛋白处理对患癌小鼠存活的增强作用的示例存活图。数据表示两个独立实验的平均值±标准差：**，P<0.01vs对照。图2D和2E是比较对照和经MDA-7/IL-24处理的小鼠的骨髓细胞中的破骨细胞数量(D)和破骨细胞活性(E)的柱状图。每组重复五次，数据表示两次独立实验的平均值±标准差；*，P<0.05；***，P＜0.001vs对照。图3A-C显示了MDA-7/IL-24蛋白对RAW264.7细胞中信号级联反应的示例影响。细胞未经处理(“C”)或经指定试剂处理。试剂包括：MDA-7/IL-24蛋白(“MDA-7”；10μg/mL)、核因子κB配体的受体激活剂(“RANKL”；100ng/mL)、LY294002(“LY”；10μmol/L)和编码Akt的组成型活性形式的质粒(“MYR-Akt”)。磷酸化-GSK3β(phosphor-GSK3β)、NFATc1和Mcl-1的表达随组成型活性A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预防患癌受试者的骨转移的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的包含MDA-7/IL-24蛋白的组合物。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171027 US 62/577,932;20180621 US 62/687,9051.一种预防患癌受试者的骨转移的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的包含MDA-7/IL-24蛋白的组合物。


2.一种治疗患癌受试者的骨转移的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的包含MDA-7/IL-24蛋白的组合物。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述MDA-7/IL-24蛋白为经纯化的蛋白。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述MDA-7/IL-24蛋白为成熟蛋白。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，所述施用包括向所述受试者的骨施用。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述癌症为前列腺癌。


7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述前列腺癌包含癌细胞，相对于正常前列腺细胞，所述癌细胞的Mcl-1、RANKL、Bcl-2、Bcl-xL和Akt中的一种以上表达增加。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中，所述组合物还包含Mcl-1抑制剂。


9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述Mcl-1抑制剂是BI-97D6。


10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，所述组合物还包含磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂。


11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述PI3K抑制剂是LY294002。


12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，所述有效量为对原代骨髓细胞或正常原代人前列腺上皮细胞基本上无毒的量。


13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中，所述有效量为抑制破骨细胞分化的量。


14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，所述MDA-7/IL-24蛋白包含与SEQIDNO：3具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。


15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述MDA-7/IL-24蛋白包含与SEQIDNO：3具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。


16.根据权利要求14或15所述的方法，其中，所述MDA-7/IL-24蛋白能够活化所述受试者的癌细胞的IL-20/IL-22受体复合物。


17.根据权利要求14所述的方法，其中，所述MDA-7/IL-24蛋白包含SEQIDNO：3的氨基酸序列。


18.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·B·菲舍尔，A·K·普拉丹，S·K·达斯，L·埃姆达德，
申请(专利权)人：弗吉尼亚联邦大学，
类型：发明
国别省市：美国;US