II类V型CRISPR蛋白CeCas12a及其在基因编辑的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医学领域，具体涉及本发明专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种来自于Coprococcus eutactus细菌中的II类V型CRISPR蛋白CeCas12a及其应用。所述CeCas12a的氨基酸序列如SED ID NO.1所示，其编码核苷酸序列如SED ID NO.2所示。本发明专利技术首次在Coprococcus eutactus菌株中鉴定出具有基因编辑效应的II类V型CRISPR蛋白CeCas12a；所述CeCas12a能够在crRNA的介导下定点对原核生物和真核生物基因组进行基因编辑，CeCas12a的发现进一步扩大了基因编辑工具的种类，对基础科研和临床治疗具有十分重要的作用。

Class II V CRISPR protein cecas12a and its application in gene editing

【技术实现步骤摘要】
II类V型CRISPR蛋白CeCas12a及其在基因编辑的应用
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种来自于Coprococcuseutactus细菌中的II类V型CRISPR蛋白Cas12a，命名为CeCas12a，在基因编辑中的应用。
技术介绍
自2013年以来，基因编辑技术取得了突破性进展，此项技术已经在基础科学研究、医药、临床、生物技术等许多领域引起了新的变革。除了具有代表性的Cas9系统之外，Cas12，又名Cpf1，作为又一种被发现的具有基因编辑效应的CRISPR系统新成员，极大的扩大了基因编辑系统靶点的可编辑范围，相比于Cas9系统，Cas12a所具有的加工前提RNA的功能，为其介导多基因编辑提供了相比与Cas9系统更为便捷高效的编辑能力。除此之外，相比于Cas9的向导RNA，Cas12a的向导RNA组成更为简单，设计更为方便。2015年，张峰团队首次发现了Cas9系统之外的另外一种具有基因编辑能力的新成员，Cas12a，又名Cpf1，将其划分到CRISPR系统2类V型中。相比于Cas9系统，Cas12a的编辑效率与Cas9的效率相当，在有些靶点低于Cas9。Cas12a的脱靶率极低，相比于Cas9脱靶率高的特性，Cas12a是一种安全的基因编辑工具。Cas12a在切割之后形成粘性末端，而Cas9形成平末端，已有研究表明，Cas12a切割之后的粘性末端相比于Cas9的平末端而言，更容易发生同源重组修复，这也为基因的定点插入和修复提供了更好的工具。在向导RNA的加工方面，Cas12a具有明显的优势，仅仅只需要Cas12a本身就能够完成对前提RNA的加工，而Cas9系统则需要RNaseIII的加工，这极大地促进Cas12a在多基因编辑上的应用。在PAM的识别上，Cas12a识别5’-TTTN-3’或5’-KYTV-3’，Cas9则识别5’-NGG-3’。因此，Cas12a作为一种新型基因编辑工具，与Cas9系统一道，为科学研究和疾病的治疗提供了有力的工具。基于对目前已有的Cas12a的研究，为应对将来各种情况下的基因编辑事件，发现更多的具有一定特性的Cas12a是一件具有重要意义的事情。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，目的在于提供一种来自于Coprococcuseutactus细菌中的II类V型CRISPR蛋白CeCas12a及其在基因编辑中的应用。为实现上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案为：一种来自于Coprococcuseutactus细菌中的II类V型CRISPR蛋白CeCas12a，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。上述方案中，所述CeCas12a识别的PAM序列为TTTV、TCTA、TTCA、或CTTA，更为优选的PAM序列为TTTV，所述V表示A、C、或G。用于编辑蛋白CeCas12a氨基酸序列的基因，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。上述CeCas12a在基因编辑中的应用。上述CeCas12a在原核生物基因编辑中的应用。上述CeCas12a在真核生物基因编辑中的应用。上述CeCas12a在体外基因编辑中的应用。本专利技术所述蛋白CeCas12a的氨基酸序列如下：(1)原核细胞中：NNNTNNSFEPFIGGNSVSKTLRNELRVGSEYTGKHIKECAIIAEDAVKAENQYIVKEMMDDFYRDFINRKLDALQGINWEQLFDIMKKAKLDKSNKVSKELDKIQESTRKEIVKIFSSDPIYKDMLKADMISKILPEYIVDKYGDAASRIEAVKVFYGFSGYFIDFWASRKNVFSDKNIASAIPHRIVNVNARIHLDNITAFNRIAEIAGDEVAGIAEDACAYLQNMSLEDVFTGACYGEFICQKDIDRYNNICGVINQHMNQYCQNKKISRSKFKMERLHKQILCRSESGFEIPIGFQTDGEVIDAINSFSTILEEKDILDRLRTLSQEVTGYDMERIYVSSKAFESVSKYIDHKWDVIASSMYNYFSGAVRGKDDKKDAKIQTEIKKIKSCSLLDLKKLVDMYYKMDGMCLEHEATEYVAGITEILVDFNYKTFDMDDSVKMIQNEHMINEIKEYLDTYMSIYHWAKDFMIDELVDRDMEFYSELDEIYYDLSDIVPLYNKVRNYVTQKPYSQDKIKLNFGSPTLANGWSKSKEFDNNVVVLLRDEKIYLAILNVGNKPSKDIMAGEDRRRSDTDYKKMNYYLLPGASKTLPHVFISSNAWKKSHGIPDEIMYGYNQNKHLKSSPNFDLEFCRKLIDYYKECIDSYPNYQIFNFKFAATETYNDISEFYKDVERQGYKIEWSYISEDDINQMDRDGQIYLFQIYNKDFAPNSKGMQNLHTLYLKNIFSEENLSDVVIKLNGEAELFFRKSSIQHKRGHKKGSVLVNKTYKTTEKTENGQGEIEVIESVPDQCYLELVKYWSEGGVGQLSEEASKYKDKVSHYAATMDIVKDRRYTEDKFFIHMPITINFKADNRNNVNEKVLKFIAENDDLHVIGIDRGERNLLYVSVIDSRGRIVEQKSFNIVENYESSKNVIRRHDYKGKLVNKEHYRNEARKSWKEIGKIKEIKEGYLSQVIHEISKLVLKYNAIIVMEDLNYGFKRGRFKVERQVYQKFETMLINKLAYLVDKSRAVDEPGGLLKGYQLTYVPDNLGELGSQCGIIFYVPAAYTSKIDPVTGFVDVFDFKAYSNAEARLDFINKLDCIRYDASRNKFEIAFDYGNFRTHHTTLAKTSWTIFIHGDRIKKERGSYGWKDEIIDIEARIRKLFEDTDIEYADGHNLIGDINELESPIQKKFVGELFDIIRFTVQLRNSKSEKYDGTEKEYDKIISPVMDEEGVFFTTDSYIRADGTELPKDADANGAYCIALKGLYDVLAVKKYWKEGEKFDRKLLAITNYNWFDFIQNRRF(2)真核细胞中：PKKKRKVNNNTNNSFEPFIGGNSVSKTLRNELRVGSEYTGKHIKECAIIAEDAVKAENQYIVKEMMDDFYRDFINRKLDALQGINWEQLFDIMKKAKLDKSNKVSKELDKIQESTRKEIVKIFSSDPIYKDMLKADMISKILPEYIVDKYGDAASRIEAVKVFYGFSGYFIDFWASRKNVFSDKNIASAIPHRIVNVNARIHLDNITAFNRIAEIAGDEVAGIAEDACAYLQNMSLEDVFTGACYGEFICQKDIDRYNNICGVINQHMNQYCQNKKISRSKFK本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种来自于Coprococcus eutactus细菌中的II类V型CRISPR 蛋白CeCas12a，其特征在于，所述CeCas12a的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种来自于Coprococcuseutactus细菌中的II类V型CRISPR蛋白CeCas12a，其特征在于，所述CeCas12a的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述蛋白CeCas12a，其特征在于，所述CeCas12a识别的PAM序列为TTTV、TCTA、TTCA、或CTTA，所述V表示A、C、或G。


3.用于编辑权利要求1所述蛋白CeCas12a的基因，其特征在于，其核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷雷，陈鹏，周进，万义彬，刘欢，宋广济，雷骏，王宏健，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42