一种沼泽红假单胞菌培养基及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物培养技术领域，具体涉及一种沼泽红假单胞菌培养基及其应用。其组成和配方包括，包括柠檬酸，牛肉膏，酵母膏，蛋白胨，乙酸钠，硫酸镁，硫酸亚铁，VB

A culture medium of Rhodopseudomonas palustris and its application

【技术实现步骤摘要】
一种沼泽红假单胞菌培养基及其应用
本专利技术属于微生物培养
，具体涉及一种沼泽红假单胞菌培养基及其应用。
技术介绍
沼泽红假单胞菌属于红螺菌科、红假单胞菌属，是目前研究和应用最广泛的一种光合细菌。光合细菌是地球上出现最早、自然界中普遍存在、具有原始光能合成体系的原核生物，是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。光合细菌广泛分布于自然界的土壤、水田、沼泽、湖泊、江海等处，主要分布于水生环境中光线能透射到的缺氧区。沼泽红假单胞菌是我国农业部允许使用的饲料级微生物之一，其制剂已被广泛应用于水产养殖、饲料添加剂、污水处理等多个领域,并取得巨大的经济、生态和社会效益。在水产养殖中，往鱼虾类养殖池中投入沼泽红假单胞菌，尤其在池塘深层底泥缺氧条件下，既能分解有机废物,又能降低水中硫化氢、氨浓度，保持水质的清洁；另外，由于沼泽红假单胞菌含有鱼、虾体内生长发育所需的活性物质和微量元素，包括蛋白质、氨基酸、B族维生素和辅酶Q等生物活性物质，它们是鱼虾体内酶、激素、生物活性物的激活剂或辅酶，可使酶及生物活性物的活性及含量发生变化从而促进鱼、虾生长发育，减少饲料用量；并且，沼泽红假单胞菌具有抗病和提高机体免疫力的作用，能有效防止水产生物生病。专利CN104388364A公开了一种海水光合细菌的发酵培养基，组分为氯化铵、酵母浸粉、蛋白胨、无水乙酸钠、磷酸铁及海水，其实施例中显示，培养6天后OD660nm为1.635(对光合细菌发酵产量多少一般用660nm下的吸光度值表示，即OD660nm。)；专利CN105199993公开了一种光合细菌培养基及其制备方法，组分为三水合乙酸钠、硫酸铵、碳酸氢钠、磷酸二氢钾、硫酸镁及水，采用本专利技术培养基培养，光合细菌OD660nm为2.2；专利CN107746821A公开了一种光合细菌培养基，组成为含碳有机物、氯化铵、酵母膏、蛋白胨、氯化镁、氯化钙、酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化锰、硫酸锌及蒸馏水，其实施例中显示，培养后OD660nm为2.8。由于关于对光合细菌高密度发酵配方的深入研究的文献资料有限，导致现有市售产品普遍存在有效活菌数低，杂菌多，产品稳定性差，保质期短等众多问题，限制了光合细菌在水产养殖中的应用。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术不足，提供了一种沼泽红假单胞菌培养基及其应用，通过配方优化，大大提高了沼泽红假单胞菌菌剂的品质，使得该菌剂有效活菌数高，颜色正，无分层，杂菌率低，品质稳定，保存效果好，将使用该培养基培养的沼泽红假单胞菌菌剂运用在水产养殖中取得了良好的效果。首先，本专利技术所述的沼泽红假单胞菌培养基，其组成和配方包括：柠檬酸0.75-1.25g/L，牛肉膏1.50-3.00g/L，酵母膏0.42-0.62g/L，蛋白胨1.50-2.00g/L，乙酸钠0.40-0.60g/L，硫酸镁0.25-0.50g/L，硫酸亚铁5.00-8.00mg/L，VB60.1-0.3mg/L，氯化钙0.10-0.30g/L，磷酸二氢钾0.10-0.25g/L，复合无机盐溶液0.5-1.0mL/L，溶剂为水，调节pH至6.8-7.0。所述的复合无机盐溶液中包括：EDTA0.5g/L,硫酸锌0.01g/L，硼酸0.03g/L，氯化锰0.003g/L，氯化钙0.02g/L，氯化铜0.001g/L，钼酸钠0.003g/L，溶剂为水。所述柠檬酸为含一个结晶水的柠檬酸，乙酸钠为含三个结晶水的乙酸钠，硫酸镁为无水硫酸镁，硫酸亚铁为含七个结晶水的硫酸亚铁，氯化钙为无水氯化钙，磷酸二氢钾为无水硫酸二氢钾。优选的，沼泽红假单胞菌培养基采用质量浓度为20％的氢氧化钠或氢氧化钾调节pH。优选的，培养基组分中的磷酸二氢钾、复合物无机盐溶液需要进行单独灭菌。专利技术人进一步利用本专利技术的培养基研究得到一种沼泽红假单胞菌菌剂的培养方法，技术方案如下：将沼泽红假单胞菌菌种接种在水产养殖沼泽红假单胞菌培养基中进行厌氧培养，接种量10-50％，光照强度3000-5000Lux，温度30-33℃，培养时间2-7天，颜色由浅红，红，逐渐变为红褐色即为培养成熟。本专利技术培养所选用的中安泽宏假单胞菌菌种均为常规市售菌种。该菌剂更为具体的制备步骤包括(1)菌种活化，(2)菌种培养，(3)扩大培养：(1)菌种活化：将菌种接种在透光试管培养基中活化，接种量30-50％，光照强度3000-5000Lux，30-33℃恒温密封培养3-5天，颜色由浅红、红、逐渐变为红褐色即为培养成熟；优选的，培养期间每天应摇晃转动试管至少1次，使沼泽红假单胞菌充分接受光照，利于生长。优选的，试管总装液量为90％。(2)种子培养：将步骤(1)活化好的菌种转接到透光培养容器进行培养，接种量30-50％，光照强度3000-5000Lux，30-33℃恒温密封培养2-4天，颜色由浅红、红、逐渐变为红褐色即为培养成熟，得到种子液；(3)扩大培养：将种子液接种到更大的培养容器中，接种量10-30％，培养条件：光照强度3000-5000Lux，控制温度30-33℃，密封培养5-7天。优选的，所有培养容器均采用化学灭菌法，具体为0.5‰次氯酸钠水溶液浸泡12-24小时或用75％酒精涮洗2遍；培养基中磷酸二氢钾、复合物无机盐溶液、其他剩余组分采用115℃，10min灭菌。采用上述方法及水产养殖专用沼泽红假单胞菌培养基生产的沼泽红假单胞菌菌体密度高，所获得菌液用纯水稀释20倍后OD660nm为0.460，有效活菌数可高达8.96*109个/mL。将其应用于水厂养殖，可使水体中的氨氮、亚硝酸盐含量快速降低，有效增加水体溶解氧，极大提高水产养殖的产量。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术培养基配方中硫酸亚铁及VB6的复合添加对菌种生长起着至关重要的作用，光合细菌处于厌氧条件下可在光能驱动下通过电子传递进行一种循环光和磷酸化，电子从菌绿素分子上逐出，经过辅酶Q、细胞色素bc1、铁硫蛋白和细胞色素bc1的循环式传递，重新被菌绿素接受，期间建立质子电动势和产生1个ATP，在此供应ATP的条件下，能使外源电子供体逆电子流产生还原力，促使光和磷酸化与Calvin循环相联系，固定二氧化碳，从而促使菌体生长繁殖。而本专利技术中硫酸亚铁及VB6能在光合细菌进行循环光合磷酸化的过程中作为有效果的外源电子供体逆电子流产生还原力，促使光和磷酸化与Calvin循环相联系，固定二氧化碳，从而使菌体大量生长繁殖，其次，硫酸亚铁的用量需适中，过量则亚铁离子可能形成硫化亚铁、铁氧化物等产物使菌剂颜色偏深；该配方生产的菌剂颜色正，无分层，发酵周期短，pH不升高，菌体对培养基利用彻底，有效抑制发酵期间藻类及杂菌的滋生。将配方生产的沼泽红假单胞菌菌剂应用于水厂养殖，可使水体中的氨氮、亚硝酸盐含量快速降低，有效增加水体溶解氧，极大提高水产养殖的产量。本专利技术培养基中减少含钠离子的有机物为碳源，并添加磷酸缓冲盐，使菌种在培养过程中pH变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种沼泽红假单胞菌培养基，其特征在于，其组成和配方包括：柠檬酸0.75-1.25g/L，牛肉膏1.50-3.00g/L，酵母膏0.42-0.62g/L，蛋白胨1.50-2.00g/L，乙酸钠0.40-0.60g/L，硫酸镁0.25-0.50g/L，硫酸亚铁5.00-8.00mg/L，VB

【技术特征摘要】
20191210 CN 20191126377191.一种沼泽红假单胞菌培养基，其特征在于，其组成和配方包括：柠檬酸0.75-1.25g/L，牛肉膏1.50-3.00g/L，酵母膏0.42-0.62g/L，蛋白胨1.50-2.00g/L，乙酸钠0.40-0.60g/L，硫酸镁0.25-0.50g/L，硫酸亚铁5.00-8.00mg/L，VB60.1-0.3mg/L，氯化钙0.10-0.30g/L，磷酸二氢钾0.10-0.25g/L，复合无机盐溶液0.5-1.0mL/L，溶剂为水，调节pH至6.8-7.0。


2.根据权利要求1所述的一种沼泽红假单胞菌培养基，其特征在于，所述的复合无机盐溶液中包括：EDTA0.5g/L,硫酸锌0.01g/L，硼酸0.03g/L，氯化锰0.003g/L，氯化钙0.02g/L，氯化铜0.001g/L，钼酸钠0.003g/L，溶剂为水。


3.根据权利要求1所述的一种沼泽红假单胞菌培养基，其特征在于，沼泽红假单胞菌培养基采用质量浓度为20％的氢氧化钠或氢氧化钾调节pH。


4.根据权利要求1所述的一种沼泽红假单胞菌培养基，其特征在于，培养基组分中的磷酸二氢钾、复合物无机盐溶液需要进行单独灭菌。


5.一种沼泽红假单胞菌菌剂的培养方法，其特征在于，培养方法包括：将沼泽红假单胞菌菌种接种在水产养殖沼泽红假单胞菌培养基中进行厌氧培养，接种量10-50％，光照强度3000-5000Lux，温度3...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨丹丹，吴文雷，徐泽平，张心青，杨传伦，马娜娜，张甲庆，陈振发，潘冬梅，
申请(专利权)人：黄河三角洲京博化工研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37