一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2及其制备方法，微生物菌剂M2由混合菌液、载体、腐殖酸、硫酸锌、硫酸亚铁以及硫酸钾组成，所述混合菌液由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HR15、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)HR37和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)HR55三种菌株按照体积比1:1:1配制的混合菌液，载体为鸡粪有机肥；三种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；其中，枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCC NO.19451；贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452。本发明专利技术的微生物菌剂M2对玉米茎基腐病的预防效果好，增产和促生效果显著。

A microbial agent m2 for controlling corn stalk rot and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2及其制备方法
本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一种用于玉米茎基腐病防治的微生物菌剂M2及其制备方法。
技术介绍
玉米是世界上重要的粮食作物，种植规模仅排在小麦之后。随着全球气候条件的变化、重茬连作、高密度栽培等，玉米田生态环境随之改变，土壤中病原菌的优势菌群结构发生改变，病残体的积累数量越来越大，有益微生物群落结构和数量也发生较大变化。这些因素导致玉米田土壤微生物群落结构失衡，玉米茎基腐病的发生日趋严重。玉米茎基腐病是由多种病原菌复合侵染引起的典型土传病害，是危害世界玉米生产的主要病害之一。一般情况下产量损失在10～25％，严重年份可以达到75％。抗性品种、化学种衣剂和增施钾肥是目前生产上的主要措施，但是品种选育时间较长，化学种衣剂的残留易污染生态环境，也会威胁人类健康，加重土壤的盐渍化，病原菌易产生抗药性。降低土壤中的病原菌数量与干扰其生长的土壤微生态环境是防治玉米茎基腐病的关键手段。因此，研发用于玉米茎基腐病的微生物菌剂对于粮食安全和玉米产业可持续发展具有重要的科学意义和应用价值。众所周知，土壤中存活着多种病原菌，其数量与活性影响着土壤微生物群落结构的稳定，土壤微生物生态环境的不平衡会会加重农作物土传病害的危害。研究表明，农艺措施和生物制剂对土壤微生物群落多样性以及种群组成的影响显著。微生物菌剂广泛用于改善土壤微生物的生态环境，达到防病、防虫、促生和增产效果。吕宁等研究发现枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)可湿性粉剂滴施后对棉花黄萎病防治效果明显，土壤真菌、细菌和放线菌的数量与物种丰度随着施药量的增加而显著增加。Chen等采用棘孢木霉菌(Trichodermaasperellum)颗粒剂在播种前与化肥混合施入土壤，对玉米茎腐病防效显著。但是目前可以用于玉米病害防治的微生物菌剂较少，有必要研发适用于玉米茎基腐病防治的微生物菌剂。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2及其制备方法，生产的微生物菌剂M2对玉米茎基腐病有较好防治效果。根据本专利技术的一个方面，提供了一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2，微生物菌剂M2由混合菌液、载体、腐殖酸、硫酸锌、硫酸亚铁以及硫酸钾组成，所述混合菌液由枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HR15、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)HR37和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)HR55三种菌株按照体积比1:1:1配制的混合菌液，载体为鸡粪有机肥；三种菌株保藏于均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；其中，枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCCNO.19453；萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCCNO.19451；贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCCNO.19452。可选择地，载体为鸡粪有机肥，鸡粪有机肥中含有少量氮、五氧化二磷以及氧化钾。可选择地，微生物菌剂M2包括混合菌液15L、腐殖酸2.75kg、硫酸钙(CaSO4·2H2O)160g、硫酸锌(ZnSO4)80g、硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)80g、硫酸钾(K2SO4)80g、鸡粪有机肥30kg，微生物菌剂M2中的芽孢杆菌的活菌数＞10亿CFU/g。根据本专利技术的另一个方面，提供了一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2的制备方法，包括以下步骤：(1)将枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55分别接种到斜面NA培养基上，30～37℃活化培养得到枯草芽孢杆菌HR15菌落、萎缩芽孢杆菌HR37菌落以及贝莱斯芽孢杆菌HR55菌落，所述斜面NA培养基为固体培养基。(2)将活化后的枯草芽孢杆菌HR15菌落、萎缩芽孢杆菌HR37菌落和贝莱斯芽孢杆菌HR55菌落分别接种到装有NA液体培养基中，在30～37℃条件下，200rpm/min振荡培养10～15h，得到枯草芽孢杆菌HR15种子发酵液，萎缩芽孢杆菌HR37种子发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55种子发酵液；(3)将步骤(2)中的枯草芽孢杆菌HR15种子发酵液，萎缩芽孢杆菌HR37种子发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55种子发酵液分别按照6％的接种比例接种到LB液体培养基的发酵罐中，30～37℃条件下，200rpm/min振荡培养48～72h得到枯草芽孢杆菌HR15发酵液、萎缩芽孢杆菌HR37发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55发酵液。(4)取步骤(3)中的枯草芽孢杆菌HR15发酵液、萎缩芽孢杆菌HR37发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55发酵液按照体积比1:1:1比例配制得到混合菌液，将混合菌液与腐殖酸、硫酸钙、硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸钾以及载体混合均匀，配制成微生物菌剂M2粉剂，低温保存。可选择地，步骤(1)中斜面NA培养基为肉汁胨培养基(NA)，包括牛肉膏0.3％，蛋白胨0.7％，NaCl0.3％，琼脂15～20g，pH7.2。可选择地，步骤(4)中载体为鸡粪有机肥。可选择地，防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2的制备方法，包括以下步骤：(1)将枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55分别接种到斜面NA培养基上，37℃活化培养得到枯草芽孢杆菌HR15菌落、萎缩芽孢杆菌HR37菌落以及贝莱斯芽孢杆菌HR55菌落，斜面NA培养基为固体培养基。(2)将活化后的枯草芽孢杆菌HR15菌落、萎缩芽孢杆菌HR37菌落和贝莱斯芽孢杆菌HR55菌落分别接种到装有NA液体培养基中，在37℃条件下，200rpm/min振荡培养12h，得到枯草芽孢杆菌HR15种子发酵液，萎缩芽孢杆菌HR37种子发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55种子发酵液；(3)将步骤(2)中的枯草芽孢杆菌HR15种子发酵液，萎缩芽孢杆菌HR37种子发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55种子发酵液分别按照6％的接种比例接种到LB液体培养基的发酵罐中，37℃条件下，200rpm/min振荡培养48h得到枯草芽孢杆菌HR15发酵液、萎缩芽孢杆菌HR37发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55发酵液。(4)取步骤(3)中的枯草芽孢杆菌HR15发酵液、萎缩芽孢杆菌HR37发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55发酵液按照体积比1:1:1比例配制得到混合菌液，向15L混合菌液中加入2.75kg腐殖酸、160g硫酸钙、80g硫酸锌、80g硫酸亚铁、80g硫酸钾、30kg鸡粪有机肥，混合均匀配制成微生物菌剂M2粉剂，低温保存。根据本专利技术的再一个方面，提供了一种微生物菌剂M2用于防治玉米茎基腐病的用途。本专利技术的有益效果是：本专利技术的微生物菌剂M2对玉米茎基腐病的预防效果在58.31％～65.8％，明显降低土壤中的病原菌丰度，增加土壤中真菌群落的多样性和均匀度；有效增加玉米田土壤中有机碳、有机质、硝态氮、全氮、全磷、有效磷和速效钾含量；提高玉米出苗率48.34％，增加玉米株高16.23％、提高玉米茎粗5.89％；增产效果显著，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2，其特征在于，所述微生物菌剂M2由混合菌液、载体、腐殖酸、硫酸锌、硫酸亚铁以及硫酸钾组成，所述混合菌液由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HR15、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)HR37和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)HR55三种菌株按照体积比1:1:1配制的混合菌液，所述载体为鸡粪有机肥；所述三种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；其中，所述枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCC NO.19453；所述萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCC NO.19451；所述贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCC NO.19452。/n

【技术特征摘要】
1.一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2，其特征在于，所述微生物菌剂M2由混合菌液、载体、腐殖酸、硫酸锌、硫酸亚铁以及硫酸钾组成，所述混合菌液由枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HR15、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)HR37和贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)HR55三种菌株按照体积比1:1:1配制的混合菌液，所述载体为鸡粪有机肥；所述三种菌株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2020年3月5日；其中，所述枯草芽孢杆菌HR15的保藏编号为CGMCCNO.19453；所述萎缩芽孢杆菌HR37的保藏编号为CGMCCNO.19451；所述贝莱斯芽孢杆菌HR55的保藏编号为CGMCCNO.19452。


2.如权利要求1所述的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2，其特征在于，所述载体为鸡粪有机肥，所述鸡粪有机肥中含有氮、五氧化二磷以及氧化钾。


3.如权利要求2所述的防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2，其特征在于，所述微生物菌剂M2包括混合菌液15L、腐殖酸2.75kg、硫酸钙160g、硫酸锌80g、硫酸亚铁80g、硫酸钾80g、鸡粪有机肥30kg，所述微生物菌剂M2中芽孢杆菌的活菌数＞10亿CFU/g。


4.一种防治玉米茎基腐病的微生物菌剂M2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将枯草芽孢杆菌HR15、萎缩芽孢杆菌HR37和贝莱斯芽孢杆菌HR55分别接种到斜面NA培养基上，30～37℃活化培养得到枯草芽孢杆菌HR15菌落、萎缩芽孢杆菌HR37菌落以及贝莱斯芽孢杆菌HR55菌落，所述斜面NA培养基为固体培养基；
(2)将活化后的枯草芽孢杆菌HR15菌落、萎缩芽孢杆菌HR37菌落和贝莱斯芽孢杆菌HR55菌落分别接种到装有NA液体培养基中，在30～37℃条件下，180～220rpm/min振荡培养12h，得到枯草芽孢杆菌HR15种子发酵液，萎缩芽孢杆菌HR37种子发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55种子发酵液；
(3)将步骤(2)中的枯草芽孢杆菌HR15种子发酵液，萎缩芽孢杆菌HR37种子发酵液和贝莱斯芽孢杆菌HR55种子发酵液分别按照6％的接种比例接种到的LB液体培养基中，30～37℃条件下，180～220rpm/min振荡培养48～72h得到枯草芽孢杆菌HR...

【专利技术属性】
技术研发人员：沙月霞，沈瑞清，朱建祥，杨卫东，邹金科，邢敏，马惠兰，
申请(专利权)人：宁夏农林科学院植物保护研究所宁夏植物病虫害防治重点实验室，
类型：发明
国别省市：宁夏;64