巨噬细胞在保护血管屏障中的应用以及卵巢癌腹水的预防、抑制和治疗制造技术

本发明专利技术属于妇科疾病诊断和治疗技术领域，公开了M2型巨噬细胞在保护血管屏障中的应用，以及卵巢癌腹水的预防、抑制和治疗。本发明专利技术通过研究M2型巨噬细胞重建受损的血管屏障的分子机制，发现M2型巨噬细胞通过抑制内皮细胞中VCAM‑1的表达，从而降低活性氧(ROS)水平和VE‑cadherin的磷酸化，保护血管屏障。另构建了卵巢癌动物模型，结合临床样本发现卵巢癌中巨噬细胞通过VLA‑4/VCAM‑1途径调节血管屏障，影响恶性腹水的发展，从而确认了一个新途径，为卵巢癌腹水的治疗提供了新的策略。

【技术实现步骤摘要】
巨噬细胞在保护血管屏障中的应用以及卵巢癌腹水的预防、抑制和治疗
本专利技术涉及妇科疾病诊断和治疗应用
，更具体的，涉及巨噬细胞在保护血管屏障中的应用，以及卵巢癌腹水的预防、抑制和治疗。
技术介绍
卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌，卵巢恶性肿瘤中以上皮癌(EOC)最为多见，对女性生命造成严重威胁。卵巢上皮癌占卵巢肿瘤的50～70％，由于缺乏早期诊断方法和早期症状，70％的患者在确诊为时处于晚期。恶性腹水是由癌症引起的腹腔积液，且上皮性卵巢癌比其他任何类型的肿瘤更易发生，主要是因为EOC可发生腹腔转移，44.1％的患者在诊断EOC时伴有腹水。恶性腹水的积聚是血管通透性增加、淋巴回流受阻的综合结果，这个复杂的过程涉及许多周围环境的改变。过去认为血管通透性主要由内皮细胞间的相互作用介导，即通过激活血管内皮生长因子或凝血酶、缓激肽等炎症因子下游途径，使内皮细胞膜上的VE-cad磷酸化和内化，从而破坏细胞粘附，增加血管通透性。然而，目前恶性腹水的治疗效果普遍不理想，因此，深入了解血管通透性的调节机制，可以为卵巢癌腹水的治疗提供新的策略。在EOC的肿瘤结节内和腹水中观察到大量的巨噬细胞浸润。有人认为肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)在肿瘤微环境中主要向M2亚型极化，这是TAMs促进肿瘤生长和血管生成的基础。针对TAMs的肿瘤治疗方案一定程度上可抑制肿瘤生长，但患者普遍出现颜面部水肿的副作用，提示巨噬细胞还有其他调节血管的功能有待发现。专利技术内容针对现有技术存在的上述技术问题，本专利技术首先提供了M2型巨噬细胞在保护血管屏障中的应用。本专利技术的第二个目的是在发现M2型巨噬细胞保护血管屏障的应用的基础上，考察M2型巨噬细胞对卵巢癌，特别是卵巢癌腹水生成的影响。本专利技术的目的是通过以下技术方案予以实现的：M2型巨噬细胞在保护血管屏障中的应用；具体的，体现在增强血管内皮细胞完整性，或者降低血管内皮细胞的通透性方面。M2型巨噬细胞在制备保护血管屏障的药物中的应用；具体的，体现在增强血管内皮细胞完整性，或者降低血管内皮细胞的通透性方面。本专利技术首先将M2型巨噬细胞和内皮细胞共培养，结果发现M2型巨噬细胞可以降低内皮细胞的通透性，由此确定了M2型巨噬细胞能够保护血管屏障。优选的，所述M2型巨噬细胞和血管内皮细胞直接接触。之后，本专利技术研究了M2型巨噬细胞保护血管屏障的机制，结果表明：M2型巨噬细胞通过下调表达VLA-4，抑制内皮细胞中VCAM-1的表达，从而降低活性氧(ROS)水平和VE-cadherin的磷酸化，以达到保护血管屏障的目的。优选的，M2型巨噬细胞与血管内皮细胞直接接触后，表达较低水平的VLA-4分子，并能够降低血管内皮细胞上VCAM-1的表达量，同时能够降低VE-cadherin的磷酸化程度。优选的，VE-cadherin的磷酸化程度的降低依赖于血管内皮细胞中的活性氧的产生。需要说明的是，本专利技术首先是从M2型巨噬细胞中发现了VLA-4分子的功能，专利技术人在后期实验中还在普通未极化的巨噬细胞上过表达了VLA-4分子，发现过表达了VLA-4分子的普通未极化的巨噬细胞同样也可以促进血管的通透性；因此通过抑制所有类型巨噬细胞中VLA-4分子的表达，均可保护血管屏障。本专利技术还提供一种用于降低内皮细胞通透性的药物，所述药物包括VLA-4或VCAM-1的抗体，或者VLA-4或VCAM-1的拮抗剂/抑制剂。本领域技术人员知道，卵巢癌腹水的存在与晚期卵巢浆液性癌(HGSOC)预后差有关，腹水的积聚是血管通透性增加、淋巴回流受阻的综合结果，这是一个复杂的过程，涉及到周围环境的功能改变，以前有研究证明血管周围巨噬细胞可以调节通透性，且不同极化亚型的巨噬细胞对血管通透性产生的影响显著不同。本专利技术首先研究了巨噬细胞介导的血管通透性的分子机制，发现M2型巨噬细胞能够增强血管的屏障作用，降低血管通透性。在这个发现的基础上，进一步找寻其与卵巢癌腹水的生成之间的联系，由此得出新的发现：在卵巢癌患者的腹水中，VLA-4和VCAM-1的表达水平与腹水量呈正相关；因此，本专利技术强调卵巢癌中恶性腹水的发展受M2型巨噬细胞的影响，M2型巨噬细胞通过VLA-4/VCAM-1途径调节血管屏障，从而减少卵巢癌腹水的积聚。因此，本专利技术还提供M2型巨噬细胞的应用在制备治疗/预防/抑制卵巢癌腹水生成的药物中的应用。另外，本专利技术实验研究发现VLA-4抗体治疗可以明显抑制卵巢癌小鼠腹水的形成，鉴于VLA-4和VCAM-1在巨噬细胞中的表达水平与患者腹水的形成有关，很有可能将VLA-4及VCAM-1的表达作为一个有价值的工具，为卵巢癌患者腹水的治疗提供新的策略。因此，本专利技术还提供VLA-4和/或VCAM-1作为卵巢癌患者腹水形成量的生物标志物的应用。其中，VLA-4和/或VCAM-1的表达水平与卵巢癌患者的腹水形成量呈正相关。本专利技术还提供一种用于治疗/预防/抑制卵巢癌腹水积聚的药物，所述药物能够增强所有类型巨噬细胞对血管屏障的保护作用。优选的，所述药物包括VLA-4或VCAM-1的抗体，或者VLA-4或VCAM-1的拮抗剂/抑制剂。本专利技术通过实验研究发现：M2型巨噬细胞通过下调VLA-4抑制内皮细胞的VCAM-1表达从而降低血管通透性，且卵巢癌动物模型中，抑制VLA-4可有效减少腹水，保护血管通透性。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术通过研究M2型巨噬细胞重建受损的血管屏障的分子机制，发现巨噬细胞通过抑制内皮细胞中VCAM-1的表达，从而降低活性氧(ROS)水平和VE-cadherin的磷酸化，保护血管屏障。另构建了卵巢癌模型，发现卵巢癌中巨噬细胞通过VLA-4/VCAM-1途径调节血管屏障对恶性腹水的影响，从而确认了一个新的途径，为卵巢癌腹水的治疗提供了新的策略。附图说明图1为实施例1的实验结果图；其中，图1A是不同亚型巨噬细胞培养环境下对内皮细胞通透性的影响；图1B为加入不同亚型巨噬细胞后内皮细胞上VE-cadherin的磷酸化荧光显色结果；图1C为不同亚型巨噬细胞培养环境下内皮细胞VCAM-1分子表达量的WB实验结果图；图1D为不同亚型巨噬细胞培养环境下内皮细胞VCAM-1分子表达量的荧光显色结果图；图2为实施例1的实验结果图；其中，图2A和2B中shVCAM-1-control+M1代表M1型巨噬细胞与转染了VCAM-1对照序列的内皮细胞共培养；shVCAM-1-a+M1代表M1型巨噬细胞与转染了VCAM-1敲低a序列的内皮细胞共培养；shVCAM-1-b+M1代表M1型巨噬细胞与转染了VCAM-1敲低b序列的内皮细胞共培养；Ove-control+M2代表转染了VCAM-1对照质粒的内皮细胞与M2型巨噬细胞共培养；Ove-VCAM-1+M2代表转染了VCAM-1过表达质粒的内皮细胞与M2型巨噬细胞共培养；EC+M1+K-7174代表内皮细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.M2型巨噬细胞在保护血管屏障中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.M2型巨噬细胞在保护血管屏障中的应用。


2.M2型巨噬细胞在制备保护血管屏障的药物中的应用。


3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述M2型巨噬细胞和血管内皮细胞直接接触。


4.权利要求1至3任一项所述的应用在制备治疗/预防/抑制卵巢癌腹水积聚的药物中的应用。


5.一种用于治疗/预防/抑制卵巢癌腹水积聚的药物，其特征在于，所述药物能够增强所有类型巨噬细胞对血管屏障的保护作用。


6.根据权利要求5所述的用于治疗...

【专利技术属性】
技术研发人员：何欢欢，张诗博，王莉杰，张浩培，
申请(专利权)人：中山大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：广东;44