一种人参药材质量的指纹图谱评价方法技术

本发明专利技术提供了一种人参药材质量的特征图谱评价方法，所述方法包括供试品和对照品溶液制备、液相检测和评价标准的建立，其中HPLC检测的条件优选乙腈和水的梯度洗脱，液相条件简单，并且评价标准的建立是本方法的重点，通过液相得到特征图谱，关注方法的稳定性、人参皂苷Rf含量及Rg1与Re含量比对，从而获得人参药材的品质信息，对于人参药材的优劣评价起到至关重要的作用。

A fingerprint evaluation method for the quality of ginseng

【技术实现步骤摘要】
一种人参药材质量的指纹图谱评价方法
本专利技术属于中药材质量评价领域，特别涉及一种人参药材质量的指纹图谱与人参皂苷含量相结合的评价方法。
技术介绍
人参为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根和根茎。多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗称“园参”；播种在山林野生状态下自然生长的称“林下参”，习称“籽海”。人参皂苷是人参的主要活性成分，具有抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、解毒等功能因其多方面的生物活性，其化学研究开始的较早，研究也较为深入。迄今为止，中外学者已从生晒参、白参、红参中分离鉴定了50余种人参皂苷。由于其较高的保健和治疗价值，但生长年限长，生长地域限制，因而野生人参价格高，即使2015版《中国药典》收载的园参和林下参补充了野生人参的来源，但依然价高。这就让不法分子觉得有利可图，市场上充斥着质量参差不齐的人参，为了提升含量加更多的须根，更有些不法分子用将人参打碎，加入西洋参下脚料或喷以地上部分的提取物等达到含量要求。而2015版《中国药典》中对于人参药材的含量测定仅要求人参皂苷Rg1+Re不得少于0.3％，人参皂苷Rb1不得少于0.2％(HPLC法)；美国药典USP41-NF36规定Rg1不少于0.2％，Rb1不少于0.1％(HPLC法)，欧洲药典第7.0版规定Rg1+Rb1不少于0.4％(HPLC法)和日本药局方(第16版)规定Rg1不少于0.1％，Rb不少于0.2％(紫外法)。通过研究，发现人参中须根多，能提高Re的含量，因而须根多的人参容易满足《中国药典》的要求，但并非是优质人参的来源。特征指纹图谱是一种能够标识中药各种组分群体特征的共有峰的图谱，是一种综合的、可同时定性定量的方法，可用于鉴别中药材的真伪，评价中药材质量的稳定，有效的分析方法。尚未有研究使用指纹图谱进行人参质量的评价，原因是人参中含有的特殊成分较多，与其他相关掺杂品存在较多的相似成分，在不清楚特征组分的情况下，在没有对比分析过较大量的同属类似品的情况下，无法仅通过指纹图谱或单一含量的指标来反应人参的质量，是否存在掺杂。
技术实现思路
基于上述技术问题，本专利技术提供了一种人参药材质量的指纹图谱评价方法，包括供试品进样液和对照品的进样液制备、供试品和对照品的HPLC检测步骤和指纹图谱分析步骤，所述供试品进样液和对照品的进样液制备包括，所述供试品为人参，所述供试品进样液制备包括人参或人参粉末经含水醇或低级醇加热回流，过滤，得到过滤液，精确取上层溶液蒸干得到残渣，所述残渣进行甲醇溶解得到供试品进样液，所述对照品为含有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rf的溶液；所述供试品和对照品的HPLC检测步骤中：流动相为水和乙腈，梯度洗脱，柱温20-40℃，流速0.8-1.2ml/min，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填充柱，检测UV波长为200-210nm；得到供试品指纹图谱后，所述指纹图谱的分析步骤包括已下合格药材标准，同时满足以下A、B和C：A所形成的人参指纹图谱需要包括8个人参皂苷的特征峰，其中应包含有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd；B供试品指纹图谱中人参皂苷Rf的含量≥0.05％(实验数据验证，掺假中常用的人参茎叶中不含Rf，西洋参中不含Rf或含量低于0.05％的Rf，非人参制品中不含Rf)；C供试品指纹图谱中人参皂苷Rg1+Re含量不低于0.3％，且人参皂苷Rb1含量不低于0.1％。(如果掺入其他杂物，相应Rg1+Re以及Rb1的含量会下降)其中所述的含水醇为水饱和的正丁醇、含水乙醇、甲醇、乙醇以及其他含不超过5个碳的醇类。进一步地，在上述评价方法中，所述步骤C中同时满足Rg1：Re在1：1～3:1(实验数据验证，根据掺假或造假的常用的手段：西洋参下脚料的Rg1含量特别低；人参生长年限不够或者造假切断的人参或者人参须，这些掺假造假的产品均符合药典标准，但是，其Rg1含量低于Re，甚至含量为0)。所述指示对照品包括人参的特有成分以及定量所需的其他标准品，所述对照品为至少含有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rf的溶液；专利技术人分别对现有的人参供试品提取工艺和流动相进行相应优化，人参皂苷由于其结构中大多只有单独的双键，共轭程度低，因而紫外吸收弱，在200-210nm有较弱吸收，现在高效液相色谱分析方法用ELSD检测器替代弱紫外吸收的检测器，但ELSD灵敏度较紫外检测器低一个数量级，因而如果能用紫外检测器的时候，还是尽量用紫外检测器，但对溶剂的要求也较高，不宜采用在200-210nm有末端吸收的溶剂，例如甲醇等。在测定人参中人参皂苷指纹图谱时，由于供试品处理会直接导致指纹图谱的质量，因而前处理就占了较为重要的位置，本专利技术中用水饱和的醇或者低级醇超声处理，目的是将人参皂苷有效地转移出来。流动相保证更多的对照峰取得更好的分离度。更重要的是，通过该方法，得到了一种评价标准，普遍认为人参皂苷是人参中主要活性成分，因而研究较多。但研究表明不同的人参部位所含的人参皂苷类型和含量不同。尤其在研究了同属的西洋参和人参茎叶后发现虽然都含有人参皂苷，但各有独特成分，且在含量上有区别。人参的特有成分是人参皂苷Rf，在茎叶里几乎没有，人参中Rg1含量高于Re，而人参茎叶中Rg1含量较Re低，且几乎不含Rb1；西洋参里的拟人参皂苷F11为特有成分，但含量极低，在203波长难以检测到，但西洋参里不含人参皂苷Rf，且Rg1远低于Re，Rb1含量较人参高较多。在上述人参药材质量的指纹图谱评价方法中，根据合格药材标准，药材标准A，B，C必须同时，任何一条不满足，均可判定药材不合格。进一步地，在上述的人参药材质量的指纹图谱评价方法中，所述供试品和对照品的HPLC检测步骤中：十八烷基硅烷键合硅胶填充柱；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱程序为，0～35分钟，流动相A19％，流动相B81％；35～55分钟，流动相A19％→29％，流动相B81％→71％；55～70分钟，流动相A29％，流动相B71％；70～100分钟，流动相A29％→40％，流动相B71％→60％，柱温30℃，流速1ml/min。所述十八烷基硅烷键合硅胶填充柱为AgilentZORBAXSB-C184.6*250mm，5μm或者InertsilODS-3.5μm4.6×250mm色谱柱。所述供试品指纹图谱包括8个共有峰，其中5号峰为人参皂苷Rb1对照峰，各特征峰的相对保留时间为：1号峰，0.42±10％、2号峰，0.44±10％、3号峰，0.86±10％、4号峰，0.90±10％，5号峰，1.00、6号峰，1.06±10％、7号峰，1.13±10％、8号峰，1.25±10％。所选择的8个共有峰指认了其中六个峰(1，2，3，5，6，8)，此六个峰是通过购买标准品，对比高效液相图的保留时间和PDA图谱，以及加样回收等方法确定。所述人参药材指纹图谱包括指认的特征峰：1号峰为人参皂苷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人参药材质量的指纹图谱评价方法，其特征在于，包括供试品进样液和对照品的进样液制备、供试品和对照品的HPLC检测步骤和指纹图谱分析步骤，/n所述供试品进样液和对照品的进样液制备包括，所述供试品为人参，所述供试品进样液制备包括人参经含水醇或低级醇加热回流，过滤，得到过滤液，精确取上层溶液蒸干得到残渣，所述残渣进行甲醇溶解得到供试品进样液，所述对照品为含有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rf的溶液；/n所述供试品和对照品的HPLC检测步骤中：流动相为水和乙腈，梯度洗脱，柱温20-40℃，流速0.8-1.2ml/min，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填充柱，检测UV波长为200-210nm；/n得到供试品指纹图谱后，所述指纹图谱的分析步骤包括以下合格药材标准，同时满足以下A、B和C：/nA 所形成的人参指纹图谱至少包括8个人参皂苷的特征峰，其中应包含有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd；/nB供试品指纹图谱中人参皂苷Rf的含量≥0.05％；/nC供试品指纹图谱中人参皂苷Rg1+Re含量不低于0.3％，且人参皂苷Rb1含量不低于0.1％。/n...

【技术特征摘要】
1.一种人参药材质量的指纹图谱评价方法，其特征在于，包括供试品进样液和对照品的进样液制备、供试品和对照品的HPLC检测步骤和指纹图谱分析步骤，
所述供试品进样液和对照品的进样液制备包括，所述供试品为人参，所述供试品进样液制备包括人参经含水醇或低级醇加热回流，过滤，得到过滤液，精确取上层溶液蒸干得到残渣，所述残渣进行甲醇溶解得到供试品进样液，所述对照品为含有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rf的溶液；
所述供试品和对照品的HPLC检测步骤中：流动相为水和乙腈，梯度洗脱，柱温20-40℃，流速0.8-1.2ml/min，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶填充柱，检测UV波长为200-210nm；
得到供试品指纹图谱后，所述指纹图谱的分析步骤包括以下合格药材标准，同时满足以下A、B和C：
A所形成的人参指纹图谱至少包括8个人参皂苷的特征峰，其中应包含有人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Rd；
B供试品指纹图谱中人参皂苷Rf的含量≥0.05％；
C供试品指纹图谱中人参皂苷Rg1+Re含量不低于0.3％，且人参皂苷Rb1含量不低于0.1％。


2.根据权利要求1所述的人参药材质量的指纹图谱评价方法，其特征在于，所述步骤C中同时满足Rg1：Re在1:1～3:1。


3.根据权利要求1所述的人参药材质量的指纹图谱评价方法，其特征在于，所述的含水醇为水饱和的正丁醇、含水乙醇、甲醇、乙醇以及其他含不超过5个碳的醇类。


4.根据权利要求1所述的人参药材质量的指纹图谱评价方法，其特征在于，所述UV波长为202-204nm。


5.根据权利要求1-4任一所述的人参药材质量的指纹图谱评价方法，其特征在于，所述供试品...

【专利技术属性】
技术研发人员：林艳和，唐琼，李资磊，涂栩秀，杜江，
申请(专利权)人：云南生物谷药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53