TMED2在作为埃博拉病毒病治疗靶点中的应用制造技术

本发明专利技术公开了TMED2在作为埃博拉病毒病治疗靶点中的应用。本发明专利技术提供了TMED2作为靶点在如下任一中的应用：治疗埃博拉病毒感染、治疗埃博拉病毒病、抑制埃博拉病毒复制、抑制埃博拉病毒在细胞中增殖、抑制埃博拉病毒包涵体形成。TMED2可作为靶点利用TMED2抑制剂可作为埃博拉病毒病防治的候选药物用于埃博拉病毒感染的治疗。本发明专利技术对感染埃博拉病毒的治疗具有重大应用价值。

Application of tmed2 as a therapeutic target for Ebola virus disease

【技术实现步骤摘要】
TMED2在作为埃博拉病毒病治疗靶点中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及TMED2在作为埃博拉病毒病治疗靶点中的应用。
技术介绍
埃博拉病毒病(以往称作埃博拉出血热)是由埃博拉病毒感染导致的一种严重且往往致命的疾病，病死率从25％到90％不等。埃博拉病毒被认为是病毒性出血热的原型病原体，病毒通过野生动物传到人，并在人际间传播蔓延。2014-2016年在西非出现的埃博拉疫情是有史以来发生的最大且最复杂的疫情，2018年，刚果再次爆发埃博拉疫情，截至2019年11月26日，共报告发生了3304例埃博拉病例，包括3186例确诊病例和118例可能病例，其中2199例死亡(总病死率约为67％)。虽然埃博拉病毒感染存在地域局限性，但伴随人类活动范围扩大及跨国交流日益频繁，大大增加了自然或人为感染埃博拉病毒的几率，加上治疗措施和疫苗接种选择的缺乏，使埃博拉病毒成为致命的生物威胁病原体。为保障人类健康和安全，提高对该病毒感染的防控能力，储备针对埃博拉病毒的防治药物具有重要意义。埃博拉病毒是丝状病毒科成员，为单股负链、不分节段的RNA病毒，外有包膜，基因组大小约19kb，由七个基因组成，从3'头部到5'尾部依次为3’-NP-VP35-VP40-GP-VP30-VP24-L-5’，其中NP为病毒的核衣壳蛋白，VP30和VP35为病毒结构蛋白，GP为I型跨膜蛋白，VP24为小型膜蛋白，VP40是毒粒内膜相关的基质蛋白，L是一种RNA聚合酶。其中VP35作为聚合酶辅因子，在RNA的合成中起到了不可替代的作用，还可以抑制I型干扰素的产生及参与病毒包涵体的形成，最近有研究表明VP35具有NTPase活性，并进一步发现其还具有依赖于ATP的类解旋酶活性，此外，具有突变VP35的埃博拉病毒诱导的免疫反应足以保护非人类灵长类动物免受野生型埃博拉病毒的感染，是一种潜在的药物靶点。包涵体是细胞感染病毒后胞浆或核中出现的特殊结构，常用于病毒病的诊断。埃博拉病毒包涵体在光学显微镜下可见，电子致密，多为圆形、卵圆形或不定型，位于胞质中。在埃博拉病毒感染的细胞中，病毒包涵体作为病毒复制和组装的位点，存储大量的病毒及宿主蛋白，从而促进病毒复制、翻译以及病毒粒子在细胞内与细胞间的运输。TMED2，又称P24A、p24beta1，是p24蛋白家族的主要成员，主要位于顺式高尔基体和内质网膜以及中间隔室中。TMED2既作为货物受体又作为外壳蛋白受体，参与转运小泡的生物发生以及随后的内质网与高尔基体之间以及高尔基体内部的蛋白质运输，有研究表明蛋白酶激活受体PAR1、PAR2以及GPI锚定蛋白等都需要TMED2进行转运。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种应用于埃博拉病毒病治疗的策略，即TMED2在作为埃博拉病毒病治疗靶点中的应用。第一方面，本专利技术要求保护TMED2作为靶点在如下任一中的应用：(A1)制备用于治疗埃博拉病毒感染的产品，或治疗埃博拉病毒感染；(A2)制备用于治疗埃博拉病毒病的产品，或治疗埃博拉病毒病；(A3)制备用于抑制埃博拉病毒复制的产品，或抑制埃博拉病毒复制；(A4)制备用于抑制埃博拉病毒在细胞中增殖的产品，或抑制埃博拉病毒在细胞中增殖；(A5)制备用于抑制埃博拉病毒包涵体形成的产品，或抑制埃博拉病毒包涵体形成。第二方面，本专利技术要求保护TMED2作为靶点在如下任一中的应用：(B1)筛选用于治疗和/或预防由于埃博拉病毒感染所致疾病的候选药物；(B2)筛选用于治疗和/或预防埃博拉病毒病的候选药物。第三方面，本专利技术要求保护能够抑制TMED2表达的物质在如下任一中的应用：(A1)制备用于治疗埃博拉病毒感染的产品，或治疗埃博拉病毒感染；(A2)制备用于治疗埃博拉病毒病的产品，或治疗埃博拉病毒病；(A3)制备用于抑制埃博拉病毒复制的产品，或抑制埃博拉病毒复制；(A4)制备用于抑制埃博拉病毒在细胞中增殖的产品，或抑制埃博拉病毒在细胞中增殖；(A5)制备用于抑制埃博拉病毒包涵体形成的产品，或抑制埃博拉病毒包涵体形成。其中，所述能够抑制TMED2表达的物质可为任何能够抑制TMED2表达的物质。进一步地，所述能够抑制TMED2表达的物质可为敲除TMED2表达的物质或敲低TMED2表达的物质。更进一步地，所述敲低TMED2表达的物质可为TMED2siRNA。在本专利技术的具体实施方式中，所述TMED2siRNA为由SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的两条单链退火形成的siRNA。更进一步地，所述敲除TMED2表达的物质可为用于敲除TMED2表达的基因编辑工具。在本专利技术的具体实施方式中，所述基因编辑工具为CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特异性切割的靶序列为SEQIDNo.3或SEQIDNo.4。第四方面，本专利技术要求保护TMED2在与埃博拉病毒蛋白VP35互作中的应用。在所述应用中，还可以利用TMED2在与埃博拉病毒蛋白VP35中间的互作作用，以所述TMED2检测所述埃博拉病毒蛋白VP35，或以所述TMED2检测埃博拉病毒。在上述各方面中，所述TMED2具体可为SEQIDNo.5所示蛋白质。本专利技术通过对埃博拉病毒结构蛋白VP35与宿主蛋白TMED2相互作用及相关分子机制进行研究，发现了TMED2影响病毒复制的分子机制：通过免疫沉淀和免疫印迹实验证实埃博拉病毒蛋白VP35与TMED2存在相互作用，并用活细胞成像技术发现VP35与TMED2在细胞质中共定位，另外本专利技术在HepG2细胞中使用埃博拉病毒最小基因组感染细胞模型，通过免疫荧光技术发现VP35与TMED2共定位在病毒包涵体，在最小基因组系统中加入TMED2siRNA干扰TMED2，结果发现病毒包涵体平均面积变小，在TMED2敲除细胞系中可更明显的观察到这种现象。同时发现TMED2siRNA干扰TMED2抑制埃博拉病毒复制。向HepG2内源性TMED2敲除细胞系TMED2-KO-#1与TMED2-KO-#2转染最小基因组系统相关质粒，发现TMED2敲除细胞系可显著抑制埃博拉病毒在细胞中的复制，在TMED2敲除细胞系中回补外源GFP-TMED2质粒，病毒复制得到一定增加。以上结果提示TMED2可作为靶点利用TMED2抑制剂可作为埃博拉病毒病防治的候选药物用于埃博拉病毒感染的治疗。本专利技术对感染埃博拉病毒的治疗具有重大应用价值。附图说明图1为免疫沉淀及免疫印迹检测VP35与TMED2的相互作用。图2为活细胞成像技术检测VP35与TMED2在细胞质中共定位。图3为免疫荧光染色检测VP35与TMED2共定位在包涵体。A为VP35参与病毒包涵体形成；B为VP35与TMED2在病毒包涵体中存在共定位。DAPI表示细胞核染液。图4为TMED2敲低及敲除影响埃博拉病毒包涵体形成。A为敲低TMED2抑制病毒包涵体形成；B为敲低TMED2使病毒包涵体平均面积减小；C为敲除TMED2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.TMED2作为靶点在如下任一中的应用：/n(A1)制备用于治疗埃博拉病毒感染的产品，或治疗埃博拉病毒感染；/n(A2)制备用于治疗埃博拉病毒病的产品，或治疗埃博拉病毒病；/n(A3)制备用于抑制埃博拉病毒复制的产品，或抑制埃博拉病毒复制；/n(A4)制备用于抑制埃博拉病毒在细胞中增殖的产品，或抑制埃博拉病毒在细胞中增殖；/n(A5)制备用于抑制埃博拉病毒包涵体形成的产品，或抑制埃博拉病毒包涵体形成。/n

【技术特征摘要】
1.TMED2作为靶点在如下任一中的应用：
(A1)制备用于治疗埃博拉病毒感染的产品，或治疗埃博拉病毒感染；
(A2)制备用于治疗埃博拉病毒病的产品，或治疗埃博拉病毒病；
(A3)制备用于抑制埃博拉病毒复制的产品，或抑制埃博拉病毒复制；
(A4)制备用于抑制埃博拉病毒在细胞中增殖的产品，或抑制埃博拉病毒在细胞中增殖；
(A5)制备用于抑制埃博拉病毒包涵体形成的产品，或抑制埃博拉病毒包涵体形成。


2.TMED2作为靶点在如下任一中的应用：
(B1)筛选用于治疗和/或预防由于埃博拉病毒感染所致疾病的候选药物；
(B2)筛选用于治疗和/或预防埃博拉病毒病的候选药物。


3.能够抑制TMED2表达的物质在如下任一中的应用：
(A1)制备用于治疗埃博拉病毒感染的产品，或治疗埃博拉病毒感染；
(A2)制备用于治疗埃博拉病毒病的产品，或治疗埃博拉病毒病；
(A3)制备用于抑制埃博拉病毒复制的产品，或抑制埃博拉病毒复制；
(A4)制备用于抑制埃博拉病毒在细胞中增殖的产品，或抑制埃博拉病毒在细胞中增殖；
(A5)...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹诚，杨伟洪，高婷，靳彦文，朱林，刘曜宁，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11