液相法检测药物制剂中吐温含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种新的准确、快速、可靠和高灵敏度的检测药物制剂中吐温含量的液相检测方法，采用体积排阻色谱柱，示差折光为检测器。该方法适用性高，在宽泛的色谱条件下，本发明专利技术的SEC‑HPLC‑RI液相法均可以良好的分离吐温，且适用于各类样品的检测，为吐温限度检测提供了一种适用性好、色谱条件简单易得、灵敏度高的液相方法。

Determination of Tween in pharmaceutical preparations by liquid phase method

【技术实现步骤摘要】
液相法检测药物制剂中吐温含量的方法
本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种吐温含量的液相检测方法。
技术介绍
吐温又名聚山梨酯，是一系列聚氧乙烯去水山梨醇的部分脂肪酸酯，有异臭、微苦。在药物制剂中通常作为辅料添加，以改善有效成分的溶解性；同是还可以抑制大分子蛋白药物的聚合，提高稳定性。随着近年来国内外研究的深入和一系列不良事件的披露，如多西他赛注射液和鱼腥草注射液事件，发现山梨酯类可能会引起过敏等不良反应，它能诱导细胞产生脱颗粒作用，引起过敏活性物质的释放，其本身的不饱和脂肪酸也十分容易氧化降解而产生多种有毒有害物质。因此，为确保药物使用安全，检测其中吐温含量显得尤为重要。目前现有的聚山梨酯类检测方法主要有：分光光度法、水解法、液相色谱-质谱联用法、液相色谱-蒸发光散射法，其中分光光度法和水解法操作繁琐、灵敏度差，而且大部分方法均用于聚山梨酯80的检测，曲佳等人报道中，采用分子排阻-蒸发光散射(SEC-ELSD)法测定中药注射液中吐温80的含量，其检测限为10μg，灵敏度较低，难以满足含量较低的残留检测需求。朱文漓等人公开了反相高效液相色谱法联用蒸发光散射检测器测定康柏西普眼用注射液中辅料吐温20的分析方法，但对反相柱要求较高，对样品有较多的限制，如检测大分子蛋白药物，需使用孔径较大的反相柱，否则容易堵塞柱子。综上所述，建立一种准确、快速、可靠和适用性广的检测药物制剂中吐温含量的液相方法显得尤为迫切和重要。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供了一种新的准确、快速、可靠和高灵敏度的检测药物制剂中吐温含量的液相检测方法。本专利技术提供的液相法检测吐温含量的方法，采用体积排阻色谱柱，示差折光检测器。所述体积排阻色谱柱的孔径选择与蛋白药物及吐温的分子量有关，以能够较好将蛋白药物和吐温分离为准。本领域技术人员根据蛋白药物及吐温的分子量，通过常规技术手段可以筛选出适合的色谱柱孔径。所述吐温是一系列聚氧乙烯去水山梨醇的部分脂肪酸酯，包括但不限于吐温20、吐温40、吐温60、吐温80等。作为优选，以磷酸盐缓冲液为流动相。作为优选，流动相pH值为6.0-8.0。作为优选，柱温及流通池温度为30℃-40℃。本专利技术液相法检测吐温含量方法，具体描述如下：采用体积排阻色谱柱(SEC)，以磷酸盐缓冲液为流动相，示差折光作为检测器；配制吐温的标准品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，绘制吐温的标准曲线；供试品按照相同的检测条件进行检测，根据标准曲线计算供试品中吐温的含量。本专利技术在SEC的分离原理和示差折光检测器的基础上(即SEC-HPLC-RI)，优化了吐温含量检测方法的色谱分离条件，发现该方法适用性高。在多种磷酸盐缓冲液的流动相条件下，在不同孔径的SEC色谱柱下，以及不同温度条件下等较宽泛的色谱条件下，SEC-HPLC-RI液相法均可以良好的分离吐温，且适用于各类样品的检测。为吐温含量检测提供了一种适用性好、色谱条件简单易得、灵敏度高的液相方法。附图说明图1实施例1不同pH值的磷酸缓冲液流动相下吐温-20的出峰情况图2实施例1不同盐添加剂的流动相下吐温-20的出峰情况图3实施例1不同柱温&流通池温度下吐温-20的出峰情况图4实施例1不同孔径的SEC色谱柱下吐温-20的出峰情况图5实施例2空白缓冲液、标准品溶液及样品的色谱图图6实施例2梯度标准品溶液色谱图图7实施例2标准曲线图图8实施例2平行制备6份吐温-200标准品溶液的色谱图图9实施例3吐温-80梯度标准品色谱图图10实施例3标准曲线图具体实施方式实施例1不同色谱条件下SEC-HPLC-RI法检测吐温含量的适用性1.不同流动相pH值仪器：品牌型号：WatersAcquityUPLCH-class；bioQuaternarysolventManager；BioSampleManager-FTN；RIDetector；Empower3.0数据处理软件色谱柱：WatersBEH125A，1.7μm，4.6×300mm流动相：①20mMpH6.0磷酸缓冲液；②20mMpH7.0磷酸缓冲液；③20mMpH8.0磷酸缓冲液；流速0.2mL/min，柱温30℃，流通池温度30℃，进样量10μL，采集时间20min。结果如图1所示，在pH6.0、7.0、8.0三种流动相条件下，吐温-20的峰形均较好。2.不同盐添加剂仪器：品牌型号：WatersAcquityUPLCH-class；bioQuaternarysolventManager；BioSampleManager-FTN；RIDetector；Empower3.0数据处理软件色谱柱：WatersBEH125A，1.7μm，4.6×300mm流动相：①0.1MNa2SO4的磷酸缓冲液(20mMpH7.0)；②0.1MNaCl的磷酸缓冲液(20mMpH7.0)；流速0.2mL/min，柱温30℃，流通池温度30℃，进样量10μL，采集时间20min。结果如图2所示，分别在含Na2SO4和NaCl的流动相条件下，吐温-20的峰形均较好。3.不同柱温&流通池温度仪器：品牌型号：WatersAcquityUPLCH-class；bioQuaternarysolventManager；BioSampleManager-FTN；RIDetector；Empower3.0数据处理软件色谱柱：WatersBEH125A，1.7μm，4.6×300mm流动相：20mMpH7.0磷酸缓冲液；流速0.2mL/min，进样量10μL，采集时间20min；柱温&流通池温度：30℃、35℃、40℃。结果如图3所示，在不同柱温&流通池温度条件下，吐温-20的峰形均较好。4.不同孔径的SEC色谱柱仪器：品牌型号：WatersAcquityUPLCH-class；bioQuaternarysolventManager；BioSampleManager-FTN；RIDetector；Empower3.0数据处理软件色谱柱：①WatersBEH125A，1.7μm，4.6×300mm；②WatersBEH200A，1.7μm，4.6×300mm；③WatersBEH450A，1.7μm，7.8×300mm；流动相：20mMpH7.0磷酸缓冲液；流速0.2mL/min，柱温30℃，流通池温度30℃，进样量10μL，采集时间20min。结果如图4所示，不同孔径的SEC色谱柱条件下，其中在125A和200A孔径的色谱柱下，吐温-20的峰形均较好；但在450A孔径下，吐温-20出峰靠近溶剂峰，且峰形拖尾比较严重。色谱柱的孔径选择与蛋白药物及吐温-20的分子量有关，以能够较好将蛋白药物和吐温本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种液相法检测吐温含量的方法，其特征在于采用体积排阻色谱柱，示差折光检测器。/n

【技术特征摘要】
1.一种液相法检测吐温含量的方法，其特征在于采用体积排阻色谱柱，示差折光检测器。


2.权利要求1所述的液相法检测吐温含量的方法，其特征在于体积排阻色谱柱的孔径选择与蛋白药物及吐温的分子量有关，以能够分离蛋白药物和吐温为准。


3.权利要求1所述的液相法检测吐温含量的方法，其特征在于所述吐温是吐...

【专利技术属性】
技术研发人员：马永，颜莎，赵佳，
申请(专利权)人：江苏众红生物工程创药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32