本发明专利技术公开了检测9种转基因大豆品系的核酸组合物及其应用，包括A2704‑12引物对、A5547‑127引物对、DP356043引物对、MON87705引物对、MON87701引物对、DP305423引物对、FG72引物对、CV127‑9引物对、DAS‑68416‑4引物对中的一组或多组，可以通过一次PCR准确的检测出9种转基因大豆品系A2704‑12，A5547‑127，DP356043，MON87705，MON87701，DP305423，FG72，CV127‑9，DAS‑68416‑4，实现了检测过程简单、灵敏度高、检测结果准确的效果。
Nucleic acid composition for the detection of nine transgenic soybean strains and its application
【技术实现步骤摘要】
检测9种转基因大豆品系的核酸组合物及其应用
本专利技术属于基因检测技术，具体涉及检测9种转基因大豆品系的核酸组合物及其应用。
技术介绍
中国是大豆和大豆产品进口国，国内需求量不断增加引起转基因大豆进口量屡创新高。在还不能确定转基因作物及其产品对人类健康和生态环境是否存在潜在的不利影响之前，对其检测及标识对消费者非常重要。挪威是首个对转基因食品实行明确含量标识的国家。2002年农业部颁布了有关农业转基因生物的安全评价、进口、标识等管理办法和管理程序，要求对5类转基因生物所涉及的17种转基因产品进行标识，其中包括转基因大豆。目前我国已批准进口共16个品系的转基因大豆，为避免转基因大豆的非法种植和销售，必须加强对相关环节的检测力度。目前转基因成分检测主要包括蛋白质和核酸水平上的检测，而核酸水平上的检测方法又分为定性PCR检测、实时荧光定量PCR检测、基因芯片检测等多种方法。近年来国内外基于核酸检测转基因的方法主要是普通PCR，多重PCR，多重巢氏PCR，实时荧光定量PCR，环介导等温扩增技术（LAMP）等。普通PCR检测一般采用凝胶电泳分析，具有一定的局限性，只能检测到10ng以上的DNA条带，因此在目的片段产量较低时无法检测到。实时荧光定量PCR通过检测荧光信号的强弱从而实时检测PCR产物扩增量，可以对转基因成分进行定量分析，但是只能做单重或最高3-4重，无法提高其通量。
技术实现思路
本专利技术公开了一种检测9种转基因大豆品系的核酸组合物，可以通过一次PCR准确的检测出9种转基因大豆品系A2704-12，A5547-127，DP356043，MON87705，MON87701，DP305423，FG72，CV127-9，DAS-68416-4，实现了检测过程简单、灵敏度高、检测结果准确的效果。本专利技术采用如下技术方案：检测9种转基因大豆品系的核酸组合物，包括A2704-12引物对、A5547-127引物对、DP356043引物对、MON87705引物对、MON87701引物对、DP305423引物对、FG72引物对、CV127-9引物对、DAS-68416-4引物对中的一组或多组。检测9种转基因大豆品系的试剂盒，包括核酸组合物、膜芯片；所述核酸组合物包括A2704-12引物对、A5547-127引物对、DP356043引物对、MON87705引物对、MON87701引物对、DP305423引物对、FG72引物对、CV127-9引物对、DAS-68416-4引物对中的一组或多组；所述膜芯片包括支持膜与检测探针。本专利技术还公开了上述检测9种转基因大豆品系的核酸组合物或者检测9种转基因大豆品系的试剂盒在检测转基因大豆品系中的应用，尤其是在利用一次PCR检测2～9种转基因大豆品系中的应用。一种检测转基因大豆品系的方法，包括以下步骤，以待测大豆样品的总DNA为模板，以核酸组合物为引物进行PCR扩增，然后将PCR扩增产物在膜芯片上显色，实现转基因大豆品系的检测；所述核酸组合物包括A2704-12引物对、A5547-127引物对、DP356043引物对、MON87705引物对、MON87701引物对、DP305423引物对、FG72引物对、CV127-9引物对、DAS-68416-4引物对中的一组或多组；所述膜芯片包括支持膜与检测探针。本专利技术中，核酸组合物还包括Lectin引物对，具体为SEQIDNO:1、SEQIDNO:2；优选的，A2704-12引物对为SEQIDNO:3、SEQIDNO:4，A5547-127引物对为SEQIDNO:5、SEQIDNO:6，DP356043引物对为SEQIDNO:7、SEQIDNO:8，MON87705引物对为SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、MON87701引物对为SEQIDNO:11、SEQIDNO:12，DP305423引物对为SEQIDNO:13、SEQIDNO:14，FG72引物对为SEQIDNO:15、SEQIDNO:16，CV127-9引物对为SEQIDNO:17、SEQIDNO:18，DAS-68416-4引物对为SEQIDNO:19、SEQIDNO:20。本专利技术采用与现有技术不同的各基因的引物对，实现了检测过程简单、灵敏度高、检测结果准确的效果，这是软件常规设计无法预期的。本专利技术中，核酸组合物中，反向引物5’端带生物素标记，即每一对引物中其反向引物5’端带生物素标记；生物素与亲和素的结合具有专一、迅速和稳定的特点，并且这些结合只需要生物素的脲基环部分，因此可将其戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连，构成生物素标记的引物，具体为常规技术。本专利技术中，膜芯片包括支持膜和负载于支持膜上的检测探针；支持膜包括硝酸纤维素膜、尼龙膜或具有三维孔径结构的薄膜中的一种，将探针负载于支持膜上，探针与PCR扩增产物杂交，然后通过探针和引物上标记的标记分子（生物素）显色，通过显色反应（产物序列与探针序列进行杂交，产物序列上的生物素与酶标液中的链霉亲和素（碱性磷酸酶标记的链霉亲和素）结合，最终通过显色底物与碱性磷酸酶的化学反应，出现蓝色络合物而呈现肉眼可见的斑点），可以直接肉眼判定实验结果，方法简单易行，避免了其他检测方法带来的操作复杂的问题。检测探针包括A2704-12检测探针、A5547-127检测探针、DP356043检测探针、MON87705检测探针、MON87701检测探针、DP305423检测探针、FG72检测探针、CV127-9检测探针、DAS-68416-4检测探针中的一组或多组，进一步包括Lectin检测探针；优选的，Lectin检测探针为SEQIDNO:21，A2704-12检测探针为SEQIDNO:22，A5547-127检测探针为SEQIDNO:23，DP356043检测探针为SEQIDNO:24，MON87705检测探针为SEQIDNO:25、MON87701检测探针为SEQIDNO:26，DP305423检测探针为SEQIDNO:27，FG72检测探针为SEQIDNO:28，CV127-9检测探针为SEQIDNO:29，DAS-68416-4检测探针为SEQIDNO:30。具体实施例中，选用硝酸纤维素膜、尼龙膜或具有三维孔径结构的薄膜中的一种作为支持膜，方便将探针负载于膜上；如具有三维孔径结构的薄膜可以方便的将探针分子吸附固定在薄膜上，便于后续的反应的进行。利用本专利技术检测9种转基因大豆品系的试剂盒检测转基因大豆品系时，以待测大豆样品的总DNA为模板，以核酸组合物进行PCR扩增，引物组合中有5’端带生物素标记（biotin）的引物；同时将各探针点在尼龙膜上，最后将扩增产物与探针杂交后使用显色液显色，并通过肉眼观察检测结果；核酸组合物可以为Lectin引物对以及A2704-12引物对、A5547-127引物对、DP356043引物对、MON87705引物对、MON87701引物对、DP305423引物对、FG72引物对、CV127-9引物对、DAS-68416-4引物对中的一组或多组，各对引物的目标序列分别为大豆内源基因序列Le本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测9种转基因大豆品系的核酸组合物，包括A2704-12引物对、A5547-127引物对、DP356043引物对、MON87705引物对、MON87701引物对、DP305423引物对、FG72引物对、CV127-9引物对、DAS-68416-4引物对中的一组或多组。/n
【技术特征摘要】
1.检测9种转基因大豆品系的核酸组合物，包括A2704-12引物对、A5547-127引物对、DP356043引物对、MON87705引物对、MON87701引物对、DP305423引物对、FG72引物对、CV127-9引物对、DAS-68416-4引物对中的一组或多组。
2.根据权利要求1所述转基因大豆品系的核酸组合物，其特征在于，核酸组合物还包括Lectin引物对；A2704-12引物对为SEQIDNO:3、SEQIDNO:4，A5547-127引物对为SEQIDNO:5、SEQIDNO:6，DP356043引物对为SEQIDNO:7、SEQIDNO:8，MON87705引物对为SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、MON87701引物对为SEQIDNO:11、SEQIDNO:12，DP305423引物对为SEQIDNO:13、SEQIDNO:14，FG72引物对为SEQIDNO:15、SEQIDNO:16，CV127-9引物对为SEQIDNO:17、SEQIDNO:18，DAS-68416-4引物对为SEQIDNO:19、SEQIDNO:20。
3.根据权利要求2述转基因大豆品系的核酸组合物，其特征在于，所述Lectin引物对为SEQIDNO:1、SEQIDNO:2；核酸组合物中，反向引物5’端带生物素标记。
4.检测9种转基因大豆品系的试剂盒，包括核酸组合物、膜芯片；所述核酸组合物包括A2704-12引物对、A5547-127引物对、DP356043引物对、MON87705引物对、MON87701引物对、DP305423引物对、FG72引物对、CV127-9引物对、DAS-68416-4引物对中的一组或多组；所述膜芯片包括支持膜与检测探针。
5.根据权利要求4所述检测9种转基因大豆品系的试剂盒，其特征在于，核酸组合物还包括Lectin引物对；A2704-12引物对为SEQIDNO:3、SEQIDNO:4，A5547-127引物对为SEQIDNO:5、SEQIDNO:6，DP356043引物对为SEQIDNO:7、SEQIDNO:8，MON87705引物对为SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、MON87701...
【专利技术属性】
技术研发人员：张雅涵，李文静，
申请(专利权)人：苏州市食品检验检测中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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