1α,25-二羟基维生素D高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种1α,25‑二羟基维生素D2和1α,25‑二羟基维生素D3高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒，由对照品、质控品、同位素内标提取液、稀释液、转化液、复溶液、流动相添加剂A、流动相添加剂B、96孔反应板、96孔过滤板、说明书组成。本试剂盒可以分别检测1α,25‑二羟基维生素D2和1α,25‑二羟基维生素D3，用时较短，提高了检测的效率。

Detection kit for 1 \u03b1, 25 dihydroxyvitamin d by HPLC-MS

【技术实现步骤摘要】
1α,25-二羟基维生素D高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒
本专利技术属于检测领域，具体涉及1α,25-二羟基维生素D高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒以及检测方法。
技术介绍
维生素D为固醇类衍生物，麦角甾醇、麦角骨化醇，具有抗佝偻病作用，又称抗佝偻病维生素。维生素D家族成员包括维生素D1、D2、D3、D4和D5，对健康关系较密切的是D2(麦角钙化醇)和D3(胆固化醇)。它不仅仅只是一种脂溶性维生素，本质上是具多种生理活性的一种激素，具有广泛的生理代谢活性。维生素D缺乏会引起佝偻病、手足抽搐、软骨病等疾病，但是长期摄入过多的维生素D，将引起血管和器官钙化。因此定期检测人体内维生素D的水平，对于衡量人体维生素D补充效果，及维持人体健康具有重要的意义。维生素D可以通过皮肤合成或者食物摄取来产生。维生素D半衰期约3小时，并与维生素D结合蛋白在一起；1α,25-(OH)2维生素D2/D3半衰期约24小时,在血中含量极低；25-羟基维生素D是血中被检测的标志物，因为它半衰期约为3周,较为稳定,又是人体内维生素D的主要储存形式，通过检测它可以确定总体维生素D的情况。维生素D是维持骨骼健康的主要元素。儿童期维生素D的严重缺乏将导致骨骼畸形，即佝偻病。维生素D缺乏是继发性甲状旁腺机能亢进症的常见病因。近年来发现维生素D与癌症、心血管疾病、糖尿病等都有相关性，足量的体内维生素D水平对癌症、多发性硬化症、糖尿病等有一定预防作用。维生素D缺乏的人群可以通过食物、阳光及维生素补充剂提高体内维生素D含量，食物来源包括蛋黄，三文鱼，金枪鱼，鱼肝油，牛肝，人造奶油，酸奶，奶酪等；补充剂提供的维生素D包含两种形式：D2和D3。两种形式都有效，每一种都可以保证充足的维生素D水平。但是2和3是不等同的。D3是人体产生的形式，最近有研究表明D3在快速提高维生素D水平上可高达3倍，而且能维持更加长久。补充剂量取决于年龄和危险因素。推荐的膳食标准是70岁老人为600IU/天，71及以上为800IU/天。一些研究人员提出，维生素D含量高可带来多种健康益处，但是太多会造成伤害。根据美国医学研究所，超过4000IU/天，危害的风险会增加。lα，25(OH)2D常被应用于慢性肾功能损伤、甲状旁腺功能减退以及高钙血症等疾病的治疗，准确定量血清lα，25(OH)2D水平对疾病的诊断及预后监测具有重要作用，然而传统的免疫学检测方法不能区别检测lα，25(OH)2D2和lα，25(OH)2D3，同时受到同分异构体及维生素D结合蛋白等的影响而缺乏足够的检测准确度、特异性。综上所述，本领域迫切需要开发一种分析时间短、灵敏、准确且能够同时定量检测1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3的的检测试剂盒及检测方法。
技术实现思路
本专利技术的目的就是一种分析时间短、灵敏、准确且能够同时定量检测1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3的的检测试剂盒及检测方法。在本专利技术的第一方面，提供了一种高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒，包括：(1)质控品，所述质控品含1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3；(2)同位素内标提取液，所述同位素内标提取液含有1α,25-二羟基维生素D2-d6和1α,25-二羟基维生素D3-d6；(3)稀释液，所述稀释液为饱和一元醇；(4)转化液，所述转化液含有4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)；(5)复溶液，所述复溶液为水；(6)流动相添加剂A，所述流动相添加剂A为饱和一元羧酸；以及(7)流动相添加剂B，所述流动相添加剂B为C1-C3胺化合物。在另一优选例中，同位素内标提取液中，1α,25-二羟基维生素D2-d6的浓度为0.5～2ng/mL和1α,25-二羟基维生素D3-d6的浓度为0.5～2ng/mL。在另一优选例中，同位素内标提取液中，1α,25-二羟基维生素D2-d6的浓度和1α,25-二羟基维生素D3-d6的浓度相同。在另一优选例中，同位素内标提取液中含1ng/mL的1α,25-二羟基维生素D2-d6和1ng/mL的1α,25-二羟基维生素D3-d6。在另一优选例中，在所述转化液中，4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮的浓度为0.01mg/g-10mg/g。在另一优选例中，所述检测试剂盒还包括(8)对照品，所述对照品含1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3。在另一优选例中，所述流动相添加剂B选自下组：甲胺、乙胺、丙胺，或其组合。在另一优选例中，所述流动相添加剂B为甲胺。在另一优选例中，所述饱和一元羧酸选自下组：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸或其组合。在另一优选例中，所述饱和一元羧酸为甲酸。在另一优选例中，所述饱和一元醇选自下组：甲醇、乙醇或其组合。在另一优选例中，所述饱和一元醇为甲醇。在本专利技术的第二方面，提供了一种通过高效液相色谱质谱联用法测定所取的生物样品中一种或多种二羟基维生素D代谢物的量的方法，包括：(i)通过电喷雾离子源(ESI)对所述一种或多种二羟基维生素D代谢物和内标进行电离，分别产生所述一种或多种二羟基维生素D代谢物和所述内标的至少一种前体离子；(ii)分别产生所述一种或多种二羟基维生素D代谢物和所述内标的所述前体离子的一种或多种碎片离子；和(iii)比较步骤(i)或(ii)或两者中产生的所述一种或多种二羟基维生素D代谢物和所述内标的一种或多种所述离子的量以确定所述生物样品中的所述一种或多种二羟基维生素D代谢物的量；其中，色谱检测过程中的流动相中加入C1-C3胺化合物。在另一优选例中，色谱检测过程中的流动相中加入甲胺。在另一优选例中，所述质谱为串联质谱。在另一优选例中，所述一种或多种二羟基维生素D代谢物包括1α,25-二羟基维生素D2，且其中所述1α,25-二羟基维生素D2的所述母离子的质/荷比为635.4±0.5；和/或所述一种或多种二羟基维生素D代谢物包括1α,25-二羟基维生素D3，且其中所述1α,25-二羟基维生素D3的所述母离子的质/荷比为623.4±0.5。在另一优选例中，其中所述一种或多种碎片离子包括选自质/荷比为314.4±0.5的离子的一种或多种离子。在另一优选例中，所述方法还包括：在通过电喷雾离子源(ESI)对所述一种或多种二羟基维生素D代谢物和内标进行电离前，用转化液对一种或多种二羟基维生素D代谢物和内标进行衍生处理。在另一优选例中，色谱检测过程中，所述液相色谱具有下述一个或多色谱条件：(i)流动相包括流动相A和流动相B；其中，流动相A为含流动相添加剂A和流动相添加剂B的水；流动相B为含流动相添加剂A的甲醇；(ii)色谱柱柱温为30～50℃；(iii)流速为0.2～1.0ml/min。在另一优选例中，色谱检测过程中，梯度为：0-0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒，其特征在于，包括：/n(1)质控品，所述质控品含1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3；/n(2)同位素内标提取液，所述同位素内标提取液含有1α,25-二羟基维生素D2-d6和1α,25-二羟基维生素D3-d6；/n(3)稀释液，所述稀释液为饱和一元醇；/n(4)转化液，所述转化液含有4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)；/n(5)复溶液，所述复溶液为水；/n(6)流动相添加剂A，所述流动相添加剂A为饱和一元羧酸；以及/n(7)流动相添加剂B，所述流动相添加剂B为C1-C3胺化合物。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒，其特征在于，包括：
(1)质控品，所述质控品含1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3；
(2)同位素内标提取液，所述同位素内标提取液含有1α,25-二羟基维生素D2-d6和1α,25-二羟基维生素D3-d6；
(3)稀释液，所述稀释液为饱和一元醇；
(4)转化液，所述转化液含有4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)；
(5)复溶液，所述复溶液为水；
(6)流动相添加剂A，所述流动相添加剂A为饱和一元羧酸；以及
(7)流动相添加剂B，所述流动相添加剂B为C1-C3胺化合物。


2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括(8)对照品，所述对照品含1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3。


3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述流动相添加剂B为甲胺。


4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述饱和一元羧酸选自下组：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸或其组合。


5.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述饱和一元羧酸为甲酸。


6.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述饱和一元醇选自下组：甲醇、乙醇或其组合。


7.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱监宝，官培龙，徐平，
申请(专利权)人：上海可力梅塔生物医药科技有限公司，上海爱可赛默医疗器械有限公司，广州可力质谱医疗器械有限公司，江苏可力色质医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31