一种植物干细胞界点基质液的汲取方法技术

本发明专利技术所提出的一种植物干细胞界点基质液的汲取方法包括选取植物，超微粉碎，介质培养，诱导分离，常温冷冻，二次低温冷冻，介质分离，聚集和包装的步骤，所述选取植物为生长旺盛的植物取茎尖以及根尖，所述超微粉碎步骤中粉碎的粒径选取在300‑500目之间。利用该方法制得的干细胞界点基质液不仅纯度高、耐高低温，并可常温保存，且可以口腔含服，易于皮肤吸收，简化了动物干细胞回输方法，可应用于制作多种植物干细胞副产品，且用涂广泛效果好。

A method of extracting stromal fluid from plant stem cells

【技术实现步骤摘要】
一种植物干细胞界点基质液的汲取方法
本专利技术涉及植物干细胞分离
，具体地说是一种植物干细胞界点基质液的汲取方法。
技术介绍
植物干细胞是指存在于被称为分生组织的特殊构造内，因此它具有非常惊人的再生能力,由于它特殊的组织构造使得它可以分化发育增殖成熟成植物的各种器官，由于它特有的性能非常强大，是植物能够实现细胞全能性的根源,因此目前常被应用于培养移植进行相关生物学实验以及被人们应用于研究和开发天然新药及生物新原料，以食品及化妆品产业为核心正不断发展与成长。植物干细胞正在广泛通过商业、医学等领域运用到人类的生命健康象限之中。因此如何从植物中大量的提取干细胞且提取的细胞组织不被破坏是目前急于解决的市场问题。现有植物干细胞提取技术是在无菌条件下，在营养培养基中隔离这部分细胞、组织、器官甚至整个植物。但，通常的这种制备、培养的方法制备出的“干细胞”，由于形成层是植物的分裂组织，即植物的干细胞组织，形成层由很薄的细胞壁的很少层数的细胞构成，在植物体内极微量存在，由于这样的结构特点，如果施加物理性外力的话，在分离的过程中极易受损，往往会破坏其中的组织细胞并丧失干细胞的特性,已经不是天然植物中的干细胞了，天然干细胞的“万能性质”不是物质成分体现的，是籍于物质成分中的合息能力，因此要保持植物干细胞的天然成分和活性，急需一种全新的分离技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种植物干细胞界点基质液汲取方法以解决分离出的干细胞受损失去天然成分、细胞活性不强的问题。本专利技术所提出的植物干细胞界点基质液的汲取方法包括以下步骤：选取植物，首先选取阳光下生长得旺盛、健壮的植物，因此时处于旺盛生长状态的干细胞中活性成分的含量最为丰富，取植物茎尖和/或根尖待用；超微粉碎：将剪下的植物茎尖、根尖采用超细粉碎机或纳米粉碎机粉碎，粉碎粒径选取在300-500目之间备用；选破碎步骤可有效的去除杂质，利于后续干细胞的培养、分离；介质培养：将粉碎后的待用植物用细纱布包裹，经流水反复冲洗3-5遍后，解开取下纱布将备用植物放入无菌ddH2O培养皿里浸入2-5分钟，其间可加入吐温或杀菌剂或酒精，如加入酒精，浸泡时间缩短为2分钟；将消毒处理后的植物原料放入无菌培养基中，进行诱导分离，恒温条件下培养20-25天，分离出静止中心干细胞；常规冷冻：将培养体放入冷冻室进行恒温冷冻，温度设置在-18～-15℃之间，冷冻时间为5-10分钟；二次冷冻：将经常规冷冻的培养体取出后常温放置5-10分钟后，再次放入冷冻室进行低温冷冻，此时冷冻温度设置在-28～-20℃之间，时间3-5分钟；解冻:选择温度在零上20-30℃度之间，时间5-15分钟解冻；介质分离：经二次冷冻后解冻得到的培养体植物干细胞会从母细胞壁界点破壁，分离，脱落；聚集：采用真空针管汲取；包装：采用真空锡纸袋制得封装提取物、脂质体以及悬浮液等。所述诱导培养基为含有萘乙酸、水解酪蛋白、生长素的MN培养基中的一种或几种。所述冷冻过程在真空无菌无毒环境下进行。所述的植物提取物培养的pH值维持在6.0～6.5。本专利技术所提出的一种植物干细胞界点基质液的汲取方法通过选择旺盛植物将植物茎尖及根尖分生组织进行超微粉碎和无菌清洗、培养分化再经过二次冷冻的步骤使细胞来不及产生有毒的代谢副产物，使得干细胞在最佳的生长状态下进行有利破壁，可最大限度地保护植物干细胞中的活性成分，而且，在-18～-15℃之间和-30～-20℃两个温度梯度内在不同的时间内完成冻结，并保持低温冻结状态5～15min，可恰使细胞在临界点充分破壁、脱离，保持细胞的活性不被破坏，且不变异并可促使冰晶的形成和长大，有利于细胞的充分破壁，进一步的，在温度20～30℃的条件下进行解冻，既可进一步促进有效成分的溶出，还不会导致细胞中有效成分的破坏，利用该方法汲取的干细胞基质液不仅纯度高、耐高低温，并可常温保存，且可以口腔含服，易于皮肤吸收，简化了动物干细胞回输方法，可应用于制作多种植物干细胞副产品，且用涂广泛效果好。具体实施方式实施例1：一种植物干细胞界点基质液的汲取方法，具体实施步骤如下：将处于旺盛生长状态的具有植物干细胞分生组织的植物茎尖及根尖采用超细粉碎机或纳米粉碎机粉碎，粉碎粒径300目，后用纱布包裹放入器血中用流水反复冲洗3-5遍，打开纱布放入无菌ddH2O培养皿里浸入2-5min，其间加入吐温或杀菌剂或酒精中的一种或几种，如加入酒精，浸泡时间缩短为2分钟；将消毒处理后的植物原料放入无菌培养基中，进行诱导分离，此实施例中诱导培养基选取水解酪蛋白，在恒温条件下培养25天，所述的植物提取物培养的pH值维持在6.0，分离出静止中心干细胞；将培养体放入冷冻室进行一般的常规冷冻，温度设置在-18℃，冷冻时间为5分钟；二次冷冻：将经常规冷冻的培养体取出后常温放置5分钟后，再次放入冷冻室进行低温冷冻，此时冷冻温度设置在零下-30℃，所述冷冻过程也是在真空无菌无毒环境下进行，冷冻时间为3分钟再解冻，此时解冻的温度在20-30℃之间，时间5-15分钟，经二次冷冻后解冻得到的培养体植物干细胞此时会从母细胞壁界点破壁，分离，脱落；采用真空针管汲取后包装成真空锡纸袋制得封装提取物、脂质体以及悬浮液等。实施例2：按照实施例1的步骤，所不同的是选取植物破碎粒径为400目，恒温培养20天，所述的植物提取物培养的pH值维持在6.5，诱导培养基选取萘乙酸，选择-15℃冷冻10分钟后取出常温放置8分钟后再次放入低温冷冻，温度选择在-25℃，冷冻时间5分钟后选择零上25℃解冻15分钟，此时制得的培养液即为植物干细胞界点基质液。实施例3按照实施例1的步骤，所不同的是选取植物破碎粒径为500目，恒温培养22天，所述的植物提取物培养的pH值维持在6.3，诱导培养基选取萘乙酸，选择-17℃冷冻8分钟后取出常温放置10分钟后再次放入低温冷冻，温度选择在-20℃，冷冻时间4分钟后选择零上30℃解冻5分钟，此时制得的培养液即为植物干细胞界点基质液。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物干细胞界点基质液的汲取方法，其特征在于包括以下步骤：选取植物:首先选取阳光下生长得旺盛、健壮的植物，取植物茎尖和/或根尖待用；/n超微粉碎:将剪下的植物茎尖和/或根尖采用超细粉碎机或纳米粉碎机粉碎，粉碎粒径选取在300-500目之间，备用；介质培养：将粉碎后的备用植物用细纱布包裹，经流水反复冲洗3-5遍后，取下纱布将备用植物放入无菌dd H2O培养皿里浸入2-5分钟，其间可加入吐温或杀菌剂或酒精，如加入酒精，浸泡时间缩短为2分钟；将消毒处理后的植物原料放入无菌培养基中，进行诱导分离，恒温的条件下培养20-25天，分离出静止中心干细胞；/n常规冷冻：将培养体放入冷冻室进行常规冷冻，温度设置在-18～-15℃之间，冷冻时间为5-10分钟；二次冷冻：将常规冷冻的培养体取出后常温放置5-10分钟后，再次放入冷冻室进行低温冷冻，此时冷冻温度设置在零下-30～-20℃之间，时间3-5分钟；解冻:选择温度在零上20-30度之间，时间5-15分钟解冻；/n介质分离：经二次冷冻后解冻得到的培养体植物干细胞会从母细胞壁界点破壁，分离，脱落；/n聚集：采用真空针管汲取；/n包装：采用真空锡纸袋制得封装提取物、脂质体以及悬浮液等。/n...

【技术特征摘要】
1.一种植物干细胞界点基质液的汲取方法，其特征在于包括以下步骤：选取植物:首先选取阳光下生长得旺盛、健壮的植物，取植物茎尖和/或根尖待用；
超微粉碎:将剪下的植物茎尖和/或根尖采用超细粉碎机或纳米粉碎机粉碎，粉碎粒径选取在300-500目之间，备用；介质培养：将粉碎后的备用植物用细纱布包裹，经流水反复冲洗3-5遍后，取下纱布将备用植物放入无菌ddH2O培养皿里浸入2-5分钟，其间可加入吐温或杀菌剂或酒精，如加入酒精，浸泡时间缩短为2分钟；将消毒处理后的植物原料放入无菌培养基中，进行诱导分离，恒温的条件下培养20-25天，分离出静止中心干细胞；
常规冷冻：将培养体放入冷冻室进行常规冷冻，温度设置在-18～-15℃之间，冷冻时间为5-10分钟；二次冷冻：将常规冷冻的培养体取出后常温放置5-10分钟后，再次放入冷冻室进行低温冷冻，此时冷冻...

【专利技术属性】
技术研发人员：李春祥，
申请(专利权)人：好牧人干细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21