三七叶中具有抗光损伤活性的三萜皂苷类成分制造技术

本发明专利技术涉及三七叶中具有抗光损伤活性的三萜皂苷类成分，利用多种分离手段，包括正反相硅胶柱层析、大孔吸附树脂柱层析和制备高效液相色谱法等，从三七叶中分离得到了包括5个化合物在内的三萜皂苷类化合物。这5个化合物经活性测定实验表明具有抗光损伤活性，为今后进一步的药理活性筛选及临床研究开发出疗效确切、毒副作用小的抗光损伤药物奠定了物质基础。

Triterpenoid saponins of Panax notoginseng with anti light damage activity

【技术实现步骤摘要】
三七叶中具有抗光损伤活性的三萜皂苷类成分
本专利技术属于天然药物领域，具体而言，涉及一类具有抗光损伤活性的三萜皂苷类成分。
技术介绍
随着生活水平的提高，人们户外运动、晒日光浴的机会也随之增多，导致有时候皮肤过度地暴露于紫外线。紫外线照射、特别是中波紫外线可引起皮肤的损伤，诱发皮肤出现红斑、水疱、炎症、色素沉着、光老化等一系列的反应，对人类健康构成潜在威胁。为了防止皮肤光损伤，基本的防护是避免过度日晒，或者使用防晒霜等防护措施，但是取得的效果有限。近年来人们非常关注来源于植物的光损伤防护剂，并且发现它们能够预防及减少皮肤光损伤和皮肤癌的发生。常见的来源于植物的光损伤防护剂例如有茶多酚、维生素C、葡萄籽提取物、芦荟提取物、绞股蓝皂苷等。三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen为五加科人参属植物，又名田七、血参、田三七、滇三七、参三七，主产于云南文山州，在广西、广东等地亦有分布。作为传统常用名贵药材，三七不仅应用于治疗跌打损伤，民间也常用于预防血栓。三七的入药部位主要是其根和根茎，然而经过几百年的栽培，三七对环境的适应能力逐渐下降，且连作障碍问题日益凸显，导致三七资源不足。为了扩大三七的药用资源，有必要对三七的除了根和根茎之外的其它部位(例如，三七叶)的化学成分及药理活性进行研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于通过多种提取、分离手段，从三七叶中提取、分离并鉴定具有抗光损伤活性的化合物。本专利技术的目的是通过如下的技术方案实现的：利用多种提取、分离手段，包括溶剂提取法、大孔吸附树脂法、正反硅胶柱层析和制备HPLC等方法，系统研究了三七叶的化学成分。具体而言，本专利技术提供：1.一种三七(Panaxnotoginseng)叶提取物，其包含下述式1至式5所示的化合物中的至少一者。2.一种药物组合物，包含治疗有效量的上述第1项所述的三七叶提取物、以及药学可接受的赋形剂。3.一种化妆品组合物，包含上述第1项所述的三七叶提取物、以及至少一种生理学上可接受的赋形剂。4.上述第1项所述的三七叶提取物的制备方法，包括依次进行下列步骤：(i)将三七叶用体积浓度为50％～90％的醇溶液提取，提取液浓缩后得到粗提物；(ii)将步骤(i)中所得到的粗提物混悬于水中，然后在大孔吸附树脂柱上依次用以下溶剂进行梯度洗脱：(a)水或者浓度低于40％的醇溶液、(b)40-75％醇溶液、(c)80-95％醇溶液；(iii)将步骤(ii)中采用(c)80-95％醇溶液进行洗脱而得到的洗脱液浓缩并干燥，得到三七叶提取物。5.根据上述第4项所述的三七叶提取物的制备方法，进一步包括：(iv)采用正相柱色谱法和/或反相柱色谱法对上述步骤(iii)中得到的三七叶提取物进行分离，从而得到上述式1至式5所示的化合物中的至少一者。6.上述第1项所述的三七叶提取物在制备用于预防或治疗光损伤的药物或化妆品中的用途。专利技术的效果本专利技术提供的三七叶提取物，特别是其中所包含的上述式1至式5所示的化合物(以下有时简称为“化合物1～5”)能够显著地增强HaCaT细胞活力，提示三七叶在抗光损伤方面具有极大的潜在利用价值，为临床上有效地预防和/或治疗皮肤光损伤提供新的应用和思路。附图说明图1中示出了各化合物1～5对HaCat细胞的抗光损伤活性。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述并参照附图对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。本专利技术提供一种三七叶提取物的制备方法。关于本专利技术的制备方法，没有特别的限定，可以单独或组合地采用公知的方法。下面对本专利技术的三七叶提取物制备方法的一个优选实施方式进行描述。本专利技术的三七叶提取物制备方法包括下列步骤：(i)将三七叶用体积浓度为50％～90％的醇溶液提取，提取液浓缩后得到粗提物；(ii)将步骤(i)中所得到的粗提物混悬于水中，然后在大孔吸附树脂柱上依次用以下溶剂进行梯度洗脱：(a)水或者浓度低于40％的醇溶液、(b)40-75％醇溶液、(c)80-95％醇溶液；(iii)将步骤(ii)中采用(c)80-95％醇溶液进行洗脱而得到的洗脱液浓缩并干燥，得到三七叶提取物。在步骤(i)中，将三七叶粉碎，然后用溶剂提取。作为提取用溶剂，可以列举水，甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、异丙醇、丙二醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、丁二醇等C1-4醇，这些溶剂可以单独地或者组合使用。在这些溶剂中，优选使用甲醇或者乙醇，从容易获得的方面考虑，更优选使用乙醇。在采用醇/水溶液作为提取溶剂的情况下，可以采用50-95％(v/v)的醇/水溶液，例如，50-95％(v/v)乙醇/水溶液或者甲醇/水溶液，优选为50-90％(v/v)乙醇/水。提取时，提取用溶剂与三七叶的量的比例可以任意地调整。一般来说，提取用溶剂与三七叶的质量比在大约1:1至大约50:1的范围内，优选在大约5:1至大约20:1的范围内，更优选在大约5:1至大约10:1的范围内。关于提取方式，可以采用本领域中常用的提取方法，例如，可以列举加热回流法、超声提取法、浸渍法、渗漉法、煎煮法等，但是并不限于这些方法。在这些提取方法中，从提取效率方面考虑，优选加热回流提取法。提取时的温度通常为80℃至120℃，优选为90℃至100℃。提取时间通常为至少15分钟，优选至少30分钟，从更有效地提取三萜类组分的方面考虑，提取时间优选为1至3小时。如果提取时间少于15分钟，则有效成分不能够充分地被提取出来；如果提取时间超过3小时，则由于加热时间过长可能会发生有效成分的分解等不利影响。关于提取次数，只要能够尽可能地提取出三七叶中的活性成分，则没有特别的限制，可以采用相同或不同的提取用溶剂提取1次或重复提取多次，优选重复提取2次或3次。在步骤(ii)中，将步骤(i)中所得到的粗提物在大孔吸附树脂柱上依次用以下溶剂进行梯度洗脱：(a)水或者浓度低于40％的醇溶液、(b)40-75％醇溶液、(c)80-95％醇溶液。大孔吸附树脂的型号包括但是不限于X-5、AB-8、NK-2、NKA-2、NK-9、D3520、D101、WLD等，优选使用D101大孔吸附树脂。作为洗脱时所使用的醇类，可以列举甲醇、乙醇、乙二醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇等C1-4醇，优选使用甲醇或乙醇，从易于获得以及毒性小的方面考虑，更优选使用乙醇。在步骤(iii)中，将步骤(ii)中采用(c)80-95％醇溶液进行洗脱而得到的洗脱液浓缩并干燥，得到三七叶提取物。对浓缩方法并无特别限定。优选的浓缩方法的例子包括：使用离心机分离的方法；在加热或减压条件下进行浓缩的方法；冷冻浓缩；反渗透膜过滤浓缩；管式膜蒸发浓缩等。优选使用这些方法中的两种或多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三七(Panax notoginseng)叶提取物，其包含下述式1至式5所示的化合物中的至少一者，/n

【技术特征摘要】
1.一种三七(Panaxnotoginseng)叶提取物，其包含下述式1至式5所示的化合物中的至少一者，





2.一种药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1所述的三七叶提取物、以及药学可接受的赋形剂。


3.一种化妆品组合物，包含权利要求1所述的三七叶提取物、以及至少一种生理学上可接受的赋形剂。


4.权利要求1所述的三七叶提取物的制备方法，包括依次进行下列步骤：
(i)将三七叶用体积浓度为50％～90％的醇溶液提取，提取液浓缩后得到粗提物；
(ii)将步骤(i)中所得到的粗提物混悬于水中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王涛，张祎，孙璠，燕洁静，郝谜谜，高秀梅，刘二伟，于海洋，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津;12