【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞外囊泡的固定和保留本申请要求2017年7月27日提交的美国临时专利申请序列号62/537,541和2018年3月5日提交的美国临时专利申请序列号62/638,554的优先权权益，其全部内容通过引用并入本文。本专利技术是在国家健康研究院授予的ULlTR000457-06的政府支持下完成的。政府对本专利技术享有一定权利。
本专利技术涉及使用不可逆交联剂和任选地含醛固定剂固定细胞外囊泡的方法。该方法可用于细胞外囊泡的成像以及疾病的诊断或监测。
技术介绍
癌症是死亡的主要原因(Torreetal.，"AGlobalCancerIncidenceandMortalityRatesandTrends-AnUpdate",CancerEpidemiolBiomarkersPrev.25:16-27(2016))，癌症的早期诊断及其适当的表征对于降低死亡率是必要的(McPhailetal.,StageatDiagnosisandEarlyMortalityfromCancerinEngland,"BrJCancerS108-115(2015))。男性中最常见的新癌症病例是前列腺癌(161,000人)、肺癌(116,900人)和结肠直肠癌(71,000人)。同前。对于女性而言，最常见的新癌症病例是乳腺癌(252,000人)、肺癌(105,510人)和结肠直肠癌(64,000人)。2017年，估计新的眼肿瘤病例是3,130，而估计死亡是330。同前。虽然眼内肿瘤的流行性显著低于其它癌症但研究眼组织和眼流体是使用眼作为...
【技术保护点】
1.一种固定细胞外囊泡的方法，所述方法包括：/n提供含有细胞外囊泡的样本，和/n在有效固定所述细胞外囊泡的条件下使所述样本与不可逆交联剂接触。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170727 US 62/537,541;20180305 US 62/638,5541.一种固定细胞外囊泡的方法，所述方法包括：
提供含有细胞外囊泡的样本，和
在有效固定所述细胞外囊泡的条件下使所述样本与不可逆交联剂接触。
2.权利要求1所述的方法，还包括：
在使所述样本与不可逆交联剂接触以固定所述细胞外囊泡之前、之后或同时，使所述样本与含醛固定剂接触。
3.权利要求2所述的方法，其中所述细胞外囊泡选自：外泌颗粒、外泌体、多囊泡体、腔内囊泡(ILV)、多囊泡内体(MVE)、癌小体、大小为20-10,000nm的微囊泡、凋亡体和来源于内体或质膜的囊泡。
4.权利要求2所述的方法，其中所述样本是生物流体或组织。
5.权利要求4所述的方法，其中所述样本是生物流体，其选自：血液制品、溶胶、悬浮液、凝胶、胶体、流体、液体、血浆、塑性固体、悬浮液、凝胶、乳汁、乳头抽吸液、尿液、精液、羊水、脑脊液、玻璃体、房水、滑液、淋巴、胆汁、唾液、胆汁、耵聍(耳垢)、乳糜、食糜、内淋巴、外淋巴、渗出物、粪便、射出液体、胃酸、胃液、粘液、心包液、腹膜液、胸膜液、脓液、黏膜液、皮脂(皮肤油)、浆液、阴垢、痰液、汗液、眼泪、阴道分泌物、手术废物和呕吐物。
6.权利要求5所述的方法，其中所述生物流体样本是玻璃体或房水。
7.权利要求5所述的方法，其中所述生物流体样本是选自全血、血浆、血小板和血清的血液制品。
8.权利要求5所述的方法，其中所述生物流体样本是尿。
9.权利要求5所述的方法，其中所述生物流体样本是脑脊液。
10.权利要求5所述的方法，其中所述生物流体样本是乳头抽吸液。
11.权利要求4所述的方法，其中所述样本是选自以下的组织：皮肤、骨、软骨、腱、韧带、椎间盘、角膜、晶状体、半月板、毛发、横纹肌、平滑肌、心肌、脂肪组织、纤维组织、神经组织、结缔组织、耳蜗、睾丸、卵巢、胃、肺、心脏、肝、胰腺、肾、肠和眼。
12.权利要求2所述的方法，其中所述不可逆交联剂选自：水溶性碳二亚胺、卤化氰及其混合物。
13.权利要求12所述的方法，其中所述不可逆交联剂是1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺。
14.权利要求12所述的方法，其中所述不可逆交联剂是选自以下的卤化氰：溴化氰、氟化氰、氯化氰和碘化氰。
15.权利要求2所述的方法，还包括：
独立于与所述不可逆交联剂的接触和与所述含醛固定剂的接触，并且在其之前、之后或同时，使所述样本与另外的交联剂接触，所述另外的交联剂选自：乙二醇二(甲基)丙烯酸酯、乙二醇二丙烯酸酯、二(乙二醇)二丙烯酸酯、四(乙二醇)二丙烯酸酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二(乙二醇)二甲基丙烯酸酯、三(乙二醇)二甲基丙烯酸酯、亚甲基双丙烯酰胺的衍生物、N,N-亚甲基双丙烯酰胺、N,N-亚甲基双丙烯酰胺、N,N-(1,2-二羟基亚乙基)双丙烯酰胺、无甲醛的交联剂、N-(1-羟基-2,2-二甲氧基乙基)丙烯酰胺、二乙烯基苯、福尔马林固定剂、甲醛钙、甲醛盐水、锌福尔马林(未缓冲的)、Zenker固定剂、Helly固定剂、B-5固定剂、Bouin溶液、Hollande溶液、Gendre溶液、Clarke溶液、Carnoy溶液、Methacarn、酒精福尔马林和福尔马林醋酸酒精。
16.权利要求2所述的方法，其中所述细胞外囊泡具有20纳米至10,000nm的尺寸。
17.权利要求2所述的方法，还包括：
对固定的细胞外囊泡成像。
18.权利要求17所述的方法，其中所述成像通过以下来进行：透射电子显微术、扫描电子显微术、冷冻电子显微术、双目立体显微术、宽场显微术、偏振显微术、相差显微术、多光子显微术、微分干涉相差显微术、荧光显微术、激光扫描共焦显微术、多光子激发显微术、射线显微术、超声显微术、比色分析、化学发光分析、分光光度法、正电子发射断层扫描、计算机断层扫描和磁共振成像。
19.权利要求17所述的方法，还包括：
基于所述成像检测所述生物样本中的细胞外囊泡。
20.权利要求19所述的方法，其中所述生物样本是临床样本。
21.权利要求20所述的方法，其中所述临床样本来自用临床药物治疗的患者。
22.权利要求17所述的方法，还包括：
基于所述成像诊断提供临床样本的受试者是否具有疾病或病症。
23.权利要求22所述的方法，其中所述疾病或病症选自：癌症、炎性疾病、感染、变性疾病、病原体引起的疾病、神经疾病和病症、以及内部功能障碍。
24.权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症是选自青光眼和其它眼病的内部功能障碍。
25.权利要求23所述的方法，其中所述疾病或病症是以免疫缺陷或超敏反应为特征的内部功能障碍。
26.权利要求25所述的方法，其中所述免疫缺陷或超敏反应选自：类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病关节炎、银屑病、皮炎、多肌炎/皮肌炎、中毒性表皮坏死松解症、全身性硬皮病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、变应性病症、湿疹、哮喘、红斑狼疮(SLE)、多发性硬化、变应性脑脊髓炎、结节病、肉芽肿病(包括韦格纳肉芽肿病)、粒细胞缺乏症、血管炎(包括ANCA)、再生障碍性贫血、钻石布莱克贫血、免疫溶血性贫血、恶性贫血、单纯红细胞再生障碍性贫血(PRCA)、因子VIII缺乏、血友病A、自身免疫性中性白细胞减少症、全血细胞减少症、白细胞减少症、涉及白细胞渗出病的疾病、多器官损伤综合征、重症肌无力、抗原-抗体复合物介导的疾病、抗肾小球基底膜疾病、抗磷脂抗体综合征、过敏性神经炎、白塞病、卡斯特曼综合征、古德帕斯彻氏综合征、Lambert-Eaton肌无力综合征、雷诺综合征、舍格林氏综合征、史提芬强生综合征、实体器官移植排斥、移植物抗宿主病(GVHD)、大疱性类天疱疮、天...
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