一种测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法技术

本发明专利技术提供了一种测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，该方法利用高效液相色谱串联RID‑20A示差折光检测器对可溶性糖进行检测，可区分都为五碳糖的葡萄糖及果糖，达到对葡萄糖、果糖、蔗糖三种可溶性糖同时进行准确检测的效果，所需样品量较少，仅需要0.1g甚至更少样品即可进行精确检测；检测步骤少，简单快捷，重现性较好，降低了实验误差并提高了数据的准确性，可同时对葡萄糖、果糖、蔗糖三种可溶性糖进行定性、定量，为番茄中可溶性糖的混合物准确判定、快速检测提供了科学依据。

A HPLC method for the determination of soluble sugar in tomato fruit

【技术实现步骤摘要】
一种测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法
本专利技术涉及分析化学领域，尤其涉及一种测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法。
技术介绍
番茄属管状花目茄科(Solanaceae)番茄属(lycopersicon)一年或多年生植物，是一种营养价值很高的蔬菜类经济作物，在我国南北方均广泛种植。由于其果实口味酸甜，营养丰富，深受消费者喜爱。番茄的口味由许多因素决定，番茄口味由许多因素影响，可溶性糖是很重要的决定因素之一。番茄中主要的可溶性糖成分为葡萄糖、果糖和蔗糖，其中葡萄糖和果糖含量更多。随着番茄果实的成熟，番茄中的可溶性糖的含量会改变，进而会影响番茄的风味。当前对可溶性糖的分析多以蒽酮硫酸比色法、苯酚法、婓林法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法等。其中蒽酮硫酸比色法、苯酚法和婓林法仅能够检测出可溶性糖总量，无法检测出不同的可溶性糖组分的含量，误差较大，成本高，使用化学试剂容易造成危险及污染，操作复杂。气相色谱法需要对测试样品进行衍生化处理，操作过程复杂。由于葡萄糖及果糖都为五碳糖，在高效液相色谱中特征峰较难分离，因此对于多种可溶性糖的混合物无法同时检测分析，难以精确检测。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，旨在解决现有技术中采用高效液相色谱法无法同时检测多种可溶性糖的问题。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，包括如下步骤：配制葡萄糖标准品、果糖标准品、蔗糖标准品的混合标准溶液，将所述混合标准溶液进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测得到标准图谱，并制作标准曲线，获取各标准品的回归方程；配置番茄待测品；将所述番茄待测品在与所述混合标准溶液相同的检测条件下进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测，获得所述番茄待测品的色谱图，根据所述番茄待测品的色谱图的保留时间确定葡萄糖、果糖、蔗糖的种类，并根据各种类的色谱峰面积计算得到所述葡萄糖、果糖、蔗糖的含量。本专利技术提供了一种利用高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器同时检测番茄中葡萄糖、果糖、蔗糖三种可溶性糖的方法，首先对葡萄糖标准品、果糖标准品、蔗糖标准品的混合标准溶液进行分析，得到标准图谱并制作标准曲线；再对番茄待测品进行预处理，以少量的样品进行预处理得到的溶液在与所述混合标准溶液相同的检测条件下进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测，根据所述番茄待测品的色谱图的保留时间即可确定各可溶性糖的种类，并根据色谱峰面积及标准曲线即可分析得到各可溶性糖的含量。该检测方法利用高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器对可溶性糖进行检测，可区分都为五碳糖的葡萄糖及果糖，达到对葡萄糖、果糖、蔗糖三种可溶性糖同时进行准确检测的效果，所需样品量较少，仅需要0.1g甚至更少样品即可进行精确检测；检测步骤少，简单快捷，重现性较好，降低了实验误差并提高了数据的准确性，可同时对葡萄糖、果糖、蔗糖三种可溶性糖进行定性、定量，为番茄中可溶性糖的混合物准确判定、快速检测提供了科学依据。附图说明图1是本专利技术实施例提供的果糖、葡萄糖、蔗糖的标准溶液的色谱图。图2是本专利技术实施例提供的果糖标准品的标准曲线图。图3是本专利技术实施例提供的葡萄糖标准品的标准曲线图。图4是本专利技术实施例提供的蔗糖标准品的标准曲线图。图5是本专利技术实施例提供的番茄待测液液的色谱图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和技术效果更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。结合本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。在本专利技术的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本专利技术的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。在本专利技术的描述中，所涉及的各种仪器与试剂的说明如下：各仪器型号：高效液相色谱仪为岛津LC-16；电子天平为sartorius；恒温水浴锅为江苏金怡；真空冻干机为宁波新芝；离心机为eppendorf；组合式溶剂过滤器为上海生工。各试剂产家：标品-D-(+)-葡萄糖、标品-蔗糖购自sigma-Aldrich公司；标品-D(-)-果糖购自国家标准品网；甲醇、乙腈购自sigma公司，纯度为色谱纯；纯水为娃哈哈纯净水。本专利技术实例提供一种测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，包括如下步骤：S01.配制葡萄糖标准品、果糖标准品、蔗糖标准品的混合标准溶液，将所述混合标准溶液进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测得到标准图谱，并制作标准曲线，获取各标准品的回归方程；S02.配制番茄待测品；将所述番茄待测品在与所述混合标准溶液相同的检测条件下进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测，获得所述番茄待测品的色谱图，根据所述番茄待测品的色谱图的保留时间确定葡萄糖、果糖、蔗糖的种类，并根据各种类的色谱峰面积计算得到所述葡萄糖、果糖、蔗糖的含量。本专利技术提供了一种利用高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器对可溶性糖进行检测，可区分都为五碳糖的葡萄糖及果糖，达到对葡萄糖、果糖、蔗糖三种可溶性糖同时进行准确检测的效果，所需样品量较少，仅需要0.1g甚至更少样品即可进行精确检测；检测步骤少，简单快捷，重现性较好，降低了实验误差并提高了数据的准确性，可同时对葡萄糖、果糖、蔗糖三种可溶性糖进行定性、定量，为番茄中可溶性糖的混合物准确判定、快速检测提供了科学依据。具体的，在上述步骤S01中，配制葡萄糖标准品、果糖标准品、蔗糖标准品的混合标准溶液，其中，标品-D-(+)-葡萄糖、标品-蔗糖购自sigma-Aldrich公司；标品-D(-)-果糖购自国家标准品网；提供标准品混合标准溶液，将所述标准品混合标准溶液进行高效液相色谱检测，分析得到标准图谱，进而确定不同种类的标准品的保留时间以及确定标准曲线。优选的，所述混合标准溶液中，葡萄糖标准品的浓度为50mg/mL；果糖标准品的浓度为50mg/mL；蔗糖标准品的浓度为50mg/mL。在本专利技术优选实施例中，所述混合标准溶液的配制方法如下：分别精密称取适量葡萄糖标准品、果糖标准品、蔗糖标准品，用超纯水溶解所述标准品制备得到所述混合标准溶液。优选的，将所述混合标准溶液进行逐级稀释，配制至少5种不同浓度的混合标准稀释液，将所述不同浓度的混合标准稀释液进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测并得到标准图谱。提供至少5种不同浓度的混合标准稀释液，有一定数量不同浓度的样品进行检测，确保能够绘制得到标准曲线进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，其特征在于，包括如下步骤：/n配制葡萄糖标准品、果糖标准品、蔗糖标准品的混合标准溶液，将所述混合标准溶液进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测得到标准图谱，并制作标准曲线，获取各标准品的回归方程；/n配制番茄待测品；将所述番茄待测品在与所述混合标准溶液相同的检测条件下进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测，获得所述番茄待测品的色谱图，根据所述番茄待测品的色谱图的保留时间确定葡萄糖、果糖、蔗糖的种类，并根据各种类的色谱峰面积计算得到所述葡萄糖、果糖、蔗糖的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，其特征在于，包括如下步骤：
配制葡萄糖标准品、果糖标准品、蔗糖标准品的混合标准溶液，将所述混合标准溶液进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测得到标准图谱，并制作标准曲线，获取各标准品的回归方程；
配制番茄待测品；将所述番茄待测品在与所述混合标准溶液相同的检测条件下进行高效液相色谱串联RID-20A示差折光检测器检测，获得所述番茄待测品的色谱图，根据所述番茄待测品的色谱图的保留时间确定葡萄糖、果糖、蔗糖的种类，并根据各种类的色谱峰面积计算得到所述葡萄糖、果糖、蔗糖的含量。


2.根据权利要求1所述的测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件如下：
检测器为岛津LC-16液相色谱仪搭配RID-20A示差折光检测器；
色谱柱为NH2色谱柱；
柱温为30-50℃；
流动相A溶液为纯水，流动相B溶液为乙腈；
洗脱方式为等度洗脱；
洗脱时间为15～20min。


3.据权利要求2所述的测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，其特征在于，等度洗脱时，流动相A的体积百分比为15％～20％，流动相B的百分比为80％～85％。


4.据权利要求3所述的测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件如下：
所述NH2色谱柱的规格为3μm，4.6×250mm；
进样量为10-30μL；
洗脱流速为1.0～1.5mL/min。


5.根据权利要求1～4任一所述的测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，其特征在于，配置番茄待测品的步骤中，包括如下方法：
提供番茄样品，收集所述番茄样品的果肉；
将所述果肉加入有机溶剂进行萃取得到第一混合物，将所述第一混合物进行加热处理后进行离心处理，收集第一混合物上清液；
将所述第一混合物上清液进行浓缩处理，得到第一提取物；
将所述第一提取物加入超纯水进行混合、过滤得到所述番茄待测品。


6.根据权利要求5所述的测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，其特征在于，将所述果肉加入有机溶剂进行萃取得到第一混合物的步骤中，所述第一混合物的浓度为50～100mg/L。


7.根据权利要求5所述的测定番茄果实中可溶性糖的高效液相色谱方法，其特征在于，将所述第一混合物进行加热处理的步骤中，所述加热处理的温度为35～40℃，加热处理的时间为25～30分钟。


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【专利技术属性】
技术研发人员：黄腾波，邱琦芸，李紫薇，
申请(专利权)人：深圳大学，深圳大学龙华生物产业创新研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44