一种与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术涉及蔬菜分子育种技术领域，特别涉及一种与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记及其应用。所述的分子标记为分子标记S‑177、S‑33、S‑280或S‑113，位于辣椒第10号染色体，本发明专利技术还提供了鉴定上述标记的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～8所示。本发明专利技术提供的与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记及其鉴定引物可以用于辣椒分子标记辅助选择育种，可以加速成熟果实易脱落辣椒新品种的培育，大大提高该性状遗传改良的效率，降低选育成本，在实际育种和生产中具有广阔的应用前景。

A molecular marker closely linked or co separated with the dehiscence of mature pepper fruit and its application

【技术实现步骤摘要】
一种与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记及其应用
本专利技术涉及蔬菜分子育种
，特别涉及一种与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记及其应用。
技术介绍
辣椒(Capsicumspp.)属于茄科辣椒属一年生或多年生植物。辣椒果实风味独特、色形多样，除用作鲜食外，也可以用于辣椒粉、辣椒酱、辣椒油等调味品的初加工以及进行辣椒素和辣椒红素提取等精深加工。据农业农村部大宗蔬菜产业体系统计，近年来，我国目前干制和加工型辣椒年均种植面积约为900万亩，辣椒加工产业发展迅猛，辣椒加工制品远销全球，加工专用型辣椒品种市场需求日趋旺盛。成熟果实脱把是辣椒进行采后加工的首要环节，当前主要依靠人工剪柄和机械去把，前者费时耗力、成本高，后者效率虽较高但是常常存在果把去除不干净进而影响品质以及损耗过大的问题。因此，从遗传育种改良的角度来选育一个成熟果实自然易脱把的辣椒品种可能将是解决上述问题的有效途径。辣椒成熟果实脱把性，是指辣椒果实红熟后，从萼片处分离的特性(如图1)。成熟果实易脱把是野生辣椒的一个典型性状，可能有利于野外自然环境下辣椒种子的自然传播。经过人工驯化的辣椒5个主要栽培种中，仅有C.frutescens部分种质仍保留了该野生种性，其他栽培种则均表现为成熟果实难脱把的特性。遗传分析结果表明，辣椒成熟果实易脱把对难脱把表现为受单基因显性遗传控制，其中，易脱把对难脱把表现为显性，而且该基因被初步定位于辣椒第10号染色体。但是，迄今可用于辅助选择育种的辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离分子标记的开发尚未见报道。通过开发辣椒成熟果实脱落基因紧密连锁的分子标记，可以实现在种子或者苗期阶段对辣椒单株果实脱把性进行早期鉴别，对提高加工专用型辣椒新品种的培育效率具有重要意义。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记。本专利技术的另一目的在于提供上述与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记的应用。本专利技术的再一目的在于提供一种鉴定上述与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记的引物。本专利技术的第四个目的在于提供上述鉴定与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记的引物的应用。本专利技术的第五个目的在于提供一种辣椒分子育种的方法。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记，为分子标记S-177、S-33、S-280或S-113，位于辣椒第10号染色体，其中，各分子标记对应的物理坐标如下所示：上述分子标记存在插入或缺失，导致辣椒成熟果实脱把性的不同；所述的与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记在辣椒育种领域中的应用；一种鉴定上述与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记的引物，其核苷酸序列如下所示：S-177-F：5′-CCATCACAAAATACGAAGGC-3′；S-177-R：5′-TAGGAAGCAAAATCGTGTCA-3′；S-33-F：5′-TGATTAAGTGGATAAGCTAAGC-3′；S-33-R：5′-AGTTAAACTACGCTCTGAGG-3′；S-280-F：5′-TGGCCCGACGATTATTAAAA-3′；S-280-R：5′-CCATGTTATCCGGATCAACT-3′；S-113-F：5′-CCAATAAGTAGATGAAGGGCA-3′；S-113-R：5′-AAGGAAAGCTTCAACATGGA-3′；所述的鉴定与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记的引物在辣椒育种领域中的应用；一种鉴定辣椒成熟果实脱把性的试剂盒，包含上述引物；所述的试剂盒优选还包含PCRBuffer、MgCl2溶液、dNTP、Taq酶和ddH2O；所述的试剂盒在辣椒育种领域中的应用；一种辣椒分子育种的方法，包含如下步骤：(1)提取待测植株的基因组DNA；(2)以待测植株的基因组DNA为模板，利用上述鉴定与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记的引物进行PCR扩增反应，同时以表型为成熟果实易脱把、基因型为纯合子的辣椒和表型为成熟果实难脱把的辣椒的DNA分别为对照1和对照2；(3)电泳检测PCR扩增产物，并进行分析：如待测样品的电泳条带仅与对照1的电泳条带大小相同，则待测植株的辣椒成熟果实易脱把；如待测样品的电泳条带同时出现对照1和对照2大小的电泳条带，则待测植株的辣椒成熟果实易脱把；如待测样品的电泳条带仅与对照2条带电泳大小相同，则待测植株的辣椒成熟果实难脱把；所述的表型为成熟果实易脱把、基因型为纯合子的辣椒优选为野生辣椒‘Chiltepin’；所述的表型为成熟果实难脱把的辣椒优选为辣椒自交系‘BB3’；所述PCR扩增反应的反应体系优选为：10×PCRBuffer2.0μL，25mMMgCl2溶液2.0μL，10mMdNTP0.2μL，1UTaq酶0.2μL，1μM上游引物1μL，1μM下游引物1μL，50ng/μL模板DNA2.0μL，ddH2O补足20μL；所述PCR扩增反应的反应程序优选为：94℃3min；94℃30s，55℃30s，72℃1min，共计32个循环；72℃5min；本专利技术的原理：本专利技术以本课题组已公开发表的高密度SNP遗传图谱(ChengJ,QinC,TangX,etal.DevelopmentofaSNParrayanditsapplicationtogeneticmappinganddiversityassessmentinpepper(Capsicumspp.).ScientificReports,2016,6:33293.)为基础，结合‘BA3’(C.annuum)בYNXML’(C.frutescens)F2分离群体(n＝79)单株的果实脱把表型数据，首先对辣椒成熟果实脱把基因进行初定位。然后以果实成熟后不脱把的栽培辣椒自交系‘BB3’(C.annuum)和果实成熟后易脱把的近缘野生辣椒‘Chiltepin’分别为母本和父本，构建回交一代群体[‘BB3’×(‘BB3’בChiltepin’)]，利用该群体对果实脱把基因初定位区间进行标记加密，获得与辣椒成熟果实脱把基因紧密连锁的分子标记并在F2小群体中进行验证(图11)，为实现辣椒果实脱把性分子标记辅助选择奠定基础。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术开发了7个与辣椒成熟果实脱把紧密连锁的标记，并进行了初步的可靠性验证，其中2个与表型共分离，2个与表型紧密连锁。利用上述分子标记可以实现在辣椒幼苗阶段准确判定植株果实脱把性，可以大大提高该性状遗传改良的效率，降低选育成本，在实际育种和生产中具有广阔的应用前景。(2)本专利技术提供的与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记，其特征在于为分子标记S-177、S-33、S-280或S-113，位于辣椒第10号染色体，其中，各分子标记对应的物理坐标如下所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记，其特征在于为分子标记S-177、S-33、S-280或S-113，位于辣椒第10号染色体，其中，各分子标记对应的物理坐标如下所示：



上述分子标记存在插入或缺失，导致辣椒成熟果实脱把性的不同。


2.权利要求1所述的与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记在辣椒育种领域中的应用。


3.一种鉴定权利要求1所述的与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记的引物，其特征在于其核苷酸序列如下所示：
S-177-F：5′-CCATCACAAAATACGAAGGC-3′；
S-177-R：5′-TAGGAAGCAAAATCGTGTCA-3′；
S-33-F：5′-TGATTAAGTGGATAAGCTAAGC-3′；
S-33-R：5′-AGTTAAACTACGCTCTGAGG-3′；
S-280-F：5′-TGGCCCGACGATTATTAAAA-3′；
S-280-R：5′-CCATGTTATCCGGATCAACT-3′；
S-113-F：5′-CCAATAAGTAGATGAAGGGCA-3′；
S-113-R：5′-AAGGAAAGCTTCAACATGGA-3′。


4.权利要求3所述的鉴定与辣椒成熟果实脱把性紧密连锁或共分离的分子标记的引物在辣椒育种领域中的应用。


5.一种鉴定辣椒成熟果实脱把性的试剂盒，其特征在于包含权利要求3所述的引物。


6.根据权利要求5所述的鉴定辣椒成熟果实脱把性的试剂盒，其特征在于：
所述的试剂盒还包含PCRBuffe...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡芳，程蛟文，胡开林，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44