靶向肿瘤抗原的抗体与iNKT细胞的组合的制备方法与用途技术

本发明专利技术提供了靶向肿瘤抗原的抗体和免疫细胞iNKT的组合在制备抗肿瘤的药物中的用途。本发明专利技术还提供了所述组合的制备方法。本发明专利技术的组合采用iNKT细胞为效应细胞，联合靶向肿瘤抗原的抗体，实现了更高的肿瘤靶细胞杀伤活性，进一步提升了抗肿瘤的能力。

Preparation and application of the combination of antibody targeting tumor antigen and iNKT cell

【技术实现步骤摘要】
靶向肿瘤抗原的抗体与iNKT细胞的组合的制备方法与用途
本专利技术涉及肿瘤的免疫治疗领域。具体地，本专利技术涉及靶向肿瘤抗原的抗体和iNKT细胞的组合的用途、使用靶向肿瘤抗原的抗体与iNKT细胞的组合进行肿瘤的免疫治疗的试剂盒以及它们的制备方法。
技术介绍
肿瘤免疫治疗能够靶向肿瘤诱导的免疫逃逸与免疫抑制性肿瘤微环境，通过激活体内的免疫细胞以增强机体抗肿瘤免疫应答，可特异性地清除肿瘤病灶、抑制肿瘤生长，并且能够打破免疫耐受。由于肿瘤免疫治疗副作用小、治疗效果明显，被称为继肿瘤手术、放疗和化疗之后的第四大肿瘤治疗技术。2013年12月，肿瘤免疫疗法被Science杂志评定位居全球十大科学研究突破之首。目前的肿瘤免疫疗法主要是增强抗肿瘤免疫反应。主要包括两类，一类是“被动”免疫疗法，利用免疫系统的效应细胞或分子直接攻击肿瘤细胞，包括抗体或其衍生物(如抗体-药物偶联物)靶向疗法，过继性免疫细胞疗法(如淋巴因子激活的杀伤细胞，自然杀伤细胞，自然杀伤T细胞，树突状细胞等)，基因工程T细胞(如嵌合抗原受体CAR-T，T细胞受体TCR-T等)。另一类是“主动”免疫疗法，通过调控内源的免疫调节机制或免疫激活机制来增强免疫系统，例如利用I型干扰素，Toll样受体激动剂和干扰素基因激动剂等增强抗原呈递细胞对抗原的摄取、加工和递呈能力；利用树突细胞疫苗和抗细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)单克隆抗体等以增强未分化幼稚T细胞的活化和扩增；通过离体刺激扩增肿瘤浸润T细胞(tumorinfiltratinglymphoeytes,TILs)后回输癌症患者来强化免疫应答的效应。免疫增强策略确实一定程度上控制了肿瘤生长，但抑制多种类型肿瘤的有效性有待提升。值得注意的是，免疫激活剂在增加机体对肿瘤的免疫应答的同时，也增加了超生理水平免疫应答的风险。例如CAR-T细胞荷载抗原结合的结构域和来自受体的细胞内共刺激结构域，对抗原的识别不受主要组织相容性复合物表达的限制，可更有效地攻击肿瘤细胞。但随之带来的是脱靶毒性以及急性细胞因子释放综合征等超生理水平的应答的结果。日益增多的临床试验证实，肿瘤的联合治疗策略，如免疫疗法与化学疗法、放射疗法、溶瘤病毒治疗、靶向疗法等的组合等，相比与单一治疗，在提高治疗有效性以及降低副作用方面有极大的优势。自然杀伤T细胞(NaturalkillerTcell,NKT)是肿瘤免疫治疗策略中重要的细胞类型。其中，I型NKT细胞即iNKT表达恒定的T细胞抗原受体(TCR)，在α-GalCer糖脂类抗原刺激活化后可分泌抗肿瘤相关细胞因子，提高自然杀伤细胞(NK)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。iNKT细胞还可通过影响肿瘤微环境或在抗体依赖性细胞毒性(Antibody-DependentCellularCytotoxicity,ADCC)中发挥重要的抗肿瘤及抗感染作用。在多种实体瘤或者恶性血液瘤临床试验中，给患者过继回输体外扩增的iNKT细胞显示了良好的治疗效果。NKT细胞免疫疗法肿瘤的有效性与及安全性已被广泛认可。日本厚生劳动省已经批准该方法在临床应用。此外，iNKT细胞治疗技术还可与其他的肿瘤治疗技术联合应用，例如外科手术、化学药物治疗、放射治疗等。目前iNKT细胞治疗肿瘤所面临的主要挑战是靶向性低，特别是对不表达CD1d分子的肿瘤细胞治疗效果非常有限。肿瘤治疗性单克隆抗体(MonoclonalAntibodies,mAbs)的作用靶点涵盖肿瘤细胞相关抗原(如CD19、CD20、CD22、Her2)、上皮与血管新生受体(如EGFR、VEGF、VEGFR2)、以及免疫检查点关键分子(如CTLA4、PD-1、PD-L1)等。可通过以下机制提升杀伤肿瘤细胞效果：(1)直接阻断或活化配体-受体信号转导活性，诱导细胞凋亡；(2)免疫细胞介导的肿瘤细胞杀伤，包括抗体依赖性细胞吞噬作用(Antibody-DependentCellPhagocytosis,ADCP)与ADCC、补体依赖性细胞毒性(Complement-DependentCytotoxicity,CDC)；(3)基因工程修饰技术增加靶向肿瘤的精准性，如抗体单链可变片段(single-chainvariableFragment,scFv)基因修饰性T细胞；(4)免疫检查点关键分子的阻断抗体，可通过减少免疫耐受，从而增强T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果。(5)靶向肿瘤脉管系统和基质的抗体，可拮抗血管受体或配体，诱导血管和基质细胞消融从而抑制肿瘤细胞的增殖。抗体具有作用靶点更为特异，副作用更少的优势。目前临床应用的抗体药物从早期的利妥昔单抗Rituximab(1997)，曲妥珠单抗Trastuzumab(1998)，到近年来研发成功的德瓦鲁单抗Durvalumab(2017)，奥英妥珠单抗Inotuzumabozogamicin(2017)，Moxetumomabpasudotox(2018)，Cemiplimab-rwlc(2018)，累计有30余种，显示了令人充满希望的抗肿瘤效果，但大多数抗体单独使用依然难以实现对肿瘤细胞的长期有效的抑制和杀伤作用。艾滋病(AIDS)是由HIV病毒感染人体后导致免疫功能受损的疾病，患者发展到艾滋病后期容易并发各种危及生命的机会性感染和恶性肿瘤。由于此类患者伴有免疫缺陷，治疗方案的选择及剂量要非常谨慎。(赵鹏,赵华,涂波.艾滋病合并弥漫大B细胞淋巴瘤1例报道[J].解放军医学院学报,2016,37(10):1117-1118.)对于大多数肿瘤，例如CD20阳性的弥漫大B细胞淋巴瘤，单独使用其靶向抗体治疗，可以增加对肿瘤的治愈；但是由于艾滋病患者的免疫缺陷特质，这进一步增加了对患者体液免疫的抑制，从而造成机会性感染的发生，这对患者治疗是有危害的。因此，靶向抗体药物剂量需适量，而这会导致治疗效果的下降。如何解决抗体药物自身存在的免疫原性，如抗药抗体(anti-drugantibody,ADA)反应、长期使用肿瘤靶点的耐受性以及单一阻断信号转导通路的长效性问题，是肿瘤抗体药物无法回避的挑战。由于以上现有技术存在的缺陷，需要开发一种治疗效果佳、对患者副作用低的抗肿瘤药物和治疗方法。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的是提供一种靶向肿瘤抗原的抗体和iNKT细胞的组合在制备抗肿瘤药物中的用途，本专利技术还提供了使用靶向肿瘤抗原的抗体与效应细胞的组合进行肿瘤的免疫治疗的试剂盒以及它们的制备方法。所述肿瘤选自弥漫大B细胞淋巴瘤、肉瘤、胶质瘤、高级别胶质瘤、母细胞瘤、骨肉瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、大肠癌、造血系统癌、睾丸癌、卵巢癌、鳞状细胞癌、腺癌、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头颈癌和头颈部鳞状细胞癌；优选地，所述肿瘤为AIDS并发的恶性肿瘤；所述AIDS并发的恶性肿瘤优选选自AIDS并发的弥漫大B细胞淋巴瘤、AIDS并发的卡波西肉瘤和AIDS并发的皮肤粘膜鳞癌；优选地，所述肿瘤为AIDS并发的弥漫大B细胞淋巴瘤。优选地，所述药物为注射剂、外用药物剂型或口服剂。优选地，所述药物为片剂、胶囊剂、膜剂或颗粒剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向肿瘤抗原的抗体和iNKT细胞的组合在制备抗肿瘤药物中的用途，所述肿瘤选自弥漫大B细胞淋巴瘤、肉瘤、胶质瘤、高级别胶质瘤、母细胞瘤、骨肉瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、大肠癌、造血系统癌、睾丸癌、卵巢癌、鳞状细胞癌、腺癌、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头颈癌和头颈部鳞状细胞癌；/n优选地，所述肿瘤为AIDS并发的恶性肿瘤；所述AIDS并发的恶性肿瘤优选选自AIDS并发的弥漫大B细胞淋巴瘤、AIDS并发的卡波西肉瘤和AIDS并发的皮肤粘膜鳞癌；/n优选地，所述肿瘤为AIDS并发的弥漫大B细胞淋巴瘤。/n

【技术特征摘要】
1.一种靶向肿瘤抗原的抗体和iNKT细胞的组合在制备抗肿瘤药物中的用途，所述肿瘤选自弥漫大B细胞淋巴瘤、肉瘤、胶质瘤、高级别胶质瘤、母细胞瘤、骨肉瘤、浆细胞瘤、组织细胞瘤、大肠癌、造血系统癌、睾丸癌、卵巢癌、鳞状细胞癌、腺癌、膀胱癌、脑癌、神经系统癌、头颈癌和头颈部鳞状细胞癌；
优选地，所述肿瘤为AIDS并发的恶性肿瘤；所述AIDS并发的恶性肿瘤优选选自AIDS并发的弥漫大B细胞淋巴瘤、AIDS并发的卡波西肉瘤和AIDS并发的皮肤粘膜鳞癌；
优选地，所述肿瘤为AIDS并发的弥漫大B细胞淋巴瘤。


2.根据权利要求1所述的用途，其中所述药物为注射剂、外用药物剂型或口服剂；
优选地，所述药物为缓释剂或非缓释剂；
优选地，所述药物为片剂、胶囊剂、膜剂或颗粒剂。


3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述靶向肿瘤抗原的抗体包含Fc序列；优选地，所述靶向肿瘤抗原的抗体包含含A330L/I332E突变序列的Fc序列。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，所述靶向肿瘤抗原的抗体为靶向以下靶点的抗体：PD-L1、CD47、CD52、CTLA4、RANKL、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD147、GD2、EGFR、VEGF、PIGF、VEGFR、VEGFR2、PSMA、HER2、AXL、ROR2、PD-1、PDGF-Rα、SLAMF7和/或CCR4；
优选地，所述靶向肿瘤抗原的抗体为靶向CD20的抗体；
优选地，所述抗体包含SEQIDNO:2所示的重链和SEQIDNO:4所示的轻链。
优选地，所述抗体重链的编码核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，所述抗体轻链的编码核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述抗体为包含SEQIDNO:2所示的重链和SEQIDNO:4所示的轻链的靶向CD20的抗体。


6.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括根据权利要求1所述的用途的靶向肿瘤抗原的抗体和iNKT细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐建青，张晓燕，丁相卿，廖启彬，王婧，
申请(专利权)人：上海鑫湾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31