对微生物的数量进行计数的方法技术

本发明专利技术提供一种在透析流体等中对包含碳酸根离子或碳酸氢根离子的分析物中的微生物的数量进行简单及准确计数的方法。一种微生物的数量的计数方法包括：将分析物添加到用于制备对微生物的数量进行计数的培养基且包含(a)聚丙烯酸和/或其盐、(b)碱土金属的氢氧化物及(c)营养成分的组合物并混合所得混合物的工序；培养包含在分析物中的微生物的工序；以及对微生物的菌落的数量进行计数的工序。

A method of counting the number of microorganisms

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对微生物的数量进行计数的方法
本专利技术涉及一种对分析物中的微生物的数量进行简单计数的方法，且具体来说，涉及一种可应用于透析用水等中的包含碳酸根离子或碳酸氢根离子的分析物的方法。
技术介绍
在饮用水、软饮料、工业用水、制药用水、透析用水等中，被微生物污染的程度要求很小，且已知所存在的微生物的数量通常为显著小的。特别地，标准被规定为对于饮用水来说活菌数为100CFU/mL或小于100CFU/mL且对于透析用水来说活菌数为10CFU/mL或小于10CFU/mL，并且在控制上述标准时定期监测以理解微生物的准确数量是重要的(非专利文献第1号)。在检测食品等中的微生物时，通常应用其中对约1毫升的量的少量分析物悬浮液等进行倾注平板培养(pourplateculture)。然而，对于所存在的微生物量显著少的分析物(例如饮用水等)，根据上述方法，微生物的数量在若干情况下不能准确地计数。例如，当在100毫升分析物中存在10CFU或小于10CFU的细菌时，如果只对其提供1毫升分析物作为所述分析物，则在若干情况下无法检测微生物，且无法准确理解污染状态。为了简单且准确地对液体分析物中的微生物的数量，特别是如上所述存在于大体积液体分析物中的少量微生物的数量进行计数，迄今为止本专利技术人已提出了一种通过使用胶凝剂(例如聚丙烯酸钠)的培养基进行的方法(专利申请JP2016-189545)。更具体来说，所述方法包括其中通过将作为构成培养基的溶剂的流体分析物直接添加到胶凝剂中，以通过在所述培养基中对分析物中的微生物进行培养来形成菌落，并使微生物可见，从而简化操作的方法(稍后阐述的参考例1)。引文列表非专利文献非专利文献(NonPatentLiterature，NPL)1：日本药典(TheJapanesePharmacopoeia)，第17版，一般信息中的G8水(G8WaterinGeneralInformation)NPL2：人工肾用粉状透析流体的制备，附件雷姆派克(LYMPACK)TA3(尼普罗公司(NiproCorporation))
技术实现思路
技术问题然而，当上述方法应用于应用透析流体作为分析物的情况时，培养基变得混浊，且出现了微生物的菌落的可见性降低的新问题。本专利技术人已经发现，通常包含在透析流体(非专利文献第2号)中的大量碳酸钠或碳酸氢钠与聚丙烯酸钠反应而产生二氧化碳气体，从而在培养基中产生不可计数的气泡。在这种情况下，本专利技术的目的是提供一种其中通过抑制来自透析流体的二氧化碳气体的产生，在透析流体等中简单且精确地对存在于包含碳酸根离子或碳酸氢根离子的分析物中的少量微生物计数进行计数的方法。问题的解决方案本专利技术人已努力地继续进行研究，以解决上述问题。结果，本专利技术人发现，如果添加碱土金属的氢氧化物(例如氢氧化钙)作为包含聚丙烯酸钠的培养基的组分，则可抑制二氧化碳气体的产生，且可确保在对微生物的数量进行计数时的可见性，并且完成了本专利技术。更具体来说，本专利技术包括以下阐述的各项。项1.一种对微生物的数量进行计数的组合物的用途，其中所述组合物包含(a)聚丙烯酸和/或其盐、(b)碱土金属的氢氧化物及(c)营养成分。项2.根据项1所述的用途，其中所述组合物还包含(d)着色试剂。项3.根据项1或2所述的用途，其中(b)所述碱土金属的氢氧化物选自氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化钡、氢氧化锶、氢氧化镭及氢氧化铍的群组。项4.一种对微生物的数量进行计数的培养设备的用途，其中所述培养设备包括(a)聚丙烯酸和/或其盐、(b)碱土金属的氢氧化物、(c)营养成分及培养容器。项5.一种用于制备对微生物的数量进行计数的培养基的组合物，包含(a)聚丙烯酸和/或其盐、(b)碱土金属的氢氧化物及(c)营养成分。项6.根据项5所述的组合物，还包含(d)着色试剂。项7.根据项5或6所述的组合物，其中(b)所述碱土金属的氢氧化物选自氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化钡、氢氧化锶、氢氧化镭及氢氧化铍的群组。项8.一种对微生物的数量进行计数的培养设备，包括根据项5到7中任一项所述的组合物以及培养容器。项9.一种微生物的数量的计数方法，包括：向根据项5到7中任一项所述的组合物中添加分析物并混合所得混合物的工序；培养包含在分析物中的微生物的工序；以及对微生物的菌落的数量进行计数的工序。项10.根据项9所述的计数方法，其中所述分析物包含0.005mol/100mL或大于0.005mol/100mL的碳酸根离子或碳酸氢根离子。项11.根据项9或10所述的计数方法，其中所述分析物中的微生物的所述数量为0.1CFU/mL或小于0.1CFU/mL。项12.根据项9到11中任一项所述的计数方法，其中所述分析物的重量是所述组合物中的(a)所述聚丙烯酸和/或其盐的重量的10倍到10,000倍。本专利技术的有利效果根据本专利技术，即使对于包含碳酸根离子或碳酸氢根离子的分析物，也可抑制二氧化碳气体的产生，且可简单且准确地对分析物中的微生物的数量进行计数。特别是，即使对于大量分析物中存在的少量微生物计数，也可实现定量检测。附图说明图1是参考例1中的100毫升凝胶形式的培养基中的红色菌落的照片。图2是比较例1中的100毫升凝胶形式的培养基的照片。图3是实例1中的100毫升凝胶形式的培养基的照片。具体实施方式本专利技术的组合物实质上包含(a)聚丙烯酸和/或其盐、(b)碱土金属的氢氧化物及(c)营养成分。本专利技术的组合物是用于制备对微生物的数量进行计数的培养基的材料。所述制备通常通过添加包含要计数的微生物的液体分析物并将所述分析物混合到所述组合物中作为直接构成培养基的凝胶的溶剂来执行。在这种用途方面，本专利技术的组合物及使用所述组合物制备的培养基不同于微生物的现有培养基。然后，(a)聚丙烯酸和/或其盐起胶凝剂的作用，所述胶凝剂构成对目标微生物进行培养及计数的培养基。聚丙烯酸和/或其盐通过与液体分析物混合来形成均匀的凝胶。这种凝胶的形成通常需要通过加热来溶解或需要冷却，且因此操作简单，并且目标微生物的生长不受阻碍。所形成的凝胶通常没有流动性，且因此可准确地对所存在的微生物的数量进行计数。此外，凝胶通常不会引起脱水收缩，且因此可准确地对所存在的微生物的菌落的数量进行计数。此外，由聚丙烯酸和/或其盐形成的凝胶通常是透明的。因此，微生物的菌落可通过视觉观察被准确地检测到。例如琼脂、卡拉胶及刺槐豆胶等胶凝剂通常用于微生物的培养基等，但上述胶凝剂在凝固液体溶剂时需要加热，且因此不适合直接凝固包含微生物的液体分析物。此外，由于透明度低，通过使用上述胶凝剂来凝固而制备的凝胶也不适合于此。此外，聚乙烯醇难以与液体溶剂均质混合，且还存在容易引起脱水收缩的问题。此外，黄原胶也很难与液体溶剂均质混合而容易形成块状物，其中凝固的凝胶也容易变得不透明。羧甲基纤维素不能凝固液体分析物从而形本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对微生物的数量进行计数的组合物的用途，其中所述组合物包含(a)聚丙烯酸和/或其盐、(b)碱土金属的氢氧化物及(c)营养成分。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170929 JP 2017-1906911.一种对微生物的数量进行计数的组合物的用途，其中所述组合物包含(a)聚丙烯酸和/或其盐、(b)碱土金属的氢氧化物及(c)营养成分。


2.根据权利要求1所述的用途，其中所述组合物还包含(d)着色试剂。


3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述(b)碱土金属的氢氧化物选自氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化钡、氢氧化锶、氢氧化镭及氢氧化铍的群组。


4.一种对微生物的数量进行计数的培养设备的用途，其中所述培养设备包括(a)聚丙烯酸和/或其盐、(b)碱土金属的氢氧化物、(c)营养成分及培养容器。


5.一种用于制备对微生物的数量进行计数的培养基的组合物，包含(a)聚丙烯酸和/或其盐、(b)碱土金属的氢氧化物及(c)营养成分。


6.根据权利要求5所述的组合物，还包含(d)着色试剂。


7.根据权利要求5或6所述的组合物，其中所述(b...

【专利技术属性】
技术研发人员：寺村哉，藤原翠，
申请(专利权)人：捷恩智株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP