测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液技术

本发明专利技术公开了一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液。所述方法包括：制备储备液；将储备液稀释成马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液和柳胺酚工作液；制备校正标准品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得校正标准品；制备质控样品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得质控样品；检测分析样品。本方法具有检测灵敏度高、准确性良好、检测快捷、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点。

【技术实现步骤摘要】
测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液
本专利技术涉及了临床血药浓度监测控制
，具体的是一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液。
技术介绍
肝纤维化是肝病中的一种。人体患有肝纤维化后，容易出现疲乏无力、食欲减退等症状，可能还会出现慢性消化不良、出血等症状，这些症状会给人体造成很大伤害。扶正化瘀片是常用的治疗肝纤维化的中成药之一，其主要成分包括：五味子醇甲(Schisandrin)、五味子乙素(γ-Schisandrin)、马索亚内酯(MassoiaLactone)、丹参素钠(SodiumDanshensu)、野黑樱苷(Prunasin)、苦杏仁苷(Amygdalin)、柚皮素(Naringenin)、槲皮素(Quercetin)、芦丁(Rutin)、商陆苷(Ombuoside)及其代谢产物商陆素(Ombuin)、槲皮苷(Quercitrin)、山奈酚(Kaempferol)、葵烯酸钠(Sodium5-Hydroxy-2-Decenoic)。检测比格犬(Beagle犬)血浆中扶正化瘀片的毒代动力学特征，评估药物主要成分在比格犬体内的暴露水平，对于帮助了解药物在人体内的作用效果具有重要意义。因此，本领域技术人员持续致力于研究用于测定扶正化瘀片主要成分在血浆中浓度的HPLC-MS/MS方法。
技术实现思路
为了克服现有技术中的缺陷，本专利技术实施例提供了一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法及其内标工作液，其具有检测方法方便快捷、检测灵敏度高、准确性高等优点。本申请实施例公开了：一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法，所述方法中采用柳胺酚作为内标，所述方法包括以下步骤：制备储备液：将马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素和柳胺酚分别溶于HPLC甲醇中，获得到马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液和柳胺酚储备液；制备工作液：采用HPLC甲醇和水作为溶剂，将所述马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液分别稀释，获得马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液；采用HPLC甲醇作为溶剂，将所述柳胺酚储备液稀释成柳胺酚工作液，所述柳胺酚工作液中柳胺酚的浓度为50ng/mL；制备校正标准品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得校正标准品；制备质控样品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得质控样品；检测分析样品：在96孔板上做出多个样品标示，向各个样品孔内加入对应的样品；在96孔板上相应的样品中加入柳胺酚工作液或HPLC甲醇；对各个样品进行封板、涡旋离心，并分别提取上清液；对各上清液进行稀释，分别取样分析。具体的，所述空白血浆为比格犬血浆。具体的，所述马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液中，马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素的浓度分别介于200～200000ng/mL之间。具体的，所述质控样品中，所述马索亚内酯、五味子甲醇、五味子乙素的浓度分别介于10.0～7500ng/mL之间。具体的，所述校正标准品中，所述马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素的浓度分别介于10.0～10000ng/mL之间。具体的，所述方法中，液相色谱参数如下：色谱柱：InertstainAQ-C182.1*50mm，5μm，柱温为35℃；流动相：包括流动相A和流动相B，所述流动相A为：乙酸体积分数为0.1％的乙酸水溶液，所述流动相B为：乙醇和乙腈的体积比为70％：30％的乙醇乙腈；质谱条件：采用电喷雾离子原，正离子检测，选择多反应监测工作方式进行一/二级质谱分析，质谱检测工作参数如下：马索亚内酯的母离子/特征子离子的检测离子对为169.2/123.2，五味子醇甲的母离子/特征子离子的检测离子对为433.1/415.1，五味子乙素的母离子/特征子离子的检测离子对为401.1/300.2，柳胺酚的母离子/特征子离子的检测离子对为230.2/121.2。具体的，流动相梯度洗脱条件为：第0.01～0.1min，所述流动相B的体积分数为52％；第1.5min，所述流动相B的体积分数为88％；第1.9min，所述流动相B的体积分数为95％；第2.3～2.8min，所述流动相B的体积分数为100％；第2.81～3.1min，所述流动相B的体积分数为20％；第3.11～3.60min，所述流动相B的体积分数为100％；第3.61～4.80min，所述流动相B的体积分数为52％。本实施例还公开了一种内标工作液，其采用以下方法制备：S1：称取一定量的柳胺酚溶解于甲醇中，获得柳胺酚储备液；S2：采用甲醇对所述柳胺酚储备液进行稀释，获得内标工作液，所述内标工作液中，柳胺酚的浓度为50ng/mL。具体的，在S1和S2中，所述甲醇均为HPLC甲醇。具体的，所述柳胺酚储备液中，所述柳胺酚的浓度为1.00mg/mL，在S2中，将10μL所述柳胺酚储备液溶于200000μLHPLC甲醇中，获得柳胺酚浓度为50ng/mL的内标工作液。本专利技术至少具有如下有益效果：本方法具有检测灵敏度高、准确性良好、检测快捷、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点。为让本专利技术的上述和其他目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合所附图式，作详细说明如下。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例中溶剂样品中马索亚内酯的质谱图；图2是本专利技术实施例中溶剂样品中五味子醇甲的质谱图；图3是本专利技术实施例中溶剂样品中五味子乙素的质谱图；图4是本专利技术实施例中BK样品中马索亚内酯的质谱图；图5是本专利技术实施例中BK样品中五味子醇甲的质谱图；图6是本专利技术实施例中BK样品中五味子乙素的质谱图；图7是本专利技术实施例中QC0样品中马索亚内酯的质谱图；图8是本专利技术实施例中QC0样品中五味子甲醇的质谱图；图9是本专利技术实施例中QC0样品中五味子乙素的质谱图；图10是本专利技术实施例中残留效应中马索亚内酯的质谱图；图11是本专利技术实施例中残留效应中五味子甲醇的质谱图；图12是本专利技术实施例中残留效应中五味子乙素的质谱图；图13是本专利技术实施例中质控样品5中马索亚内酯的质谱图；图14是本专利技术实施例中质控样品5中五味子甲醇的质谱图；图15是本专利技术实施例中质控样品5中五味子乙素的质谱图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法，其特征在于，所述方法中采用柳胺酚作为内标，所述方法包括以下步骤：/n制备储备液：将马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素和柳胺酚分别溶于HPLC甲醇中，获得到马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液和柳胺酚储备液；/n制备工作液：采用HPLC甲醇和水作为溶剂，将所述马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液分别稀释，获得马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液；采用HPLC甲醇作为溶剂，将所述柳胺酚储备液稀释成柳胺酚工作液，所述柳胺酚工作液中柳胺酚的浓度为50ng/mL；/n制备校正标准品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得校正标准品；/n制备质控样品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得质控样品；/n检测分析样品：在96孔板上做出多个样品标示，向各个样品孔内加入对应的样品；在96孔板上相应的样品中加入柳胺酚工作液或HPLC甲醇；对各个样品进行封板、涡旋离心，并分别提取上清液；对各上清液进行稀释，分别取样分析。/n...

【技术特征摘要】
1.一种测定血浆中马索亚内酯、五味子醇甲和五味子乙素浓度的方法，其特征在于，所述方法中采用柳胺酚作为内标，所述方法包括以下步骤：
制备储备液：将马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素和柳胺酚分别溶于HPLC甲醇中，获得到马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液和柳胺酚储备液；
制备工作液：采用HPLC甲醇和水作为溶剂，将所述马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液分别稀释，获得马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液；采用HPLC甲醇作为溶剂，将所述柳胺酚储备液稀释成柳胺酚工作液，所述柳胺酚工作液中柳胺酚的浓度为50ng/mL；
制备校正标准品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得校正标准品；
制备质控样品：将所述马索亚内酯工作液、五味子醇甲工作液、五味子乙素工作液加入到同一空白血浆中，获得质控样品；
检测分析样品：在96孔板上做出多个样品标示，向各个样品孔内加入对应的样品；在96孔板上相应的样品中加入柳胺酚工作液或HPLC甲醇；对各个样品进行封板、涡旋离心，并分别提取上清液；对各上清液进行稀释，分别取样分析。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述空白血浆为比格犬血浆。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述马索亚内酯储备液、五味子醇甲储备液、五味子乙素储备液中，马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素的浓度分别介于200～200000ng/mL之间。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质控样品中，所述马索亚内酯、五味子甲醇、五味子乙素的浓度分别介于10.0～7500ng/mL之间。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述校正标准品中，所述马索亚内酯、五味子醇甲、五味子乙素的浓度分别介于10.0～10000ng/mL之间。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王樱桃，滕馨莹，
申请(专利权)人：安领生物医药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32