一种间充质干细胞神经分化诱导剂制造技术

本发明专利技术属于干细胞诱导分化技术领域，具体涉及一种间充质干细胞神经分化诱导剂。一种间充质干细胞神经分化诱导剂，由以下组分，分别按以下质量浓度配比而成：对乙酰氨基酚2‑8mg/L、胰岛素4‑6mg/L、GLP‑1 2‑6mg/L、曲美替尼200‑400μg/L、Forskolin 20‑100μg/L、KGF 2‑10μg/L、BMP‑4 2‑10μg/L。本发明专利技术的诱导剂，诱导效率高，诱导步骤少，诱导时间短，诱导获得神经细胞活性好，细胞移植后无排斥，无伦理问题，安全性高。

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞神经分化诱导剂
本专利技术涉及干细胞诱导分化
，具体是一种间充质干细胞神经分化诱导剂。
技术介绍
神经系统损伤和神经退行性病变如帕金森氏病、阿尔茨海默病、亨廷顿氏病等，一直是困扰人类健康的难题，而细胞移植是治愈此类疾病的希望。目前用于移植治疗中枢神经系统损伤的主要是胚胎干细胞和神经干细胞，但由于供体来源难，伦理学异议、免疫排斥反应以及移植细胞存活困难等问题，发展空间有限。间充质干细胞来源广泛、取材容易，便于自体移植，具有强大的增殖能力，在体外长期培养过程中可以始终保持其多向分化潜能，在特定条件诱导下可以分化为成骨、软骨、肌腱、肌细胞、脂肪细胞、神经细胞和肝细胞等，是一种理想的组织工程种子细胞。间充质干细胞已经成为干细胞研究的热点，经诱导后分化为神经细胞，可用于神经系统疾病和损伤的修复。干细胞的分化是部分基因选择性地被激活或差异性表达，从而控制细胞表型和蛋白质的特异性分布。间充质干细胞分化为特定细胞类型主要取决于基因的激活，而细胞外微环境中各种因子类型和浓度则是基因激活的重要因素。目前关于间充质干细胞体外诱导分化为神经细胞的研究报道非常多，主要方法有：(1)传统的化学诱导剂(抗氧化剂)法，例如：β-ME(β-巯基乙醇)、DMSO(二甲基亚砜)、BHA(丁基羟基茴香醚)联合诱导等；(2)生长因子诱导法，例如：神经生长因子NGF，表皮生长因子EGF，碱性成纤维细胞生长因子bFGF、维甲酸(RA)单独或者联合诱导等；(3)生长因子与化学诱导剂联合；(4)共培养或用接近生理状态的条件培养基；(5)基因转染；(6)中药诱导，例如丹参、黄芩苷等。由于化学诱导剂具有一定毒性，BHA、DMSO等可使细胞突变，用于细胞移植存在致瘤性的危险，且化学诱导剂法细胞死亡率较高；生长因子诱导方法虽然诱导后细胞存活率高，但诱导时间长、诱导效率低。而基因转染诱导，因为基因改变存在罹患癌症的潜在风险。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有的诱导剂及诱导方法存在的缺陷，提供一种诱导效率高，诱导步骤少，诱导时间短，诱导获得神经细胞活性好，细胞移植后无排斥，无伦理问题，安全性高的间充质干细胞神经分化诱导剂。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种间充质干细胞神经分化诱导剂，其特征在于：由以下组分，分别按以下质量浓度配比而成：对乙酰氨基酚2-8mg/L、胰岛素4-6mg/L、GLP-12-6mg/L、曲美替尼200-400μg/L、Forskolin20-100μg/L、KGF2-10μg/L、BMP-42-10μg/L。优选的，一种间充质干细胞神经分化诱导剂，由以下组分，分别按以下质量浓度配比而成：对乙酰氨基酚5mg/L、胰岛素5mg/L、GLP-14mg/L、曲美替尼300μg/L、Forskolin60μg/L、KGF6μg/L、BMP-46μg/L。本专利技术的一种间充质干细胞神经分化诱导剂，具有以下优势：1、无需基因转染，故无基因改变和癌症风险；2、诱导步骤少：当前文献报道的方法以两步法或者三步法为主，采用本专利技术的诱导剂仅需要一步；3、诱导时间短：当前文献一般诱导需要14天以上，采用本专利技术的诱导剂仅需要5天；4、采用本专利技术的诱导剂将间充质干细胞诱导分化成神经细胞，诱导分化效率高；5、本专利技术的诱导剂，各成分均安全无毒性；6、间充质干细胞诱导分化为神经细胞后，移植后无排斥，无伦理问题，安全性高，具有广阔的临床应用前景。附图说明图1是采用本专利技术的间充质干细胞神经分化诱导剂诱导后出现的神经细胞形态图(×400)：图2是采用本专利技术的间充质干细胞神经分化诱导剂诱导后NeuN阳性表达细胞免疫细胞化学染色结果图(×400)；图3是采用本专利技术的间充质干细胞神经分化诱导剂诱导后β-TubulinIII阳性表达细胞免疫细胞化学染色结果图(×400)；图4采用本专利技术的间充质干细胞神经分化诱导剂诱导后GFAP阳性表达细胞免疫细胞化学染色结果图(×400)。具体实施方式下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。实验所用器具仪器试剂皆可通过商业途径获得。实施例1本专利技术的诱导剂各成分均为市售产品：对乙酰氨基酚，上海一基实业有限公司，货号Y903952；胰岛素，品牌Sigma，货号10908；GLP-1，品牌Sigma，货号scp0153；曲美替尼，品牌美仑生物，货号MB5401；Forskolin，品牌Abcam，货号ab120058；KGF，品牌Sigma，货号K1751；BMP-4，品牌Sigma，货号SRP3016；人间充质干细胞无血清培养基，品牌LONZA，货号00190632。一种间充质干细胞神经分化诱导剂，由以下组分，分别按以下质量浓度配比而成：对乙酰氨基酚5mg/L、胰岛素5mg/L、GLP-14mg/L、曲美替尼300μg/L、Forskolin60μg/L、KGF6μg/L、BMP-46μg/L。将上述组分按质量浓度配比依次加入人间充质干细胞无血清培养基(或者DMEM+10％FBS或者市售的其他类型间充质干细胞培养基)，混匀，过滤除菌即可。实施例2一种间充质干细胞神经分化诱导剂，由以下组分，分别按以下质量浓度配比而成：对乙酰氨基酚2mg/L、胰岛素4mg/L、GLP-12mg/L、曲美替尼200μg/L、Forskolin20μg/L、KGF2μg/L、BMP-42μg/L。将上述组分按质量浓度配比依次加入人间充质干细胞无血清培养基(或者DMEM+10％FBS或者市售的其他类型间充质干细胞培养基)，混匀，过滤除菌即可。实施例3一种间充质干细胞神经分化诱导剂，由以下组分，分别按以下质量浓度配比而成：对乙酰氨基酚8mg/L、胰岛素6mg/L、GLP-16mg/L、曲美替尼400μg/L、Forskolin100μg/L、KGF10μg/L、BMP-410μg/L。将上述组分按质量浓度配比依次加入人间充质干细胞无血清培养基(或者DMEM+10％FBS或者市售的其他类型间充质干细胞培养基)，混匀，过滤除菌即可。实施例4以人脂肪来源间充质干细胞为例，采用实施例1制备的诱导剂，对间充质干细胞进行神经细胞诱导分化实验，步骤如下：一、诱导脂肪MSC分化为神经细胞：传3代的MSC，接种于事先放置有经多聚赖氨酸处理的消毒盖玻片的24孔板内，制备细胞爬片。待细胞接近80％融合，生长旺盛时再进行诱导分化，分组如表1：表1诱导脂肪MSC分化为神经细胞的实验分组二、诱导后神经细胞鉴定(一)、形态学观察：倒置显微镜下，动态观察脂肪MSC诱导前后形态学变化。(二)、免疫细胞化学染色法(SABC法)检测：(1)收集诱导后细胞爬片，0.01MPBS(PH＝7.2)冲洗，5min×3次，冷丙酮固定10min，PBS冲洗5min×3次；(2)3％H2O2溶液孵育30min，以消除内源性过氧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种间充质干细胞神经分化诱导剂，其特征在于，由以下组分，分别按以下质量浓度配比而成：对乙酰氨基酚2-8mg/L、胰岛素4-6mg/L、GLP-1 2-6mg/L、曲美替尼200-400μg/L、Forskolin 20-100μg/L、KGF 2-10μg/L、BMP-4 2-10μg/L。/n

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞神经分化诱导剂，其特征在于，由以下组分，分别按以下质量浓度配比而成：对乙酰氨基酚2-8mg/L、胰岛素4-6mg/L、GLP-12-6mg/L、曲美替尼200-400μg/L、Forskolin20-100μg/L、KGF2-10μg/L、BMP-42-10μg/L。...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋修会，杜占慧，
申请(专利权)人：宋修会，
类型：发明
国别省市：山东;37