一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法技术

本发明专利技术涉及检测技术领域，特别涉及一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法。本方法用甲醇超声提取工业大麻提取物中的大麻素物质，高效液相色谱仪（HPLC）进行检测。采用保留时间定性，外标法定量得到工业大麻提取物中一种或几种大麻素的含量。本方法操作简单、稳定性好，使得工业大麻提取物中的多种大麻素类物质得到快速准确的定量。

A method for the determination of one or several cannabinoids in the extract of industrial hemp by HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法
本专利技术涉及检测
，特别涉及一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法。
技术介绍
工业大麻(Hemp)的是指THC（四氢大麻酚）含量低于0.3%的大麻，时下，工业大麻正成为全球热点。工业大麻中的主要活性成分是大麻素类化合物，包括大麻酚（CBN）、四氢大麻酚（THC）、大麻二酚（CBD）、次大麻二酚（CBDV）等，其主要可用于抗癫痫、抗氧化、抗肿瘤等。工业大麻中目前医用价值最高的成分为CBD，CBD不仅没有致幻效果，反而可以减轻或抵消大麻中另一种化学成分THC致幻性和成瘾性，在减轻炎症、疼痛、焦虑、精神疾病、癫痫等方面具有很大的应用价值。目前，在欧美国家CBD产品十分受欢迎，是流行的保健营养品。最受欢迎的产品之一是CBD油，也称为CBD酊。CBD油中含有高浓度的CBD，一般是从工业大麻的花叶和茎中提取CBD，然后用载体油（如椰子油或大麻籽油）稀释而制成，是一种浓稠的植物提取物。而工业大麻全谱（广谱）油是未经进一步提纯和分离的工业大麻提取物，除了含有CBD之外，还含有其他大麻素（如CBN、CBG、CBDV等，有时含有少量的THC）、萜烯和芳香族化合物。工业大麻全谱（广谱）油通常较为粘稠，颜色较深，具有大麻的植物味道。CBD油或工业大麻全谱（广谱）油中各种大麻素尤其是CBD的含量直接影响其产品质量。工业大麻提取过程中监测各种大麻素的含量对于产品的质量控制十分重要，而目前未见CBD油或工业大麻全谱（广谱）油中大麻素含量的检测方法相关文献报道，因此建立一套高效、准确且适用于工业大麻提取过程的中间产物、最终产品中多种大麻素含量的方法显得十分必要。
技术实现思路
本专利技术使用甲醇超声提取工业大麻提取物中的一种或几种大麻素含量，用高效液相色谱仪(HPLC)检测，保留时间定性、外标法进行定量，能够准确、快速的检测工业大麻提取物中的一种或几种大麻素的含量。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供了一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法。包括如下步骤：①样品的前处理：准确称取工业大麻提取物，加入有机溶剂，超声提取，静置，过滤膜得到样品处理液。②标准工作溶液的配置：分别制备不同浓度梯度的各个大麻素标准对照品溶液。③用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测。高效液相色谱仪（HPLC）条件如下：流动相为乙腈和水，乙腈与水的比例为65%：35%，等度洗脱，流速为1mL/min；进样量为10uL；柱温为30℃；检测器检测波长为220nm。进一步地，步骤①中所述工业大麻提取物包括工业大麻粗提浸膏、CBD油、工业大麻全谱（广谱）油。大麻提取物的制备方法如下：①提取：工业大麻的花叶经干燥、粉碎后，利用超临界二氧化碳萃取，得到粗提浸膏。萃取温度为35～60℃、萃取釜压力15～30MPa、萃取时间为0.5～3小时；解析釜温度为35～50℃、解析压力为1～15MPa。②分离纯化：层析柱中装填硅胶，采用干法或者湿法上样（即提取浸膏），流动相洗脱，分离出大麻素类物质，分段收集，浓缩后用载体油稀释得成品。硅胶目数60～400目，流动相可以采用正己烷-乙酸乙酯、石油醚-乙酸乙酯、正己烷-二氯甲烷、石油醚-二氯甲烷，或其中几种溶剂的混合溶剂；层析方式可以采用常压或加压；洗脱方式可以采用等度洗脱或梯度洗脱；洗脱液分段浓缩，浓缩温度35～60℃。进一步的，步骤①中所述有机溶剂为色谱纯甲醇，所述大麻提取物质量与所述甲醇体积的比例为1：50；所述超声时间为30min，超声功率为250W，工作频率为40kHz；所述静置时间为30min；所述滤膜为0.22μm的有机系针头滤膜。进一步的，步骤②所述大麻素类物质包括次大麻二酚（CBDV）、大麻萜酚（CBG）、大麻二酚（CBD）、大麻酚（CBN）、四氢大麻酚（THC）、大麻色烯（CBC）中的一种或几种。进一步的，步骤②中所述标准对照品工作溶液配置方法为：分别将购自Sigma公司的几种大麻素标准对照品用色谱纯甲醇稀释至浓度范围为1μg/mL～100μg/mL的系列标准工作溶液。进一步地，所述高效液相色谱仪品牌型号为安捷伦1260；流动相的乙腈为色谱纯，水为去离子水；色谱柱为AgilentZORBAXEclipsePlusC18；所述检测器为二极管阵列检测器(简称DAD检测器)。本专利技术的优点：①本专利技术建立了一种利用HPLC检测工业大麻花叶提取物中一种或几种大麻素含量的方法，能够对工业大麻提取物中CBDV、CBG、CBD、CBN、THC、CBC中的一种或几种进行定性和定量分析，为工业大麻提取物中大麻素成分和含量的准确判定和快速检测提供科学依据。②本专利技术用HPLC检测大麻花叶提取物中一种或几种大麻素物质，使得CBDV、CBG、CBD、CBN、THC、CBC中的一种或几种的定性定量可以在同一样品处理下得到快速准确的检测。实验操作简单，检测结果准确稳定，适合工业化检测。附图说明图1CBDV标准对照品HPLC图谱。图2CBG标准对照品HPLC图谱。图3CBD标准对照品HPLC图谱。图4CBN标准对照品HPLC图谱。图5THC标准对照品HPLC图谱。图6CBC标准对照品HPLC图谱。图7实施例样品处理液HPLC图谱。具体实施方式以下实施例仅是对本专利技术予以解释说明，并未对本专利技术的保护范围进行任何限制。对于本领域技术人员而言，凡未脱离本专利技术技术精神所作的同等实施方式或变更均在本专利技术的保护范围之内。实施例工业大麻全谱（广谱）油的检测工业大麻全谱（广谱）油提取步骤：①工业大麻的花叶经干燥、粉碎后，利用超临界二氧化碳萃取，得到粗提浸膏；萃取温度为50℃、萃取釜压力20MPa、萃取时间为2小时，解析釜温度为40℃、解析压力为10MPa。②分离纯化：将粗提浸膏加入3倍量的正己烷溶解，按物料比2:1拌入200目硅胶。烘干后，干法上样，200目硅胶填装柱，正己烷和乙酸乙酯（8:1）洗脱，收集含有大麻素的流动相。真空减压浓缩除去溶剂，得到工业大麻全谱（广谱）油。样品的前处理：准确称取工业大麻全谱（广谱）油0.2g（精确至0.0001g），加入10mL甲醇，超声提取30min后静置30min，过0.22μm的有机系针头滤膜得到样品处理液。标准工作溶液的配置：分别将购自sigma公司的CBDV、CBG、CBD、CBN、THC、CBC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n（1）样品的前处理：准确称取工业大麻花叶提取物，加入有机溶剂，超声提取，静置，过滤膜得到样品处理液；/n（2）标准工作溶液的配置：分别制备不同浓度梯度的各个大麻素标准对照品溶液；/n（3）用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测；/n高效液相色谱仪（HPLC）条件如下：流动相为乙腈（色谱纯）和水（去离子水），乙腈与水的比例为65%：35%，等度洗脱，流速为1mL/min；进样量为10uL；柱温为30℃；检测器检测波长为220 nm。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）样品的前处理：准确称取工业大麻花叶提取物，加入有机溶剂，超声提取，静置，过滤膜得到样品处理液；
（2）标准工作溶液的配置：分别制备不同浓度梯度的各个大麻素标准对照品溶液；
（3）用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品处理液进行测定，确认在目标物出峰时间处是否出峰，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测；
高效液相色谱仪（HPLC）条件如下：流动相为乙腈（色谱纯）和水（去离子水），乙腈与水的比例为65%：35%，等度洗脱，流速为1mL/min；进样量为10uL；柱温为30℃；检测器检测波长为220nm。


2.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述工业大麻提取物包括工业大麻粗提浸膏、CBD油、工业大麻全谱（广谱）油。


3.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻提取物中一种或几种大麻素含量的方法，其特征在于，所述大麻提取物的制备方法如下：
（1）提取：工业大麻的花叶经干燥、粉碎后，利用超临界二氧化碳萃取，得到粗提浸膏；萃取釜压力15～30MPa，萃取温度为35～60℃、萃取时间为0.5～3小时；解析釜温度为35～50℃、解析压力为1～15MPa；
（2）分离纯化：层析柱中装填硅胶，采用干法或者湿法上样（即提取浸膏），流动相洗脱，分离出大麻素类物质，分段收集，浓缩后用载体油稀释得成品；硅胶目数60～400目，流动相可以采用正己烷-乙酸乙酯、石油醚-乙酸乙酯、正己烷-二氯甲烷、石油醚...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘胜贵，王钲霖，马海悦，付彬彬，李智高，孔令羽，
申请(专利权)人：云南绿新生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53