定量检测SMIM3基因表达量的引物探针组、试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种定量检测SMIM3基因表达量的引物探针组、试剂盒和方法，其中引物探针组，包括组分A和组分B，组分A包括上游引物SMIM3‑FP、下游引物SMIM3‑RP和探针SMIM3‑probe，组分B包括上游引物ABL1‑FP，下游引物ABL1‑RP和探针ABL1‑probe。本发明专利技术优点在于实现了细胞中SMIM3相对表达量的定量检测，并且本发明专利技术SMIM3的灵敏度和ABL1的灵敏度均高达100拷贝，灵敏度高，结果精准、可靠性高，为血液肿瘤细胞（尤其是急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病）提供了一种新的辅助诊断方法或辅助鉴定方法，具有较大的应用前景。

Primer probe set, kit and method for quantitative detection of smim3 gene expression

【技术实现步骤摘要】
定量检测SMIM3基因表达量的引物探针组、试剂盒和方法
本专利技术涉及生化检测领域，尤其是涉及一种定量检测SMIM3基因表达量的引物探针组，还涉及一种包含该引物探针组的试剂盒，还涉及一种定量检测SMIM3基因表达量的方法。
技术介绍
SmallIntegralMembraneProtein3即SMIM3，又名C5orf62或NID67，SMIM3基因编码的蛋白是一种单链跨膜蛋白。SMIM3的mRNA在心脏、卵巢和肾上腺中含量最高，而在大多数大脑区域、睾丸、甲状腺、胸腺、垂体、肾脏和肠道中仅低水平表达，骨骼肌和小脑中几乎没有SMIM3；但在PC12嗜铬细胞瘤细胞中，SMIM3可被NGF与EGF优先诱导产生，SMIM3还可被毛喉素、A23187和ATP强烈诱导。人类SMIM3基因定位于5q33.1，SMIM3的cDNA包含一个180bp的开放阅读框（ORF），编码60个氨基酸的蛋白质，其中心的29个氨基酸疏水性较强，很可能包含跨膜结构域。SMIM3可能参与形成或调节离子通道，但是目前关于SMIM3的研究极少，其功能尚不明确。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种定量检测SMIM3基因表达量的引物探针组，还涉及一种包含该引物探针组的试剂盒，还涉及一种定量检测SMIM3基因表达量的方法。为实现上述目的，本专利技术采取下述技术方案：本专利技术所述的定量检测SMIM3基因表达量的引物探针组，包括组分A和组分B，所述组分A包括：SEQIDNO.1所示核苷酸序列的上游引物SMIM3-FP，SEQIDNO.2所示核苷酸序列的下游引物SMIM3-RP，和含有SEQIDNO.3所示核苷酸序列的探针SMIM3-probe，所述探针SMIM3-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ；所述组分B包括：SEQIDNO.4所示核苷酸序列的上游引物ABL1-FP，SEQIDNO.5所示核苷酸序列的下游引物ABL1-RP，以及含有SEQIDNO.6所示核苷酸序列的探针ABL1-probe，所述探针ABL1-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团TAMRA。本专利技术还提供了一种定量检测SMIM3基因表达量的试剂盒，包括本专利技术所述的引物探针组，还包括含有SEQIDNO.7所示SMIM3基因片段的阳性对照质粒以及含有SEQIDNO.8所示ABL1基因片段的内参对照质粒。更进一步地，本专利技术所述试剂盒中组分A中上游引物SMIM3-FP:下游引物SMIM3-RP:探针SMIM3-probe的摩尔比为3:3:2，所述组分B中上游引物ABL1-FP:下游引物ABL1-RP:探针ABL1-probe的摩尔比为3:3:2。更进一步地，所述阳性对照质粒为在GV219质粒的XhoI/KpnI酶切位点插入SEQIDNO.7所示SMIM3基因片段的阳性质粒，所述内参对照质粒为在GV219质粒的XhoI/KpnI酶切位点插入SEQIDNO.8所示ABL1基因片段的内参质粒。本专利技术还提供了一种定量检测SMIM3基因表达量的方法，包括以下步骤：第一步，提取待测样本中的RNA，并反转录成cDNA；第二步，绘制阳性对照质粒的荧光标准曲线和内参对照质粒的荧光标准曲线；第三步，以第一步得到的cDNA为模板，分别加入组分A和组分B进行扩增反应，分别进行RQ-PCR检测，得到样本中SMIM3基因片段的循环数和ABL1基因片段的循环数，利用第二步中阳性对照质粒的荧光标准曲线和内参对照质粒的荧光标准曲线分别计算得到样本中SMIM3基因片段的拷贝数与ABL1基因的拷贝数，SMIM3基因片段的拷贝数与ABL1基因拷贝数的比值即为样本中SMIM3基因表达量。本专利技术优点在于提供了一种定量检测SMIM3基因相对表达量的方法，实现了细胞中SMIM3相对表达量的定量检测，SMIM3基因的相对表达量等于细胞中SMIM3基因的拷贝数量与细胞中ABL1拷贝数量的比值，并且本专利技术SMIM3的灵敏度和ABL1的灵敏度均高达100拷贝，灵敏度高，结果精准、可靠性高，为血液肿瘤细胞（尤其是急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病）提供了一种新的辅助诊断方法或辅助鉴定方法，具有很大的应用前景。附图说明图1是本专利技术所述内参对照质量的荧光标准曲线图。图2是本专利技术所述阳性对照质粒的荧光标准曲线图。图3是本专利技术实施例4中各细胞体系中SMIM3基因表达量的柱状图。图4是本专利技术实施例5中患者和健康样本中SMIM3基因表达量的统计图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作更加详细的说明。实施例1本专利技术所述的检测SMIM3基因表达量的引物探针组本专利技术所述的引物探针组，包括组分A和组分B，所述组分A包括：上游引物SMIM3-FP：5’-TCATCATGACCTCGTTGTTGCT-3（即SEQIDNO.1所示核苷酸序列）、下游引物SMIM3-RP：5’-CTCAAACAGCCCCACTAAGGAT-3’（即SEQIDNO.2所示核苷酸序列）和探针SMIM3-probe：FAM-ACTGCAGTAATCATCTATCGCATGCGGAC-BHQ（即SEQIDNO.3所示核苷酸序列），其中探针SMIM3-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ；所述组分B包括：上游引物ABL1-FP：5’-TGGAGATAACACTCTAAGCATAACTAAAGGT-3’（即SEQIDNO.4所示核苷酸序列），下游引物ABL1-RP：5’-GATGTAGTTGCTTGGGACCCA-3’（即SEQIDNO.5所示核苷酸序列），和探针ABL1-probe：FAM-CCATTTTTGGTTTGGGCTTCACACCATT–TAMRA（即SEQIDNO.6所示核苷酸序列），探针ABL1-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团TAMRA。实施例2本专利技术所述的检测SMIM3基因表达量的试剂盒本专利技术所述的试剂盒包括实施例中的组分A和组分B，还包括阳性对照质粒和内参对照质粒，组分A中上游引物SMIM3-FP:下游引物SMIM3-RP:探针SMIM3-probe的摩尔比为3:3:2；组分B中上游引物ABL1-FP:下游引物ABL1-RP:探针ABL1-probe的摩尔比为3:3:2；其中阳性对照质粒为在GV219质粒的XhoI/KpnI酶切位点插入SEQIDNO.7所示SMIM3基因片段的阳性质粒；内参对照质粒为在GV219质粒的XhoI/KpnI酶切位点插入SEQIDNO.8所示ABL1基因片段的内参质粒。实施例3本专利技术所述阳性对照质粒和内参对照质粒的灵敏度检测及荧光标准曲线的绘制，具体包括以下步骤：第一步，用灭菌双蒸注射用水进行10倍梯度稀释实施例2中的阳性对照质粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量检测SMIM3基因表达量的引物探针组，其特征在于：包括组分A和组分B，所述组分A包括：/nSEQ ID NO.1所示核苷酸序列的上游引物SMIM3-FP/nSEQ ID NO.2所示核苷酸序列的下游引物SMIM3-RP，/n和含有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的探针SMIM3-probe，所述探针SMIM3-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ；/n所述组分B包括：/nSEQ ID NO.4所示核苷酸序列的上游引物ABL1-FP，/nSEQ ID NO.5所示核苷酸序列的下游引物ABL1-RP，/n以及含有SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的探针ABL1-probe，所述探针ABL1-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团TAMRA。/n

【技术特征摘要】
1.一种定量检测SMIM3基因表达量的引物探针组，其特征在于：包括组分A和组分B，所述组分A包括：
SEQIDNO.1所示核苷酸序列的上游引物SMIM3-FP
SEQIDNO.2所示核苷酸序列的下游引物SMIM3-RP，
和含有SEQIDNO.3所示核苷酸序列的探针SMIM3-probe，所述探针SMIM3-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ；
所述组分B包括：
SEQIDNO.4所示核苷酸序列的上游引物ABL1-FP，
SEQIDNO.5所示核苷酸序列的下游引物ABL1-RP，
以及含有SEQIDNO.6所示核苷酸序列的探针ABL1-probe，所述探针ABL1-probe的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团TAMRA。


2.一种定量检测SMIM3基因表达量的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的引物探针组，含有SEQIDNO.7所示SMIM3基因片段的阳性对照质粒以及含有SEQIDNO.8所示ABL1基因片段的内参对照质粒。


3.根据权利要求2所述的定量检测SMIM3基因表达量的试剂盒，其特征在于：所述组分A中上游引物SMIM3-FP:下游引物SMIM3...

【专利技术属性】
技术研发人员：王树娟，王冲，刘延方，姜中兴，张雨，李梦亚，范熠，李涛，李亚飞，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：河南;41