本发明专利技术提供了使用NMR鉴定的来自肺炎链球菌血清型的荚膜多糖。本发明专利技术还提供了多糖‑蛋白缀合物，其中来自一种或多种这些血清型的荚膜多糖缀合至载体蛋白，例如CRM197。来自一种或多种这些血清型的多糖‑蛋白缀合物可被包含在具有来自多种另外的肺炎链球菌血清型的多糖的多价肺炎球菌缀合物疫苗中。
Pneumococcal polysaccharide and its application in immunogenic polysaccharide carrier protein conjugate
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肺炎球菌多糖及其在免疫原性多糖-载体蛋白缀合物中的用途
本专利技术提供了来自肺炎链球菌血清型16F的纯化的荚膜多糖，以及具有来自该血清型的多糖的多糖-蛋白缀合物。来自该血清型的多糖-蛋白缀合物可以包含在多价肺炎球菌缀合物疫苗中。
技术介绍
肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)是一种荚膜细菌，并且是全世界严重疾病的重要原因。1997年，美国疾病控制与预防中心(CDC)估计，美国每年有3,000例肺炎球菌脑膜炎、50,000例肺炎球菌菌血症、7,000,000例肺炎球菌中耳炎和500,000例肺炎球菌性肺炎。参见CentersforDiseaseControlandPrevention,MMWRMorbMortalWklyRep1997,46(RR-8):1-13。此外，这些疾病的并发症可能很严重，一些研究报道，肺炎球菌脑膜炎的死亡率高达8％，神经系统后遗症高达25％。参见Arditi等,1998,Pediatrics102:1087-97。事实证明，已获许可多年的多价肺炎球菌多糖疫苗在预防成年人，尤其是老年人和高危人群的肺炎球菌疾病方面具有不可估量的价值。然而，婴幼儿对未缀合的肺炎球菌多糖反应较差。细菌多糖是不依赖T细胞的免疫原，在婴儿中引起微弱反应或无反应。细菌多糖免疫原与载体蛋白的化学缀合可将婴儿的免疫应答转化为一种依赖T细胞的免疫应答。白喉类毒素(DTx，DT的化学去毒版本)和CRM197被描述为细菌多糖免疫原的载体蛋白，因为它们的氨基酸序列中存在刺激T细胞的表位。肺炎球菌缀合物疫苗于2000年2月首次在美国获得许可，其含有当时在婴幼儿中引起侵袭性肺炎球菌疾病的7种最常见的血清型(4，6B，9V，14，18C，19F和23F)。在美国普遍使用后，由于中存在的血清型，儿童的侵袭性肺炎球菌疾病已显著减少。参见CentersforDiseaseControlandPrevention,MMWRMorbMortalWklyRep2005,54(36):893-7。但是，在世界某些地区，的血清型覆盖受限，并且在美国存在某些新兴血清型的证据(例如19A等)。参见O'Brien等,2004,AmJEpidemiol159:634-44；Whitney等,2003,NEnglJMed348:1737-46；Kyaw等,2006,NEnglJMed354:1455-63；Hicks等,2007,JInfectDis196:1346-54；Traore等,2009,ClinInfectDis48:S181-S189。是一种13价肺炎球菌多糖-蛋白缀合物疫苗，包括血清型1，3，4，5，6A，6B，7F，9V，14，18C，19A，19F和23F。参见例如，美国专利申请公开号US2006/0228380A1、Prymula等,2006,Lancet367:740-48和Kieninger等,SafetyandImmunologicNon-inferiorityof13-valentPneumococcalConjugateVaccineComparedto7-valentPneumococcalConjugateVaccineGivenasa4-DoseSeriesinHealthyInfantsandToddlers,presentedatthe48thAnnualICAAC/ISDA46thAnnualMeeting,WashingtonDC,October25-28,2008。还参见Dagan等,1998,InfectImmun.66:2093-2098和Fattom,1999,Vaccine17:126。根据荚膜多糖的结构，肺炎链球菌已分类为90多种血清型。Geno,2015,ClinicalMicrobiologyReviews28:871–899中提供了已知的肺炎球菌荚膜多糖结构的列表。当前的多价肺炎球菌缀合物疫苗已经有效地减少了与疫苗中存在的那些血清型有关的肺炎球菌疾病的发病率。然而，表达疫苗中不存在的血清型的肺炎球菌的流行率正在增加。因此，需要鉴定并表征新兴的肺炎球菌血清型以包含在未来的疫苗中。
技术实现思路
本专利技术提供了来自肺炎链球菌血清型16F的纯化的荚膜多糖，和具有该血清型的多糖蛋白缀合物。本专利技术部分基于来自该血清型的荚膜多糖的结构鉴定。因此，在一个实施方式中，本专利技术提供了具有以下重复单元的多糖：其中x表示0.0至1.0的摩尔比。来自肺炎链球菌血清型16F的多糖可以表示为其中n表示重复单元的数量。在某些实施方式中，多糖具有10至5,000个重复单元。在某些方面，多糖具有50至4,500，150至4,500或150至2,000个重复单元。在某些实施方式中，多糖的分子量为50kDa至4,000kDa。在某些方面，多糖的分子量为100kDa至3,500kDa，或100kDa至1,500kDa。在某些实施方式中，肺炎链球菌血清型16F多糖中O-乙酰基与血清型16F重复单元的摩尔比为0.0至1.0，例如至少任何0.01、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8或0.9至1.0。本专利技术还提供了由以上任何实施方式产生的活化多糖，其中所述多糖用化学试剂活化以产生用于缀合至接头或载体蛋白的反应性基团。在某些实施方式中，活化发生在一个或多个甘油-1-PO4糖上。在某些实施方式中，多糖用高碘酸盐活化。在该实施方式的某些方面，活化发生在甘油-1-PO4糖两者之一或两者的碳2位上。本专利技术还提供了多糖-蛋白缀合物，其中如上所述的多糖或活化多糖缀合至载体蛋白。在某些方面，载体蛋白选自CRM197，白喉毒素片段B(DTFB)，DTFBC8，白喉类毒素(DT)，破伤风类毒素(TT)，TT片段C，百日咳类毒素，霍乱类毒素，大肠杆菌LT，大肠杆菌ST和铜绿假单胞菌的外毒素A。在一个特定方面，载体蛋白是CRM197。在某些方面，在水性条件下或在非质子溶剂例如二甲基亚砜(DMSO)中，使用还原胺化化学方法制备多糖-蛋白缀合物。在一个特定的方面，在DMSO中使用还原胺化化学方法来制备多糖-蛋白缀合物。在一个实施方式中，本专利技术提供了一种多价免疫原性组合物，其包含来自肺炎链球菌血清型16F的未缀合的多糖或多糖-蛋白缀合物和来自一种或多种以下肺炎链球菌血清型的未缀合的多糖或多糖-蛋白缀合物：1，2，3，4，5，6A，6B，6C，6D，7B，7C，7F，8，9N，9V，10A，11A，12F，14，15A，15B，15C，17F，18B，18C，19A，19F，20，21，22A，22F，23A，23B，23F，24F，24B，27，28A，31，33F，34，35A，35B，35F和38。在一个子实施方式中，多价免疫原性组合物包含未缀合的多糖或多糖-载体蛋白缀合物，但不包含两者。在一个子实施方式中，多价免疫原性组合物包含未缀合的多糖或多糖-载体蛋白缀合物的混合物。在某些实施方式中，本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种纯化的多糖，其包含具有以下结构的重复单元：/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170907 US 62/555,4511.一种纯化的多糖，其包含具有以下结构的重复单元：
其中x表示0.0至1.0的摩尔比。
2.根据权利要求1所述的多糖，其中所述多糖具有10至5000个重复单元。
3.根据权利要求1所述的多糖，其中所述多糖具有150至2000个重复单元。
4.根据权利要求1所述的多糖，其中所述多糖具有如通过MALS测定的50kDa至4000kDa的平均分子量。
5.根据权利要求1所述的多糖，其中所述多糖具有如通过MALS测定的100kDa至3500kDa的分子量。
6.根据权利要求1所述的多糖，其中x为0.5至1.0。
7.根据权利要求6所述的多糖，其中x为0.7至1.0。
8.一种由具有以下结构的重复单元的多糖制得的活化多糖：
其中x表示0.0至1.0的摩尔比，并且所述多糖用化学试剂活化以产生用于缀合至接头或载体蛋白的反应性基团。
9.根据权利要求8所述的活化多糖，其中所述活化发生在一个或多个甘油-1-PO4糖上。
10.根据权利要求8所述的活化多糖，其中所述多糖用高碘酸盐活化。
11.根据权利要求10所述的活化多糖，其中所述活化发生在一个或多个所述甘油-1-PO4糖的碳2位上。
12.根据权利要求11所述的活化多糖，其中活化程度在各个所述甘油-1-PO4糖上近似均等地发生。
13.一种多糖-蛋白缀合物，其包含与载体蛋白缀合的具有以下结构的重复单元的多糖：
其中x表示0至1.0的摩尔比。
14.根据权利要求13所述的多糖-蛋白缀合物，其中所述载体蛋白是CRM197、白喉毒素片段B(DTFB)、DTFBC8、白喉类毒素(DT)、破伤风类毒素(TT)、TT片段C、百日咳类毒素、霍乱类毒素、大肠杆菌LT、大肠杆菌ST或铜绿假单胞菌的外毒素A。
15.根据权利要求14所述的多糖-蛋白缀合物，其中所述载体蛋白是CRM197。
16.根据权利要求15所述的多糖-蛋白缀合物，其中所述多糖-蛋白缀合物的分子量为1,000kDa至10,000kDa。
17.根据权利要求15所述的多糖-蛋白缀合物，其中所述多糖-蛋白缀合物的多...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·J·波拉姆博，C·阿拜古纳瓦达纳，L·K·穆塞，M·J·科辛斯基，Y·A·崔，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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