帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法。检测方法包括以下步骤：分别溶解R1‑M对照品、R1‑C对照品和R1‑N对照品，得3种杂质对照品溶液；溶解待测帕瑞昔布钠，得待测样品溶液；对3种杂质对照品溶液、待测样品溶液进行液相色谱联用质谱测定；色谱条件包括：流动相A为挥发性酸或缓冲溶液，流动相B为乙腈；质谱条件包括：选用电喷雾离子源，正离子扫描模式，去簇电压25～200V，碰撞能量10～100eV，毛细管电压2000～6000V，毛细管温度250～400℃，干燥气温度250～600℃。上述方法检出限达到0.3ppm，定量限达到1ppm，能够很好进行帕瑞昔布钠原料药的质量控制。

Detection method of genotoxic impurities in parecoxib sodium

【技术实现步骤摘要】
帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法
本专利技术涉及药物分析检测领域，特别是涉及帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法。
技术介绍
帕瑞昔布钠属于非甾体抗炎药，是全球第一个可同时静脉、肌肉注射用的选择性环氧合酶-2抑制剂，与传统非选择性环氧合酶抑制剂相比，具有镇痛效果好、起效迅速、作用持久、能有效抑制痛觉超敏、胃肠安全性高、不影响血小板功能、不会额外增加心血管风险等特点。在合成制备帕瑞昔布钠原料药时，发现其会生成3个芳基磺酸酯杂质，分别为4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸甲酯(R1-M)、4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸乙酯(R1-C)、4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸异丙酯(R1-N)。磺酸酯为业内公认的警示结构，根据《人用药品注册技术要求国际协调会议(ICH)》的文件M7，即《评估和控制药物中DNA反应性(致突变)杂质以限制潜在的致癌风险》中的杂质分类规则，和《遗传毒性杂质控制指导原则-中国药典2020版征求意见稿》的规定，上述3个芳基磺酸酯杂质系3类遗传毒性杂质，须参照毒理学关注阈值(TTC)控制其允许每日摄入量(ADI)在1.5μg/天。因帕瑞昔布钠的最大日剂量为80mg/天，故这3个芳基磺酸酯杂质的限度计算如下：限度(％)＝1.5μg/80mg＝0.0018％＝18ppm。因此，在帕瑞昔布钠原料药的日常出厂放行工作中，上述3个控制限度极低的遗传毒性杂质的定性检测和定量，成为行业内分析测试人员急需解决的问题。专利CN105372376A采用反相液相色谱法检测帕瑞昔布钠遗传毒性杂质，能实现帕瑞昔布钠与3个遗传毒性杂质在较短时间内分离，主成分与遗传毒性杂质、遗传毒性杂质之间的分离度均大于1.5。然而，3个杂质的检出限均较高，达到1000ppm，无法满足限度为18ppm的4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸乙酯、4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸甲酯和4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸异丙酯这3个遗传毒性杂质的检测。
技术实现思路
基于此，本专利技术提供一种液相色谱联用质谱法检测帕瑞昔布钠中芳基磺酸酯遗传毒性杂质的方法，3个芳基磺酸酯的检出限均低至0.3ppm，定量限均低至1ppm，满足限度为18ppm及以下的遗传毒性杂质的检测，并能在短时间内分离，主成分与遗传毒性杂质、遗传毒性杂质之间的分离度均大于1.5，具有较高的灵敏度和专属性，能够很好进行帕瑞昔布钠原料药的质量控制。具体技术方案为：一种帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法，包括以下步骤。分别溶解4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸乙酯对照品、4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸甲酯对照品和4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸异丙酯对照品，得3种杂质对照品溶液；溶解待测帕瑞昔布钠，得待测样品溶液；对所述3种杂质对照品溶液、待测样品溶液进行液相色谱联用质谱测定；色谱条件包括：流动相A为挥发性酸或缓冲溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱；质谱条件包括：选用电喷雾离子源，正离子扫描模式，去簇电压为25～200V，碰撞能量为10～100eV，毛细管电压为2000～6000V，毛细管温度为250～400℃，干燥气温度为250～600℃。在其中一个实施例中，所述质谱条件包括：去簇电压为50～100V，碰撞能量为20～50eV，毛细管电压为4000～6000V，毛细管温度为300～400℃，干燥气温度为500～600℃。在其中一个实施例中，所述质谱条件还包括：扫描方式为多反应监测模式，扫描离子质荷比分别为330.2/132.0、344.1/132.0和358.2/132.0。在其中一个实施例中，所述质谱条件还包括：雾化气流速为10～60L/min，气帘气流速为10～50L/min。在其中一个实施例中，所述流动相A选自甲酸水溶液、乙酸水溶液、甲酸铵水溶液或乙酸铵水溶液。在其中一个实施例中，所述流动相A选自体积分数为0.01～2.0％的甲酸水溶液、体积分数为0.01～2.0％的乙酸水溶液、浓度为1mmol/L～20mmol/L的甲酸铵水溶液或浓度为1mmol/L～20mmol/L的乙酸铵水溶液。在其中一个实施例中，所述流动相A为体积分数为0.1％的乙酸水溶液。在其中一个实施例中，所述色谱条件还包括：色谱柱选自C18，C8或苯基柱。在其中一个实施例中，所述色谱条件还包括柱温：20～50℃，流动相流速为0.1ml/min～1.0ml/min，进样量为1μL～20μL。在其中一个实施例中，所述色谱条件还包括柱温：30℃，流动相流速为0.4ml/min，进样量为2μL或5μL。在其中一个实施例中，所述待测样品的浓度为1.0～10.0mg/ml。在其中一个实施例中，配制所述待测样品溶液的溶剂选自甲醇和乙腈的混合溶剂、乙腈和水的混合溶剂、甲醇或乙腈。在其中一个实施例中，所述甲醇和乙腈的混合溶剂中，甲醇和乙腈的体积比为30:70。在其中一个实施例中，配制所述3种杂质对照品溶液的溶剂选自甲醇和乙腈的混合溶剂、乙腈和水的混合溶剂、甲醇或乙腈。在其中一个实施例中，所述甲醇和乙腈的混合溶剂中，甲醇和乙腈的体积比为30:70。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术采用液相色谱联用质谱技术，检测帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质，通过对色谱条件和质谱条件的筛选，使基因遗传毒性杂质R1-M、R1-C和R1-N的检出限达到0.3ppm，定量限达到1ppm，能够很好进行帕瑞昔布钠原料药的质量控制。同时，上述3个基因毒性杂质能够在较短时间内的检测，基因毒性杂质之间的分离度高，检测精密度高，操作简便，具有很高的专属性和耐用性。附图说明图1为分离度溶液中帕瑞昔布钠质谱图；图2为分离度溶液中杂质R1-M质谱图[帕瑞昔布钠-杂质R1-C、R1-M、R1-N-专属性-分离度溶液(R1-C)MS图]；图3为分离度溶液中杂质R1-C质谱图；图4为分离度溶液中杂质R1-N质谱图；图5为杂质R1-C、R1-M、R1-N检出限质谱图；图6为杂质R1-C、R1-M、R1-N定量限质谱图；图7为待测样品中杂质R1-M质谱图；图8为待测样品中杂质R1-C质谱图；图9为待测样品中杂质R1-N质谱图；图10为待测加标样品中杂质R1-M质谱图；图11为待测加标样品中杂质R1-C质谱图；图12为待测加标样品中杂质R1-N质谱图；图13为杂质R1-M线性范围(0.001～0.025μg/ml)；图14为杂质R1-C线性范围(0.001～0.025μg/ml)；图15为杂质R1-N线性范围(0.001～0.027μg/ml)。具体实施方式以下结合具体实施例对本专利技术进一步详细的说明。本专利技术可以以许多不同的形本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n分别溶解4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸乙酯对照品、4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸甲酯对照品和4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸异丙酯对照品，得3种杂质对照品溶液；/n溶解待测帕瑞昔布钠，得待测样品溶液；/n对所述3种杂质对照品溶液、待测样品溶液进行液相色谱联用质谱测定；/n色谱条件包括：/n流动相A为挥发性酸或缓冲溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱；/n质谱条件包括：/n选用电喷雾离子源，正离子扫描模式，去簇电压为25～200V，碰撞能量为10～100eV，毛细管电压为2000～6000V，毛细管温度为250～400℃，干燥气温度为250～600℃。/n

【技术特征摘要】
1.一种帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
分别溶解4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸乙酯对照品、4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸甲酯对照品和4-(5-甲基-3-苯基-4-异恶唑基)苯磺酸异丙酯对照品，得3种杂质对照品溶液；
溶解待测帕瑞昔布钠，得待测样品溶液；
对所述3种杂质对照品溶液、待测样品溶液进行液相色谱联用质谱测定；
色谱条件包括：
流动相A为挥发性酸或缓冲溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱；
质谱条件包括：
选用电喷雾离子源，正离子扫描模式，去簇电压为25～200V，碰撞能量为10～100eV，毛细管电压为2000～6000V，毛细管温度为250～400℃，干燥气温度为250～600℃。


2.根据权利要求1所述的帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述质谱条件包括：去簇电压为50～100V，碰撞能量为20～50eV，毛细管电压为4000～6000V，毛细管温度为300～400℃，干燥气温度为500～600℃。


3.根据权利要求2所述的帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述质谱条件还包括：扫描方式为多反应监测模式，扫描离子质荷比分别为330.2/132.0、344.1/132.0和358.2/132.0。


4.根据权利要求2所述的帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述质谱条件还包括：雾化气流速为10～60L/min，气帘气流速为10～50L/min。


5.根据权利要求1所述的帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述流动相A选自甲酸水溶液、乙酸水溶液、甲酸铵水溶液或乙酸铵水溶液。


6.根据权利要求5所述的帕瑞昔布钠基因遗传毒性杂质的检测方法，其特征在于，所述流动相A选自体积分数为0.01～2.0％的甲酸水溶液、体积分数为0.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓维，罗国军，杜狄峥，
申请(专利权)人：上海秀新臣邦医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31