一株粪肠球菌及其应用制造技术

一株粪肠球菌及其应用。所述粪肠球菌(Enterococcus faecalis)，于2019年12月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20191139。所述凝结芽孢杆菌的应用，是指粪肠球菌CCTCC NO：M 20191139用于动物饲喂，规格为100亿cfu/g的单菌粉用量为0.5‰‑1.0‰。本发明专利技术的有益效果在于，粪肠球菌CCTCC NO：M 20191139稳定性能好，可明显提升动物健康状态。

Enterococcus faecalis and its application

【技术实现步骤摘要】
一株粪肠球菌及其应用
本专利技术专利涉及一株粪肠球菌及其在饲料添加剂中的应用，属于微生物

技术介绍
益生菌通常是指改善宿主微生态平衡而发挥有益作用，达到提高宿主健康水平和健康状态的微生物菌剂及其代谢产物。粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)，乳酸菌的一种，革兰氏阳性菌，是人和动物肠道内主要菌群之一。粪肠球菌的益生作用机制包括：(1)作为乳酸菌的一种，粪肠球菌能够产生细菌素、有机酸或挥发性脂肪酸等来改善肠道内环境，达到竞争有害菌的应用成分或抑制其生长及活动的效果；(2)粪肠球菌能够在动物肠道内形成生物薄膜附着在动物肠道粘膜上，进行正常发育、生长的繁殖，形成乳酸菌屏障，抵御外来毒素和致病菌侵入；(3)粪肠球菌能够能将多种碳水化合物的无氮浸出物转化为乳酸，完全被机体进行吸收利用；还能分解部分蛋白质；(4)粪肠球菌能够显著增强巨噬细胞的活性，促进免疫器官的发育，提高动物的免疫反应能力，促进抗体的产生及细胞因子的分泌，从而增强机体的免疫力(安玉亭，胡浩，王智刚，周新秀，粪肠球菌的生物学特性及其在养殖业中的应用，安徽农业科学，2015，43(27)：115-117)。在《饲料添加剂品种目录(2013)》中，粪肠球菌被归类于微生物饲料添加剂，适用范围为养殖动物。已有不少关于粪肠球菌在畜禽养殖中的应用报道。CN104293697B公开了一种含粪肠球菌的鸡饲料益生菌剂及其制备方法，其有益效果在于：提高动物的饲料利用效率，节约成本，大大改善动物体内消化道内环境的稳态，促进营养的吸收利用，促进动物生长，显著提高动物的生产性能、免疫性能和繁殖性能，降低生产成本，提高经济效益。CN110326706A公开了一种含粪肠球菌的复合型高活性饲用益生菌剂，其有益效果在于：益生菌剂能有效提高饲料利用率和养殖动物机体免疫能力，减少腹泻、下痢机率，改善动物皮毛色泽和肉的品质，降低动物粪便臭味，减少医疗用药次数，降低动物饲养成本。大多数乳酸菌不能耐受动物消化道中胃酸、胆盐等不良环境条件的作用，并且在颗粒饲料加工中无法耐受制粒时的高温、压力和剪切力，以及运输和存储过程中易受温度、挤压、氧气的影响，致使活性大大降低甚至死亡，严重影响了活菌制剂的效价及其应有的益生特性(王建华，杨新建，腾达，王秀敏，毛若雨，郝娅，一种粪肠球菌微胶囊及其制备方法，CN107260704A)。粪肠球菌也存在同样问题。江文涛等考察了国内3家同类产品的室温稳定性，发现60天存活率最高不超过32％(江文涛，马加军，贾朋辉，卢刚，邱勇，微胶囊化粪肠球菌稳定性影响因素研究，饲料研究，2018年01期：74-78)。研究人员进行了大量尝试以增强粪肠球菌的稳定性。张琳等采用乳化凝胶化法制备微囊化粪肠球菌，发现微囊化粪肠球菌5个月的存活率由10.96％提升到30.42％，且对不良环境的抗性有显著提升(张琳，贠婷婷，綦文涛，李杰，王永伟，李爱科，乳化凝胶化法微囊化益生菌抗胁迫作用研究，动物营养学报，2015年11期：3636-3642)。杜志琳等研究了微囊化粪肠球菌的体外特征，发现微囊化粪肠球菌较菌粉样品的抗逆性有明显提高，6个月的存活率由31.5％增加至65.9％(杜志琳，尹望，李雪平，微囊化粪肠球菌的体外特征的研究，中国饲料添加剂，2018年第7期：36-39)。江文涛等选择合适的载体并控制水分，微囊化粪肠球菌的45天存活率达96.6％，较原菌粉的11.3％有显著提高；应用中试中，微囊化粪肠球菌的30天存活率和60天存活率分别可达88.7％和81.3％(江文涛，马加军，贾朋辉，卢刚，邱勇，微胶囊化粪肠球菌稳定性影响因素研究，饲料研究，2018年01期：74-78)。基于成本因素和加工便利，饲用益生菌不仅要求益生功能显著，还必须有良好的加工性能和储存性能。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题，本专利技术申请人提供了一株粪肠球菌及其在饲料加工中的应用。本专利技术粪肠球菌菌株抗逆性强、稳定性能好，可用作动物益生菌。本专利技术技术方案如下：一株粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)及其应用。所述粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)，于2019年12月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCM20191139。所述粪肠球菌的应用，是指粪肠球菌CCTCCNO：M20191139用于饲喂动物，规格为100亿cfu/g的单菌粉用量为0.5‰-1.0‰。本专利技术的有益效果在于：本专利技术的粪肠球菌CCTCCNO：M20191139稳定性好，可明显提升动物健康状态。具体实施方式下面结合实施例，对本专利技术进行具体描述。本专利技术粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)于2019年12月31日保藏于位于中国武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M20191139。实施例1取粪肠球菌CCTCCNO：M20191139发酵液进行耐酸性能评估。粪肠球菌发酵液活菌数为50亿cfu/mL。取1mL粪肠球菌发酵液加入模拟胃液中，置于37℃培养。定时取样并测定粪肠球菌活菌数，与初始活菌数进行比较，计算存活率。模拟胃液配制方法：配制pH1.5-3.0的稀盐酸溶液各100mL，分别加入1g胃蛋白酶，使其充分溶解，模拟胃液。采用倾注平板法测定粪肠球菌活菌数。先以无菌生理盐水进行十倍逐级稀释，取1mL稀释液在培养皿上，将灭菌后冷却至45℃的MRS培养基倾注在培养皿上，迅速摇匀，置于37℃条件下培养24hr，计算粪肠球菌数量。MRS培养基配制方法：蛋白胨10.0g，牛肉粉5.0g，酵母粉4.0g，葡萄糖20.0g，吐温-801.0mL，七水磷酸氢二钾2.0g，三水醋酸钠5.0g，柠檬酸三铵2.0g，七水硫酸镁0.2g，四水硫酸锰0.05g，琼脂粉15.0g，将上述成分加入到1000mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH6.2±0.2，121℃灭菌15～20min。表1粪肠球菌CCTCCNO：M20191139在不同模拟胃酸条件下存活率变化情况人和的动物的胃液呈强酸性，采用模拟胃液评估了粪肠球菌CCTCCNO：M20191139的耐酸性能。pH1.5-3.0范围内，随时间延长，粪肠球菌CCTCCNO：M20191139的存活率逐步下降；pH越低，下降趋势越明显。即使这样，pH1.5、作用180min后，粪肠球菌CCTCCNO：M20191139的存活率依然达到58％，这说明粪肠球菌CCTCCNO：M20191139有良好的耐酸能力。实施例2取粪肠球菌CCTCCNO：M20191139发酵液进行耐胆盐性能评估。粪肠球菌发酵液活菌数为50亿cfu/mL。取1mL粪肠球菌发酵液加入模拟胆盐中，置于37℃培养。定时取样并测定粪肠球菌活菌数，与初始活菌数进行比较，计算存活率。模拟胆盐配制方法：氯化钠8g，氯化钾0.2g，十二水磷酸氢二钠3.63g，磷酸二氢钾0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株粪肠球菌及其应用，其特征在于：所述粪肠球菌，为粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)CCTCC NO：M 20191139；所述应用，是指粪肠球菌CCTCC NO：M 20191139用于动物饲喂，规格为100亿cfu/g的单菌粉用量为0.5‰-1.0‰。/n

【技术特征摘要】
1.一株粪肠球菌及其应用，其特征在于：所述粪肠球菌，为粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)CCTCCNO：M20191...

【专利技术属性】
技术研发人员：石孔泉，朱义明，
申请(专利权)人：无锡拜弗德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32