抗mHI制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，提供了抗mHI

Anti mHI

【技术实现步骤摘要】
抗mHIN2蛋白抗体及其应用和包含其的试剂盒
本专利技术属于生物
，涉及一种单克隆抗体及其应用。
技术介绍
金黄色葡萄球菌α-溶血素(Hla)是一种外毒素，为金黄色葡萄球菌感染最主要的致病因子，常由致病性金黄色葡萄球菌特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产生。铁离子表面决定因子B亚单位(IsdB)是金黄色葡萄球菌一个重要外膜锚定蛋白，在协助细菌吸收代谢血红素铁过程、细菌粘附与定植中发挥重要作用。mHIN2是采用分子融合及大肠杆菌基因工程表达技术，将金黄色葡萄球菌的α-溶血素无毒突变体(mHlaH35L)与铁离子表面决定因子B亚单位N2活性片段(IsdB-N2)进行分子融合及可溶性表达的重组融合蛋白。采用重组mHIN2蛋白作为免疫原，经免疫、筛选、鉴定后获得的针对mHIN2多个活性表位的单克隆抗体，可应用于制备免疫防治金黄色葡萄球菌感染的特异治疗性抗体药物、检测重组金黄色葡萄球菌疫苗中mHIN2抗原含量的检测试剂盒。目前尚未有相应抗体存在。
技术实现思路
基于上述原因，本专利技术提供一种抗mHIN2蛋白的抗体，能够有效检测包含mHIN2蛋白的试剂，如疫苗中的mHIN2蛋白的含量，以解决上述问题。第一个方面，本专利技术提供抗mHIN2蛋白的抗体，所述抗体包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含3个CDR区，其中：所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYTFTSYW(SEQIDNO:1)；所述重链CDR2区的氨基酸序列为INPTNGHT(SEQIDNO:2)；>所述重链CDR3区的氨基酸序列为ARDGYDDGSWLAY(SEQIDNO:3)；或者所述重链CDR1区的氨基酸序列为GFTFSSFG(SEQIDNO:7)；所述重链CDR2区的氨基酸序列为INSDSSNI(SEQIDNO:8)；所述重链CDR3区的氨基酸序列为ARSGTTVVQDH(SEQIDNO:9)；以及所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QRIGTN(SEQIDNO:4)；所述轻链CDR2区的氨基酸序列为YAS(SEQIDNO:5)；所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QQSNSWPYS(SEQIDNO:6)；或者所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QDISNY(SEQIDNO:10)；所述轻链CDR2区的氨基酸序列为YTS(SEQIDNO:11)；所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QQGNTLPWT(SEQIDNO:12)。优选地，所述抗体包含重链和轻链，其中，所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYTFTSYW(SEQIDNO:1)；所述重链CDR2区的氨基酸序列为INPTNGHT(SEQIDNO:2)；所述重链CDR3区的氨基酸序列为ARDGYDDGSWLAY(SEQIDNO:3)；所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QRIGTN(SEQIDNO:4)；所述轻链CDR2区的氨基酸序列为YAS(SEQIDNO:5)；所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QQSNSWPYS(SEQIDNO:6)；或者所述重链CDR1区的氨基酸序列为GFTFSSFG(SEQIDNO:7)；所述重链CDR2区的氨基酸序列为INSDSSNI(SEQIDNO:8)；所述重链CDR3区的氨基酸序列为ARSGTTVVQDH(SEQIDNO:9)；所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QDISNY(SEQIDNO:10)；所述轻链CDR2区的氨基酸序列为YTS(SEQIDNO:11)；所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QQGNTLPWT(SEQIDNO:12)。进一步优选地，所述抗体为抗体5A8，其重链和轻链序列分别为：重链：VQLQESGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWIHWVKQRPGQGLEWIGEINPTNGHTNFNEKFKNRATLTVDKSSNTAYMQLSILTSEDSAVYYCARDGYDDGSWLAYWGQGTTVTVSS(SEQIDNO:13)；轻链:DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQRIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNSWPYSFGGGTKLEI(SEQIDNO:14)；或者所述抗体为抗体7G4，其重链和轻链序列分别为：重链:VKLQQSGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPEKGLEWVAYINSDSSNIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARSGTTVVQDHWGQGTTVTVSS(SEQIDNO:15)；轻链:DIVLTQTPSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSKLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISSLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFGGGTKLEIK(SEQIDNO:16)。优选地，所述抗体为IgG抗体。第二个方面，本专利技术提供一种检测mHIN2蛋白含量的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术的抗体。优选地，所述抗体为抗体5A8和7G4。优选地，所述试剂盒还包括人IgG、洗液、底物显色液A(EDTA-Na、柠檬酸、甘油、TMB)、底物显色液B(醋酸钠、柠檬酸、30％H2O2)、终止液(2MH2SO4)和BSA。优选地，所述试剂盒还包括酶联板和封板膜。优选地，所述试剂盒还包括mHIN2蛋白标准品。更优选地，所述抗体5A8为检测抗体，所述抗体7G4为包被抗体。第三个方面，本专利技术提供一种检测mHIN2蛋白含量的方法，包括使用抗体5A8和抗体7G4，利用双抗体夹心法进行ELISA检测。优选地，所述方法包括：1)使用抗体7G4包被酶联板；2)将检测样品与抗体7G4反应；3)使用抗体5A8进行检测和显色反应，测定450nm下吸光值；4)利用mHIN2蛋白标准品制备标准曲线，根据标准曲线计算被测样品中mHIN2蛋白含量。优选地，所述方法的检测的mHIN2蛋白含量范围是0.046875～3μg/ml。第四个方面，提供本专利技术的抗mHIN2蛋白抗体在检测mHIN2蛋白含量中的应用。在本专利技术中，所述mHIN2蛋白的序列为：GPLGSMADSDINIKTGTTDIGSNTTVKTGDLVTYDKENGMLKKVFYSFIDDKNHNKKILVIRTKGTIAGQYRVYSEEGANKSGLAWPSAFKVQLQLPDNEVAQISDYYPRNSIDTKEYMSTLTYGFNGNVTGDDSGKIGGLIGANVSIGHTLKYVQPDFKTILESPTDKKVGWKVIFNNMVNQNWGPYDRDSWNPVYGNQLFMKTRNGSMKAAENFLDPNKA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗mHI

【技术特征摘要】
1.抗mHIN2蛋白的抗体，所述抗体包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含3个CDR区，其中：
所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYTFTSYW(SEQIDNO:1)；
所述重链CDR2区的氨基酸序列为INPTNGHT(SEQIDNO:2)；
所述重链CDR3区的氨基酸序列为ARDGYDDGSWLAY(SEQIDNO:3)；或者
所述重链CDR1区的氨基酸序列为GFTFSSFG(SEQIDNO:7)；
所述重链CDR2区的氨基酸序列为INSDSSNI(SEQIDNO:8)；
所述重链CDR3区的氨基酸序列为ARSGTTVVQDH(SEQIDNO:9)；以及
所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QRIGTN(SEQIDNO:4)；
所述轻链CDR2区的氨基酸序列为YAS(SEQIDNO:5)；
所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QQSNSWPYS(SEQIDNO:6)；或者
所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QDISNY(SEQIDNO:10)；
所述轻链CDR2区的氨基酸序列为YTS(SEQIDNO:11)；
所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QQGNTLPWT(SEQIDNO:12)。


2.根据权利要求1所述的抗体，所述抗体包含重链和轻链，其中，
所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYTFTSYW(SEQIDNO:1)；
所述重链CDR2区的氨基酸序列为INPTNGHT(SEQIDNO:2)；
所述重链CDR3区的氨基酸序列为ARDGYDDGSWLAY(SEQIDNO:3)；
所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QRIGTN(SEQIDNO:4)；
所述轻链CDR2区的氨基酸序列为YAS(SEQIDNO:5)；
所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QQSNSWPYS(SEQIDNO:6)；或者
所述重链CDR1区的氨基酸序列为GFTFSSFG(SEQIDNO:7)；
所述重链CDR2区的氨基酸序列为INSDSSNI(SEQIDNO:8)；
所述重链CDR3区的氨基酸序列为ARSGTTVVQDH(SEQIDNO:9)；
所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QDISNY(SEQIDNO:10)；
所述轻链CDR2区的氨基酸序列为YTS(SEQIDNO:11)；
所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QQGNTLPWT(SEQIDNO:12)。


3.根据权利要求2所述的抗体，其中，
所述抗体为抗体5A8，其重链和轻链序列分别为...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾浩，纪永军，邹全明，杨峰，杨茜，蔡昌芝，赵莉群，张怡，
申请(专利权)人：成都欧林生物科技股份有限公司，中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：四川;51