人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种人参皂苷‑短双歧杆菌M‑16V微胶囊及其制备方法。包括：溶液配制、短双歧杆菌M‑16V菌种的活化、菌悬液的制备、微胶囊的制备；所述溶液配制步骤包括模拟胃液、模拟肠液、解囊液的配制；所述微胶囊的制备包括：将菌悬液与高温灭菌后的人参皂苷和槐实胶溶液混合均匀后，将菌悬液挤压入磁力搅拌的无菌CaCl

Ginsenoside Bifidobacterium brevis M-16V microcapsule and its preparation

【技术实现步骤摘要】
人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊及其制备方法
本专利技术属于生物
，更具体地，涉及一种人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊及其制备方法。
技术介绍
难溶药物的生物利用度一直是各国科学家努力研究的问题。据估计，全世界40％的已上市药物是难溶性的，而处在实验室研究阶段的难溶性药物就更多。近年来，国内外针对难溶性药物的技术日趋增多，这些技术包括纳米技术、微乳技术、脂质体技术、固体分散技术等，受到了工业界的广泛关注。例如中国专利申请CN105412016A就报道了通过常规的肠溶固体分散体的方法将番茄红素、白藜芦醇或褪黑素进行分散，从而获得更好的溶解度。人参皂苷(Ginsenoside)是一种固醇类化合物，三萜皂苷。主要存在于人参属药材中。人参皂苷被视为是人参中的活性成分，因而成为研究的目标。人参皂苷Rh2单体对癌细胞的生长有抑制作用，能诱导肿瘤细胞凋亡，逆转肿瘤细胞异常分化，抗肿瘤转移，与化疗药物联用能起到增效减毒的作用。除抗肿瘤作用外，人参皂苷具有提高机体免疫力、抗菌、改善心脑血管供血不足、调节中枢神经系统、抗疲劳、延缓衰老等作用。因为人参皂苷影响了多重的代谢通路，所以其效能也是复杂的，而且各种人参皂苷的单体成分是难以分离出来的。通常改进人参皂苷水溶性的方法包括纳米化、固体脂质体、固体分散体、微乳化等。上述方法中，固体分散技术以及纳米技术是两个在制药工业常见的提高难溶药物溶解度的方法。益生菌在储存过程中对环境因素(热，氧和湿度)高度敏感，加之胃肠液的破坏作用，导致益生菌到达肠道后活菌数大大降低而不能很好地发挥益生效果。因此，探究保护益生菌并使更多活菌输送到肠道中的方法具有重要意义。在这个意义上，微胶囊化被认为是最有效的方法之一。短双歧杆菌M-16V是一种天然存在于健康宝宝肠道内的有益菌，其已被临床医学研究证实可促进健康的肠道微生态，从而帮助调节免疫平衡。目前尚未有文献报道将人参皂苷及益生菌组合物与微胶囊化方法结合，协同提高其生物利用度。
技术实现思路
本专利技术的目的在于将人参皂苷及益生菌组合物同时运用微胶囊化方法，协同提高其生物利用度。本专利技术提供一种人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，包括：溶液配制、短双歧杆菌M-16V菌种的活化、菌悬液的制备、微胶囊的制备；所述溶液配制步骤包括模拟胃液的配制、模拟肠液的配制、解囊液的配制；所述微胶囊的制备包括：将菌悬液与高温灭菌后的人参皂苷和槐实胶溶液混合均匀后，将菌悬液挤压入磁力搅拌的无菌CaCl2溶液中，常温下固化，通过重力沉降从CaCl2溶液中回收微胶囊，然后用滤纸过滤，水冲洗除去多余氯化钙和盐类，得到湿微胶囊，然后对湿微胶囊进行干燥，得到人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊。根据本专利技术，优选地，所述模拟胃液的配制方法包括：配制1-5g/LNaCl溶液，调pH至2-3，110-130℃高压灭菌10-20min；取2-4g胃蛋白酶，加入到灭菌的NaCl溶液中溶解，然后用0.1-0.3μm滤膜过滤除菌。根据本专利技术，优选地，所述模拟肠液的配制方法包括：称取KH2PO44-8g加入300-800ml蒸馏水溶解，然后调pH为4-8，110-130℃灭菌10-20min；另称取胰蛋白酶5-15g，溶于200-500ml无菌水，然后与灭菌的KH2PO4溶液混合均匀，定容至500-1500ml，最后用0.1-0.3μm滤膜过滤除菌。根据本专利技术，优选地，所述解囊液的配制方法包括：分别称取10-18g的KH2PO4和7-15g的C6H8O7，加蒸馏水溶解定容至500-1500ml，然后调节pH为6-8，110-130℃灭菌10-20min。根据本专利技术，优选地，所述短双歧杆菌M-16V菌种的活化步骤包括：将冻存于-20℃至-10℃的菌株接种至MRS肉汤培养基中，35-42℃静置厌氧培养20-30h，连续活化三代后用于后续实验。根据本专利技术，优选地，所述菌悬液的制备步骤包括：取1-3％活化好的菌液于MRS肉汤培养基中30-40℃培养10-15h后，离心，弃去上清，用PBS缓冲液调整菌液浓度为108-109CFU/ml，精确活菌数采用平板菌落计数法测定。根据本专利技术，优选地，所述离心的条件包括：3000-5000r/min，2-6℃，8-12min。根据本专利技术，优选地，所述微胶囊的制备包括：。用无菌注射器(23G)将菌悬液挤压入磁力搅拌的无菌CaCl2溶液中；所述常温下固化的时间为20-40min；所述水冲洗的次数为1-3次；所述干燥为冻干或喷雾干燥。本专利技术还提供由上述制备方法制得的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊。本专利技术有益效果：本专利技术所得短双歧杆菌M-16V微胶囊的活菌数和包埋产率分别为4×108CFU/g和94％，本专利技术的微胶囊具有较高的包埋产率以及良好的胃酸环境耐受性和肠溶性，解决人参皂苷及益生菌在人体内的生物利用度，最终两者协同使人参皂苷的溶出度和生物利用度大幅提高，生物利用度可达79％。本专利技术的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。附图说明通过结合附图对本专利技术示例性实施方式进行更详细的描述，本专利技术的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显。图1示出了本专利技术一种实施方式的微胶囊在胃液中处理释放活菌数随时间变化的图。具体实施方式下面将更详细地描述本专利技术的优选实施方式。虽然以下描述了本专利技术的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施方式所限制。实施例1本实施例提供一种人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊及其制备方法，步骤包括：(1)溶液配制：模拟胃液、模拟肠液解囊液的配制。模拟胃液的配制方法包括：配制2g/LNaCl溶液，调pH至2.5，121℃高压灭菌15min；取3g胃蛋白酶，加入到灭菌后的NaCl溶液中溶解，然后用0.22μm滤膜过滤除菌；模拟肠液的配制方法包括：称取KH2PO46.8g加入500ml蒸馏水溶解，然后调pH为6.8，121℃灭菌15min；另称取胰蛋白酶10g，溶于200ml无菌水，然后与KH2PO4溶液混合均匀，定容至1000ml，最后用0.22μm滤膜过滤除菌；解囊液的配制方法包括：分别称取14.2gKH2PO4和9.6gC6H8O7，加蒸馏水溶解定容至1000ml，然后调节pH为7.5，121℃灭菌15min，备用。(2)菌种的活化菌种的活化步骤包括：将冻存于-20℃的菌株接种至MRS肉汤培养基中，37℃静置厌氧培养24h，连续活化三代后用于后续实验。(3)菌悬液的制备菌悬液的制备步骤包括：取2％活化好的菌液于MRS肉汤培养基中37℃培养14h后，离心(4000r/min，4℃，10min)，弃去上清，用PBS缓冲液调整菌液浓度约109CFU/ml，精确活菌数采用平板菌落计数法测定(4)微胶囊的制备<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，包括：溶液配制、短双歧杆菌M-16V菌种的活化、菌悬液的制备、微胶囊的制备；/n所述溶液配制步骤包括模拟胃液的配制、模拟肠液的配制、解囊液的配制；/n所述微胶囊的制备包括：将菌悬液与高温灭菌后的人参皂苷和槐实胶溶液混合均匀后，将菌悬液挤压入磁力搅拌的无菌CaCl

【技术特征摘要】
1.一种人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，包括：溶液配制、短双歧杆菌M-16V菌种的活化、菌悬液的制备、微胶囊的制备；
所述溶液配制步骤包括模拟胃液的配制、模拟肠液的配制、解囊液的配制；
所述微胶囊的制备包括：将菌悬液与高温灭菌后的人参皂苷和槐实胶溶液混合均匀后，将菌悬液挤压入磁力搅拌的无菌CaCl2溶液中，常温下固化，通过重力沉降从CaCl2溶液中回收微胶囊，然后用滤纸过滤，水冲洗除去多余氯化钙和盐类，得到湿微胶囊，然后对湿微胶囊进行干燥，得到人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊。


2.根据权利要求1所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述模拟胃液的配制方法包括：配制1-5g/LNaCl溶液，调pH至2-3，110-130℃高压灭菌10-20min；取2-4g胃蛋白酶，加入到灭菌的NaCl溶液中溶解，然后用0.1-0.3μm滤膜过滤除菌。


3.根据权利要求1所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述模拟肠液的配制方法包括：称取KH2PO44-8g加入300-800ml蒸馏水溶解，然后调pH为4-8，110-130℃灭菌10-20min；另称取胰蛋白酶5-15g，溶于200-500ml无菌水，然后与灭菌的KH2PO4溶液混合均匀，定容至500-1500ml，最后用0.1-0.3μm滤膜过滤除菌。


4.根据权利要求1所述的人参皂苷-短双歧杆菌M-16V微胶囊的制备方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：伍金娥，董志文，雷媛媛，李明，王然然，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42