作为子宫内膜癌的标志物的CTNB1制造技术

本发明专利技术提供了通过检测一种或多种蛋白质的表达水平对容易获得的分离样品中子宫内膜癌进行诊断和预后的方法。特别是来自子宫液样品。本发明专利技术也提供包括用于检测所述蛋白质的工具的试剂盒，所述试剂盒用于疾病的诊断和预后。

Ctnb1 as a marker of endometrial cancer

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】作为子宫内膜癌的标志物的CTNB1本申请要求2017年7月21日提交的欧洲专利申请EP17382483.0的权益。
本专利技术涉及子宫内膜癌的诊断和预后。
技术介绍
在发达国家，子宫内膜癌(EC)是女性生殖道最常见的浸润性肿瘤，也是女性第四常见的癌症，2017年美国共诊断61380例，估计死亡10920人。目前，70％的EC病例是在疾病早期诊断的，此时肿瘤仍然局限于子宫内膜内，与96％的5年生存率相关。然而，30％的EC患者仅在与5年生存率急剧下降相关的疾病晚期被诊断，已经存在肌层浸润和/或淋巴结感染时5年生存率下降到67％，而在远端转移的情况中5年生存率下降到18％。因此，改善早期诊断是适当管理EC和降低与该疾病相关的死亡率的主要问题。像被诊断为EC的女性中的93％出现的异常阴道出血这样的症状的存在有助于早期发现EC患者。然而，许多其他良性疾病也产生类似的症状。对子宫内膜良性病变的患者和患有EC的患者的辨别只有在冗长的诊断过程后才能实现，该过程包括盆腔检查和经阴道超声检查，以及随后的对子宫内膜活检进行的确认性组织病理学检查。在这一过程中使用的优选活检被称为子宫抽吸和/或移液管活检，是通过从子宫腔内微创抽吸子宫内膜液获得的。由于目前对子宫抽吸物的诊断程序依赖于细胞物质的存在，因此，遗憾的是，该过程具有的诊断失败和相关的不充分采样率分别为8％和15％。该比例在绝经后妇女中增加到12％和22％。在那些情况中，需要在宫腔镜引导下进行活检，而这种侵入性技术会增加并发症的风险，包括子宫穿孔、出血和对其他器官可能的伤害。到目前为止，已经进行很多研究来鉴定EC蛋白生物标志物，主要是在组织和血清样品中(例如，参见DeSouzaLV等，“Endometrialcancerbiomarkerdiscoveryandverificationusingdifferentiallytaggedclinicalsampleswithmultidimensionalliquidchromatographyandtandemmassspectrometry”，MolCellProteomicsMCP-2007,第6卷1170–8页，或KemikP等，“DiagnosticandprognosticvaluesofpreoperativeserumlevelsofYKL-40,HE-4andDKK-3inendometrialcancer”，GynecolOncol-2016；第140卷，64–9页)。它们都没有转化为临床应用。尽管活检应该提供有关肿瘤组织学和肿瘤分级的信息，以有助于EC患者的风险分层，并指导手术分期，然而，不幸的是，可供检查的细胞数量有限，并且病理解释中观察者间具有高度的变异性，由此导致活检和最终的子宫切除术标本之间的EC组织分型和等级的不一致性为40-50％。因此，敏感、特异且可重复的生物标志物(其改进EC肿瘤的组织学类型和分级的诊断、预后和术前评估)对于正确管理EC患者和降低与该疾病相关的死亡率和发病率至关重要。在EC的亚型或各种表现形式中，子宫内膜样子宫内膜癌(EEC)是EC中最常见的组织学类型，与非子宫内膜样EC病例(NEEC)相比，预后良好。NEEC占所有EC病例的约20％，但占EC复发和死亡则超过50％。在NEEC中，浆液性EC(SEC)是最常见的亚型。对于这两种结果不同的组织学的鉴别，目前还没有可行的检验方法。总之，尽管已经做了很多努力，仍然需要具有高敏感性和特异性的生物标志物对子宫内膜癌进行诊断乃至预后，特别是需要用于临床实践的生物标志物。
技术实现思路
本专利技术人已经确定，在由子宫液分离的外泌体中可检测到的某些蛋白质标志物为子宫内膜癌(EC)提供了有价值的诊断信息。许多这些蛋白质在未分离外泌体级分的子宫液中得到证实。因此，这些蛋白质是有意义的诊断生物标志物，在子宫液中进行分析时，该标志物可以在EC和非癌症对照之间进行高敏感性和特异性的鉴别。另外，本专利技术人已经确定，在所述子宫液中，以及在所述子宫液的外泌体级分中检测到的一些蛋白质是子宫内膜癌(EC)的有意义的预后生物标志物。这些蛋白至允许以高敏感性和高特异性区分子宫内膜癌的亚型，从而使这些亚型中假阳性和假阴性分类的风险最小化。此外，作为在没有侵入性实践的情况下获得的样品中(例如在子宫液样品中)可检测到的蛋白质，这些样品又是EC诊断中的常规样品类型，这些蛋白质在EC患者的分类和管理的临床实践中具有真正的优势和改进。在以前的研究中，本专利技术人证明子宫抽吸物的液体级分对于筛选EC蛋白至生物标志物具有重要价值(例如参见Martínez-GarciaE等，“DevelopmentofasequentialworkflowbasedonLC-PRMfortheverificationofendometrialcancerproteinbiomarkersinuterineaspiratesamples”，Oncotarget-2016，第7(33)卷，53102-53114页)。该文献展示了采用基于LC-PRM的连续工作流程所进行的研究，说明了生物标志物验证阶段对于填补发现和临床实践之间的空白的重要性。该研究强调了26种蛋白质在诊断EC患者和非EC患者(对照)中的益处。关于子宫液的外泌体中鉴别的用于EC的新型诊断生物标志物，本专利技术的一个方面是EC的诊断方法，所述方法包括确定来自女性生殖道的子宫液样品中的一种或多种选自由AGRIN、MVP、VAMP8、SYIC、RAB8A、MX1、IMB1、CLIC1、SMD3、ILF2、TERA、RL11、BCAM、ANXA2、LAT1、RUVB1、SH3L3、RPL13A、RS16、RSSA、RL12、PDIA1、RL29、PPIA、AGR2、MMP9、KPYM、TACD2、FAS、SORT、LAT1、ADA10、ITA3、RUXE、PSMD2、VPS35、ANXA4、PLD3、SSRA、LAMP2、PODXL、CLD6、IF2B3、CD59、MLEC、PGBM、S10AC、CD14、H10、CD81、AR6P1、VAC14、ITB3和CD166组成的组的蛋白质的表达水平。本专利技术的另一方面是一种或多种选自由AGRIN、MVP、VAMP8、SYIC、RAB8A、MX1、IMB1、CLIC1、SMD3、ILF2、TERA、RL11、BCAM、ANXA2、LAT1、RUVB1、SH3L3、RPL13A、RS16、RSSA、RL12、PDIA1、RL29、PPIA、AGR2、MMP9、KPYM、TACD2、FAS、SORT、LAT1、ADA10、ITA3、RUXE、PSMD2、VPS35、ANXA4、PLD3、SSRA、LAMP2、PODXL、CLD6、IF2B3、CD59、MLEC、PGBM、S10AC、CD14、H10、CD81、AR6P1、VAC14、ITB3和CD166组成的组的蛋白质在来自女性生殖道的子宫液样品中作为诊断EC的离体标志物的应用。该方面也可表述为检测受试者中一个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种子宫内膜癌的鉴别诊断方法，所述方法包括确定来自女性生殖道的子宫液样品中CTNB1的表达水平。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170721 EP 17382483.01.一种子宫内膜癌的鉴别诊断方法，所述方法包括确定来自女性生殖道的子宫液样品中CTNB1的表达水平。


2.如权利要求1所述的方法，其中所述子宫液样品是来自女性生殖道的子宫抽吸液样品。


3.如权利要求1至2中任一项所述的方法，所述方法包括确定下列蛋白质中的一种或多种的表达水平：MMP9、AGRIN、CAPG、HSPB1和XPO2。


4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，所述方法包括确定下列蛋白质中的一种或多种的表达水平：PIGR、VIME、CAYP1、SG2A1、WFDC2、CADH1、CD44、LEG3、LEG1、AGR2、BCAM、PODXL、CD59、CLD6、IF2B3、PLD3和MX1。


5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，所述方法还包括确定下列蛋白质中的一种或多种的表达水平：PRDX1、CLIC1、PDIA1、KPYM、ENOA、GSTP1、GTR1、CH10、MIF、PEBP1、TPIS、NGAL、CAYP1、SG2A1、LDHA、PERM、OSTP、SPIT1、NAMPT、CASP3、K2C8、MUC1、ANXA1、ANXA2、FABP5和WFDC2。


6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，所述方法还包括确定一种选自由XPO2、PRDX1、CLIC1、PDIA1、KPYM、ENOA、GSTP1、GTR1、CH10、MIF、PEBP1、TPIS、NGAL和LDHA组成的组的蛋白质的表达水平。


7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，所述方法还包括确定从子宫抽吸物中分离的含有外泌体的级分中选自由CLD6、BCAM、IF2B3、PLD3和MX1组成的组的一种或多种蛋白质的表达水平。


8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，所述方法还包括测定至少一组选自由LAMP、MMP9、PIGR；AGRIN、MMP9、PIGR；AGR2、PIGR、PLD3；AGR2、BCAM、PODXL；BCAM、PODXL；PIGR、PLD3；BCAM、PIGR；CLD6、RAB8A；CLD6、PODXL；BCAM、RL29；BCAM、PODXL；CLD6、PPIA、AGRIN、BCAM；ANXA、BCAM；BCAM、RAB8A；BCAM、SYIC；CLD6、IFB3；以及表C中所列的组组成的组中的蛋白质的表达水平。


9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中通过区分非子宫内膜样子宫内膜癌的子宫内膜样子宫内膜癌以及非癌症而确定子宫内膜癌的鉴别诊断。


10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中在蛋白质水平上确定表达水平。


11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述蛋白质水平通过选自由免疫测定、生物发光测定、荧光测定、化学发光测定、电化学测定、质谱及其组合组成的组的测定或技术来确定。


12.如权利要求10至11中任一项所述的方法，其中使用能够与蛋白质结合的抗体或其片段来确定所述蛋白质的表达水平。


13.如权利要求12所述的方法，其中所述抗体或其片段形成试剂盒的一部分。


14.一种或多种选自由PIGR、VIME、CTNB1、CAYP1、SG2A1、WFDC2、CADH1、CD44、LEG3、LEG1、CAPG、AGR2、BCAM、PODXL、MMP9、CD59、CLD6、IF2B3、PLD3和MX1组成的组的蛋白质在来自女性生殖道的子宫液样品中作为用于子宫内膜癌的预后的离体标志物的应用。


15.一种或多种选自由PIGR、VIME、CTNB1、CAYP1、SG2A1、WFDC2、CADH1、CD44、LEG3、LEG1、CAPG、AGR2、BCAM、PODXL、MMP9、CD59、CLD6、IF2B3、PLD3和MX1组成的组的蛋白质在前述权利要求1至14中任一项所述的方法中用于子宫内膜癌的预后的应用。


16.一种试剂盒用于子宫内膜癌的预后的应用，所述试剂盒包括固相载体和用于检测下列蛋白质PIGR、VIME、CTNB1、CAYP1、SG2A1、WFDC2、CADH1、CD44、LEG3、LEG1、CAPG、AGR2、BCAM、PODXL、M...

【专利技术属性】
技术研发人员：E·马丁内兹·加西亚，E·科拉斯·奥尔特加，A·吉尔·莫雷诺，J·雷文托斯·普格贾纳，B·多蒙，A·勒叙尔，I·坎波伊·蒙卡约，
申请(专利权)人：瓦尔德西布伦大学医院基金会研究所，卢森堡卫生研究所，莱里达生物医学研究所基金会博士皮法尔，
类型：发明
国别省市：西班牙;ES