一种卡贝缩宫素的分析检测方法技术

本发明专利技术涉及一种卡贝缩宫素的分析检测方法。主要解决现有缺少对卡贝缩宫素杂质分析方法的技术问题。本发明专利技术所述的卡贝缩宫素的分析检测方法，包括以下步骤：步骤1：取卡贝缩宫素和杂质，溶解后作为供试品溶液；步骤2：以C18键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；检测波长为220 nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为60℃。本方法有效地解决了卡贝缩宫素有关物质检测和分离的问题，能保证卡贝缩宫素中有关物质的可控性，提高产品质量。

A method for the analysis and detection of carbetoxine

【技术实现步骤摘要】
一种卡贝缩宫素的分析检测方法
本专利技术涉及一种活性多肽原料药的分析检测方法，特别是涉及卡贝缩宫素原料药有关物质检测方法。
技术介绍
卡贝缩宫素(Carbetocin)，别名醋酸卡贝缩宫、卡比托辛，其化学名称为：去氨-2-氧-甲基酪氨酸-1-κ缩宫素，序列为Butyryl-Tyr(me)-IIe-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2(DisulfideBridge:1-6)，分子式：C45H69N11O12S，分子量为988.17。结构式如下:卡贝缩宫素是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物。硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。卡贝缩宫素的临床和药理特性与天然产生的催产素类似，可以与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。研究表明，当硬膜外或腰麻下剖腹产术后立即单剂量静脉给予卡贝缩宫素100微克，在预防子宫张力不足和减少产后出血方面，卡贝缩宫素明显优于安慰剂。目前，氨基酸的分析多采用高效液相色谱法(HPLC)，但是不同的方法条件对不同氨基酸的分析结果准确度影响较大。在多肽合成中，为了更好的控制产品质量，须对杂质进行准确的分析，现有技术中，缺少对卡贝缩宫素杂质分析报道。专利技术内容本专利技术提供了一种卡贝缩宫素有关物质的分析检测方法，主要解决现有缺少对卡贝缩宫素杂质分析方法的技术问题。本专利技术的技术方案为：一种卡贝缩宫素的分析检测方法，包括如下步骤：步骤1：取卡贝缩宫素和杂质，溶解后作为供试品溶液；步骤2：以C18键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；检测波长为220nm；流速为1.0ml/min；进样体积为20μl；柱温为60℃。梯度洗脱时，流动相A按如下配制：取醋酸铵0.3g，加水1000mL使其溶解，加380mL乙腈和8mLPICB8低紫外试剂，加水稀释至2000mL；流动相B为流动相乙腈和流动相A混合物。所述方法中流动相B：流动相A和乙腈体积比为1:1。所述杂质为：。本专利技术的有益效果：常规分析方法有磷酸、醋酸、三氟乙酸等体系，对于卡贝缩宫素及杂质分离度差、洗脱时间长等问题。本专利技术梯度洗脱时，创造性提出了流动相A中添加了PICB8低紫外试剂，提高带相反电荷的样品组分与固定相的相互作用，有效的分离卡贝和相关杂质。卡贝产品保存条件为2-8℃，不稳定容易降解。已报道文献中检测时间在40-60分钟左右，本专利技术检测时间为16分钟。在保证分离度的前提下，从而提高效率。有效解决了三氟乙酸体系分离度小于1.5，有效控制卡贝的质量。故本专利技术专属性强、精密度好，准确度高，能将可能的降解杂质和工艺杂质与主成分有效分开，且灵敏度高，可应用于卡贝缩宫素原料药的质量控制，有利于提高卡贝缩宫素产品质量。附图说明图1为杂质A的色谱分析图；图2为杂质B的色谱分析图；图3为杂质C的色谱分析图；图4为杂质D的色谱分析图；图5为卡贝缩宫素的色谱分析图；图6为卡贝缩宫素和杂质A、B、C及D的色谱分析图。具体实施方式实施例1仪器与条件：采用赛默飞UltiMate3000RSLC高效液相色谱系统；色谱柱为WatersXBridgeC18,150x3.0mm;3.5µm，柱温为60℃；检测波长为220nm；流动相A：取醋酸铵0.3g，加水1000mL使其溶解，加380mL乙腈和8mLPICB8低紫外试剂，加水稀释至2000mL；流动相B：流动相A和乙腈体积比为1:1。洗脱梯度如下，进样体积为20μl。实验步骤：取杂质A，用水溶解制成0.1mg/ml样品溶液，做为待测溶液。取待测溶液，按照上述色谱条件进行高效液相色谱分析，其分析结果见图1。实施例2仪器与条件：采用赛默飞UltiMate3000RSLC高效液相色谱系统；色谱柱为WatersXBridgeC18,150x3.0mm;3.5µm，柱温为60℃；检测波长为220nm；流动相A：取醋酸铵0.3g，加水1000mL使其溶解，加380mL乙腈和8mLPICB8低紫外试剂，加水稀释至2000mL；流动相B：流动相A和乙腈体积比为1:1。洗脱梯度如下，进样体积为20μl。实验步骤：取杂质B，用水溶解制成0.1mg/ml样品溶液，做为待测溶液。取待测溶液，按照上述色谱条件进行高效液相色谱分析，其分析结果见图2。实施例3仪器与条件：采用赛默飞UltiMate3000RSLC高效液相色谱系统；色谱柱为WatersXBridgeC18,150x3.0mm;3.5µm，柱温为60℃；检测波长为220nm；流动相A：取醋酸铵0.3g，加水1000mL使其溶解，加380mL乙腈和8mLPICB8低紫外试剂，加水稀释至2000mL；流动相B：流动相A和乙腈体积比为1:1。洗脱梯度如下，进样体积为20μl。实验步骤：取杂质C，用水溶解制成0.1mg/ml样品溶液，做为待测溶液。取待测溶液，按照上述色谱条件进行高效液相色谱分析，其分析结果见图3。实施例4仪器与条件：采用赛默飞UltiMate3000RSLC高效液相色谱系统；色谱柱为WatersXBridgeC18,150x3.0mm;3.5µm，柱温为60℃；检测波长为220nm；流动相A：取醋酸铵0.3g，加水1000mL使其溶解，加380mL乙腈和8mLPICB8低紫外试剂，加水稀释至2000mL；流动相B：流动相A和乙腈体积比为1:1。洗脱梯度如下，进样体积为20μl。实验步骤：取杂质D，用水溶解制成0.1mg/ml样品溶液，做为待测溶液。取待测溶液，按照上述色谱条件进行高效液相色谱分析，其分析结果见图4。实施例5仪器与条件：采用赛默飞UltiMate3000RSLC高效液相色谱系统；色谱柱为WatersXBridgeC18,150x3.0mm;3.5µm，柱温为60℃；检测波长为220nm；流动相A：取醋酸铵0.3g，加水1000mL使其溶解，加380mL乙腈和8mLPICB8低紫外试剂，加水稀释至2000mL；流动相B：流动相A和乙腈体积比为1:1。洗脱梯度如下，进样体积为20μl。实验步骤：取卡贝缩宫素，用水溶解制成0.1mg/ml样品溶液，做为待测溶液。取待测溶液，按照上述色谱条件进行高效液相色谱分析，其分析结果见图5。实施例6仪器与条件：采用赛默本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卡贝缩宫素的分析检测方法，其特征在于：包括如下步骤：/n步骤1：取卡贝缩宫素和杂质，溶解后作为供试品溶液；/n步骤2：以C18键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；梯度洗脱时，流动相A按如下配制：取醋酸铵0.3g，加水1000mL使其溶解，加380mL乙腈和8mLPIC B8低紫外试剂，加水稀释至2000mL，流动相B为流动相乙腈和流动相A混合物；检测波长为220 nm ；流速为1 .0ml/min；进样体积为20μl；柱温为60℃。/n

【技术特征摘要】
1.一种卡贝缩宫素的分析检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1：取卡贝缩宫素和杂质，溶解后作为供试品溶液；
步骤2：以C18键合硅胶为色谱柱填料，采用紫外检测器，选用乙腈和缓冲液为流动相，梯度洗脱；梯度洗脱时，流动相A按如下配制：取醋酸铵0.3g，加水1000mL使其溶解，加380mL乙腈...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，秦敬国，李阳，王国军，
申请(专利权)人：吉尔生化上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31