miRNA在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途制造技术

本发明专利技术公开了miRNA在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途，属于医学生物技术领域。其中，所述miRNA选自miR‑155和miR‑485‑5p中的至少一种。本发明专利技术还公开了用于定量检测所述miRNA表达量的试剂在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途，以及一种用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒，其包括用于定量检测所述miRNA表达量的试剂。利用本发明专利技术，利用对象外周血即可进行检测，无创、方便、快捷，具有重要的临床应用价值。

Application of miRNA in the preparation of kit for detecting latent infection of KSHV

【技术实现步骤摘要】
miRNA在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途
本专利技术属于医学生物
，具体地，涉及miRNA在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途。
技术介绍
卡波氏肉瘤(Kaposi’sSarcoma，KS)是一种病变多发生在软组织内的以内皮细胞为主要来源的恶性肿瘤。根据流行病学和临床特征KS可以分为经典型、艾滋病相关型(AIDS-KS)、免疫抑制型和非洲地方型。在我国经典型KS主要发生于新疆维吾尔族和哈萨克族。KS发病的病原学基础是卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposisarcoma-associatedherpesvirus，KSHV)，也叫人疱疹病毒8型(HHV-8)的感染，由Chang等首先从AIDS-KS患者的肉瘤组织中发现。随后，在各型的KS中均发现了KSHV的高表达。研究发现KSHV是卡波氏肉瘤发生的必需因素和主要因素，与KS的发生关系密切。KSHV感染细胞后以两种方式存在，即持续的潜伏感染和短暂的裂解感染。对于潜伏感染，往往很难做到精确检测。miRNA是一类长约23个核苷酸非编码的小分子RNA。它广泛存在于多细胞生物中。miRNA通过基因转录后与靶mRNA3’UTR互补结合，使靶mRNA降解或抑制蛋白质翻译。它们参与信号转导、增殖、凋亡、侵袭或肿瘤血管形成。在肿瘤学、病毒学、神经生物学、胚胎发育等领域有许多成熟研究。然而，目前尚缺乏利用miRNA检测KSHV潜伏感染的研究和应用。
技术实现思路
本专利技术目的在于解决上述技术问题，而提供miRNA在制备KSHV潜伏感染检测试剂盒中的用途。本专利技术利用4例经典型KS患者的肿瘤组织和瘤旁正常组织进行了microRNA芯片的筛选，进一步通过RT-qPCR验证，意外地发现miR-485-5p和miR-155可以作为检测KSHV潜伏感染的标志物，从而完成本专利技术。本专利技术一方面提供miRNA在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途，所述miRNA选自miR-155和miR-485-5p中的至少一种。在本专利技术的一些实施方案中，所述miRNA选自miR-155和miR-485-5p中两种。在本专利技术的一些实施方案中，所述miRNA来源于外周血。本专利技术第二方面提供用于定量检测miRNA表达量的试剂在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途，其中，所述miRNA选自miR-155和miR-485-5p中的至少一种。在本专利技术的一些实施方案中，所述miRNA选自miR-155和miR-485-5p中两种。在本专利技术的一些实施方案中，所述表达量是指所述miRNA在外周血中的表达量。在本专利技术的一些实施方案中，所述用于定量检测miRNA表达量的试剂为实时荧光定量PCR相关试剂。在本专利技术的另一些实施方案中，所述用于定量检测miRNA表达量的试剂为miRNA测序试剂。本专利技术第三方面提供一种用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒，所述试剂盒包括用于定量检测miRNA表达量的试剂，其中，所述miRNA选自miR-155和miR-485-5p中的至少一种。在本专利技术的一些实施方案中，所述用于定量检测miRNA表达量的试剂为实时荧光定量PCR相关试剂。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述实时荧光定量PCR相关试剂包括能够特异性扩增所述miRNA的反转录产物的引物组合。在本专利技术的一些优选实施方案中，能够特异性扩增miR-485-5p的引物组合包括具有SEQIDNo.5所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQIDNo.6所示核苷酸序列的下游引物；能够特异性扩增miR-155的引物组合包括具有SEQIDNo.9所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQIDNo.10所示核苷酸序列的下游引物。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述实时荧光定量PCR相关试剂还包括荧光染料。在本专利技术的另一些具体实施方案中，所述实时荧光定量PCR相关试剂还包括能够特异性与所述miRNA的反转录产物杂交的探针。在本专利技术的另一些实施方案中，所述用于定量检测miRNA表达量的试剂为miRNA测序试剂。本专利技术的有益效果相对于现有技术，本专利技术至少具有以下技术效果：1.本专利技术可以在KSHV潜伏感染阶段检测出来，从而实验早期干预，具有重要的临床应用价值。2.本专利技术利用患者外周血即可进行检测，无创、方便、快捷。3.本专利技术提供了检测KSHV潜伏感染新的标志物，适用于临床，能够为临床上治疗KSHV提供更好的辅助。附图说明图1示出了感染KSHV的细胞中miR-485-5p、miR-374a-5p和miR-155相对未感染KSHV的细胞中的表达水平。BAC代表iSLK-BAC细胞，219代表iSLK-219细胞。图2示出了KS患者、KSHV阳性患者中miR-485-5p、miR-374a-5p和miR-155相对于健康对照的表达水平。图3示出了miR-155在KS患者和健康对照者之间ROC曲线分析结果。图4示出了miR-485-5p在KS患者和健康对照者之间ROC曲线分析结果。图5示出了miR-155和miR-485-5p联合在KS患者和健康对照者(KSHV阴性)之间的ROC曲线分析结果。图6示出了miR-155在KSHV阳性患者和健康对照者之间ROC曲线分析结果。图7示出了miR-485-5p在KSHV阳性患者和健康对照者之间ROC曲线分析结果。图8示出了miR-155和miR-485-5p联合检测在KSHV阳性个体和健康对照者(KSHV阴性)之间的ROC曲线分析结果。具体实施方式为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。实施例以下例子在此用于示范本专利技术的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表专利技术人发现的可以用于实施本专利技术的技术，因此可以视为实施本专利技术的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本专利技术的精神或范围。除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本专利技术所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的专利技术的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备，如无特殊说明，均为实验室常规仪器设备；下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。实施例1miRNA芯片分析1组织样本收集收集在新疆维吾尔自治区第六人民医院就诊的14例卡波氏肉瘤患者(KS患者)肿瘤组织和瘤旁正常组织，手术切除后立即放在液氮中储存，所有标本均经过本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miRNA在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途，其特征在于，所述miRNA选自miR-155和miR-485-5p中的至少一种。/n

【技术特征摘要】
1.miRNA在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途，其特征在于，所述miRNA选自miR-155和miR-485-5p中的至少一种。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述miRNA来源于外周血。


3.用于定量检测miRNA表达量的试剂在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途，其特征在于，所述miRNA选自miR-155和miR-485-5p中的至少一种。


4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述表达量是指所述miRNA在外周血中的表达量。


5.根据权利要求3或4所述的用途，其特征在于，所述用于定量检测miRNA表达量的试剂为实时荧光定量PCR相关试剂。


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【专利技术属性】
技术研发人员：曾妍，郑军，徐江，张铁军，赵娟，周政，袁武梅，刘振球，方绮雯，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65