Setdb1基因作为靶点在治疗炎症性肠病中的应用制造技术

本发明专利技术中通过小鼠动物实验证明，SETDB1蛋白低表达会导致基因组不稳定并启动ZBP1驱动的细胞程序性死亡，最终造成炎症性肠病的发病。因此本发明专利技术提供调高Setdb1基因表达的试剂、抑制Zbp1基因表达的试剂、抑制Mlkl基因表达的试剂及抑制Rip3基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用，从而为治疗炎症性肠病提供了一种新的思路和手段。

The application of setdb1 gene as a target in the treatment of inflammatory bowel disease

【技术实现步骤摘要】
Setdb1基因作为靶点在治疗炎症性肠病中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及Setdb1基因作为靶点在治疗炎症性肠病中的应用。
技术介绍
炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,IBD)有多种致病因素，包括遗传的和环境的。炎症性肠病主要分为克罗恩病和溃疡性结肠炎两类。克罗恩病和溃疡性结肠炎的主要区别在于炎症发生的位置和炎症本身的不同。克罗恩病可影响到消化系统的任何部分，从口腔至肛门都有可能发生跳跃性病变，多发于回肠末端。而溃疡性结肠炎发病仅限于结肠和直肠部分。微观上，溃疡性结肠炎发病仅限于黏膜(肠的上皮组织)，而克罗恩病影响到整个肠内壁。虽然炎症性肠病有不同的形式，但是它们都有一些共同的症状：腹痛、呕吐、腹泻、血便或体重减轻等一些相关的疾病，如关节炎，坏疽性脓皮病，原发性硬化性胆管炎，口腔复发性溃疡等。通常根据临床表现，结合血液检查、粪便检查、结肠镜和活体组织切片等来诊断。治疗炎症性肠病常用氨基水杨酸制剂，如柳氮磺胺吡啶、美沙拉嗪等。根据不同的严重程度，通常用免疫抑制剂来缓解症状，如强的松、硫唑嘌呤、甲胺蝶呤、6-巯嘌呤等。类固醇的药物也被常用来控制病情的突发，曾被作为维持药剂。近年来，生物疗法也被用来治疗炎症性肠病。对于药物治疗无效或者出现了严重的并发症的患者需要进行手术治疗，如肠切除、狭隘成形术或暂时性或永久性结肠造口术或回肠造口术。另外还有不同形式的替代性医学治疗炎症性肠病。尽管如此，寻求控制根本的病理以避免长期服用类固醇药物产生的副作用以及手术切除，仍是目前医学界积极探索追求的方向。
技术实现思路
在本专利技术中，专利技术人通过小鼠动物实验证明，没有SETDB1蛋白的表观遗传保护的话，会导致基因组不稳定并引起病变，具体地说，肠道干细胞中的类病毒调动先天免疫反应并启动ZBP1驱动的细胞程序性死亡，最终造成了细胞死亡与炎症反应的恶性循环，而这又造成了炎症性肠病的发病。因此，筛选靶向作用于SETDB1、ZBP1以及细胞程序性死亡相关基因/蛋白并因此可以干扰胞质核酸(病毒类似物)造成不稳定基因组的化合物有助于治疗IBD。本专利技术的第一目的在于提供调高Setdb1基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。本专利技术的第二目的在于提供抑制Zbp1基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。本专利技术的第三目的在于提供抑制Mlkl基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。本专利技术的第四目的在于提供抑制Rip3基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。本专利技术的第五目的在于提供抑制Rip3基因表达的试剂和抑制Mlkl基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。本专利技术是这样实现的：调高Setdb1基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。抑制Zbp1基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。抑制Mlkl基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。抑制Rip3基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。进一步地，所述抑制Rip3基因表达的试剂为无机物类抑制剂、小分子有机物类抑制剂以及核酸和蛋白质类抑制剂中的一种或多种。进一步地，所述无机物类抑制剂包括金属离子的氯化物、氟化物和磷酸盐。进一步地，所述小分子有机物类抑制剂包括氨基苯并噻唑类抑制剂、二芳基马来酰亚胺类抑制剂、二芳基脲类抑制剂、喹唑啉类抑制剂、异喹啉磺酰胺类抑制剂、吡啶并咪唑类抑制剂和十字孢碱类抑制剂。优选地，所述氨基苯并噻唑类抑制剂为GSK'872。GSK'872的分子结构式如下：抑制Rip3基因表达的试剂和抑制Mlkl基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。本专利技术通过翔实、严谨的实验证明了Setdb1基因是炎症性肠病的生物靶点，其低表达或不表达与炎症性肠病具明确的因果关系，且证明抑制Zbp1、Mlkl、Rip3以及同时抑制Mlkl和Rip3可改善或治愈因Setdb1基因低表达或不表达导致的炎症性肠病，从而为治疗炎症性肠病提供了一种新的思路和手段。附图说明图1为实施例1中关于SETDB1在正常(n＝32)和IBD病人(n＝36)中的相对表达水平对比图，数据来源于数据库GSE112366。图2为实施例1中关于SETDB1蛋白在正常肠道组织和活检的IBD病人样品中的相对表达水平对比图。左边为电泳图，n＝4，GAPDH为western内参；右边为相应的蛋白相对表达水平统计图，**P≤0.01。图3为实施例1中关于SETDB1在人正常回肠和结肠组织中的染色示意图。左右两个图中，上面的两个箭头标示肠绒毛细胞，下面的两个箭头标示肠道干细胞，中间的两个箭头标示间质细胞。图4为实施例1中关于SETDB1在正常人(n＝17)和IBD(n＝30)病人手术样品中的染色强度统计，数据来源于图5。图5为实施例1中关于SETDB1在非IBD病人和IBD病人肠组织手术样品中的染色示意图。左上角的黑框标示放大的隐窝，右上标示病人的序列号。图6A为实施例1中关于SETDB1在非IBD病人肠道手术样品中的染色示意图。图6B为实施例1中关于SETDB1在IBD病人肠道组织切片样品中的染色示意图。图7为实施例2中关于SETDB1在他莫昔芬诱导后的小鼠肠道组织切片中的染色示意图。黑框内为放大的隐窝示意图，n＝3。图8为实施例2中8dpi的小鼠肠镜示意图，n＝2。图9为实施例2中Setdb1敲除小鼠肠道苏木精-伊红染色示意图，左上角黑框标示放大的隐窝，黑框中的箭头标示死亡的细胞。右边部分为肠绒毛和隐窝相对长度统计图。图10为实施例3中关于在4种基因型的小鼠回肠组织中每个隐窝中的TUNEL信号个数统计图，n＝3。图11为实施例3中关于在4种基因型的小鼠回肠中每个隐窝中的TUNEL染色示意图。n＝3。图12为实施例3中关于在4种基因型的小鼠肠道中的各类免疫细胞个数统计图，Gr-1：中性粒细胞；F4/80：巨噬细胞；CD45和CD3：T细胞；B220，B细胞。n＝3。数据来源于图13。*P≤0.05；**P≤0.01；***P≤0.001。图13A、图13B、图13C、图13D为实施例3中关于免疫细胞在4种基因型的肠道缺失SETDB1的小鼠肠道组织切片中的染色示意图。图14为实施例3中用不同药物处理对Setdb1iIEC-KO小鼠肠道隐窝起源的类器官的细胞死亡的影响效果图。EtOH：酒精刺激对照组；4-OHT：诱导敲除Setdb1实验组；TnfαAb+4-OHT：肿瘤坏死因子中和抗体治疗实验组；Nec-1+4-OHT：RIPK1激酶抑制剂治疗实验组；GSK‘872+4-OHT：RIPK3激酶抑制剂治疗实验组。右边为统计图，Rel.PI.area.per.org,每个类器官的相对PI染色面积，n＝3。比列尺：50μm本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.调高Setdb1基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.调高Setdb1基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。


2.抑制Zbp1基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。


3.抑制Mlkl基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。


4.抑制Rip3基因表达的试剂在制备用于治疗炎症性肠病的药物中的应用。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述抑制Rip3基因表达的试剂为无机物类抑制剂、小分子有机物类抑制剂以及核酸和蛋白质类抑制剂中的一种或多种。


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【专利技术属性】
技术研发人员：莫玮，韩家淮，王瑞聪，李洪达，吴剑锋，蔡治煜，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35