用于治疗癌症和眼疾病的白蛋白纳米粒制造技术

本发明专利技术涉及用作药物的包含芯的纳米粒，所述芯包含非交联白蛋白基质和单克隆抗体，所述芯任选地涂覆有非离子聚合物；涉及包含所述纳米粒的药物组合物，以及其在治疗癌症和眼疾病中的用途。

Albumin nanoparticles for cancer and eye diseases

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗癌症和眼疾病的白蛋白纳米粒
本专利技术涉及纳米尺寸的药物递送系统，并且更具体地涉及包含白蛋白基质和单克隆抗体的纳米粒，其用于治疗癌症和眼疾病。
技术介绍
单克隆抗体已经成为一组感兴趣的糖蛋白，其用于不同的治疗领域，例如癌症、自身免疫性和慢性炎性疾病以及移植排斥的治疗。目前，有约30种单克隆抗体得到监管机构(FDA&EMEA)的批准。这些单克隆抗体之一是贝伐单抗，其是靶向VEGF-A(血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor))的免疫球蛋白G(immunoglobulinG，IgG)，并且包含VEGF的四种主要同工型。其于2004年被FDA批准用于转移性结直肠癌的一线治疗，并且之后也被批准用于其他癌症，例如非小细胞肺癌或转移性乳腺癌。最近，贝伐单抗已经开始用于治疗眼疾病，包括角膜或视网膜新生血管形成(neovascularization)、糖尿病视网膜病变和衰老有关黄斑变性。表面施加于眼的表面是用于药物施用的常见途径。但是，保护性机制(溜走(slinking)、流泪和引流)会通过迅速去除制剂而降低药物的生物利用度。在过去的几年中，玻璃体内注射贝伐单抗已经被发现是用于湿法治疗衰老有关黄斑变性、增生性糖尿病视网膜病变和脉络膜新生血管形成的非常有效的方法。短期结果表明，玻璃体内贝伐单抗耐受良好，并且与大多数患者中的视觉敏锐度改善、视网膜厚度降低和血管造影渗漏降低有关。但是，为了实现并维持视力的改善，需要重复注射和随访。这带来了并发症(例如眼内炎)的高风险，以及与将针头插入眼中相关的重复疼痛、恐惧和忧虑。此外，玻璃体内注射贝伐单抗的半衰期仅为约3天。在癌症治疗的情况下，目前的治疗策略通常涉及侵入过程，包括应用导管进行化学治疗以缩小肿瘤，然后再通过手术将其切除。为改善癌症治疗效果而进行的研究努力已经大大改善了患者生存，但是，与毒副作用和患者中的差生活质量相关的问题仍然是主要问题。因此，需要开发有效的药物递送方法，以使贝伐单抗以及其他单克隆抗体递送对癌症和眼疾病的治疗具有较小的侵袭性和持久性。从这个意义上讲，纳米粒已经成为用于药物施用的合适载剂，并在眼科领域以及癌症治疗中取得了有希望的结果。有大量多种的材料可用于制备这样的纳米尺寸的递送系统。例如，已经将单克隆抗体贝伐单抗并入PLGA的纳米粒中用于衰老有关黄斑变性的治疗[Haoetal.，AmericanAssociationofPharmaceuticalScientists(AASP)AnnualMeetingandExposition，LosAngeles，California，2009年11月；Li，F.etal.，TheOpenOphthalmologyJournal，2012，6，54-58]，以及用于视网膜和脉络膜新生血管形成治疗[PanCKetal.，J.Ocul.Pharmacol.Ther.，2011，27(3)，219-224；Varshochian，R.etal.，EuropeanJournalofPharmaceuticalSciences，2013，50，341-352]。然而，天然生物聚合物优于合成材料。在该方面，由于人血清白蛋白具有生物相容性、可生物降解性、无毒和无免疫原性的事实，因此其已被广泛用于制备用于药物递送的纳米粒。由于白蛋白纳米粒与多种药物的高结合能力和良好的耐受性而没有任何严重的副作用，因此其引起了相当大的关注。在过去的几年里，已经提出了大量多种用于制备白蛋白纳米粒的物理化学方法，包括热凝胶化、乳化和去溶剂化(凝聚)。在任何情况下，基于去溶剂化的过程由于其简单性和可重复性而似乎是最受欢迎的。然而，刚刚获得的纳米粒是不稳定的，并且必须进行物理、化学或酶促稳定的补充步骤，以为了延长其在水性环境中的半衰期和/或防止蛋白质的大团聚体的形成。一般来说，白蛋白的交联是用于稳定白蛋白纳米粒的最流行的策略之一。Elzoghbyetal.[JournalofControlledRelease，2012，157，168-182]汇编了用于制备白蛋白纳米粒的不同方法及将其作为活性药物递送系统的用途。特别提及了关于纳米粒在水性介质中的不稳定性，这要求将其进行交联，其引用戊二醛作为本领域中使用的常见的化学交联剂。Lohcharoenkal，W.etal.[BioMedResearchInternational，2014]还提到白蛋白纳米粒的不稳定性，因为其如果不进行交联就会溶解或聚结以形成单独的相。Llabotetal.[19thInternationalSymposiumonMicroencapsulation，2013]介绍了与包封有贝伐单抗的Gantrez交联的白蛋白纳米粒，以及其在角膜血管形成中的用途。因此，交联稳定了白蛋白纳米粒并减少了酶促降解以及活性成分从纳米粒的递送。然而，尽管戊二醛对稳定纳米粒高度有效，但是其使用仍是有问题的，这主要是由于其毒性阻碍了将其用于体内递送的用途。因此，至关重要的是尽可能完全地去除交联剂。此外，戊二醛可影响生物大分子，更特别地蛋白质药物、抗体和肽在纳米粒中的稳定性，因为其与大分子中存在的官能团(例如伯胺残基)反应，从而导致大分子活性的重要丧失。为了解决这个重要缺点，已经提出了不同的策略来硬化或稳定刚形成的白蛋白纳米粒，而无需使用有毒试剂。其中，纳米粒的稳定化可通过热处理、高流体动力压力或与京尼平(genipin)或转谷氨酰胺酶的酶促交联来获得。表面涂层也已经用于稳定白蛋白纳米粒。例如，阳离子聚合物(例如聚赖氨酸或聚乙烯亚胺)已经用于涂覆牛血清白蛋白纳米粒以改善其稳定性[Wangetal.，Pharm.Res.，2008，25(12)，2896-2909]。WO2013/042125描述了并入贝伐单抗的戊二醛交联的牛血清白蛋白纳米球以及随后将所述纳米球包封在离子PLGA的覆盖物中的制备。WO2011/053803还涉及具有聚合物壳的纳米粒，所述聚合物壳包封用于治疗眼疾病的治疗剂(例如贝伐单抗)。鉴于以上所有，需要适当的递送系统以保持单克隆抗体的完整性和活性并控制其从纳米粒释放。
技术实现思路
本专利技术的作者已经发现，在白蛋白基质中包载单克隆抗体(例如贝伐单抗)提供了在水溶液中具有高稳定性的纳米粒，并且出乎意料地，所述纳米粒不需要通过其他手段进行交联或稳定，因此一旦将其递送，就允许维持3D结构以及抗体的生物活性。与此相比，并且如以下实验部分中所示，戊二醛的使用(在现有技术中使用的稳定白蛋白纳米粒的最常见的交联剂)使抗体失活，因此使得使用交联纳米粒用于包封这类活性成分变得不可行。作者还测试了用非离子聚合物(例如羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(hydroxypropylmethylcellulosephthalate，HPMC-P)和聚乙二醇35,000(polyethylenglycol35,000，PEG35)以及S-100)装饰的非交联纳米粒，并观察到抗体的完整性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于医学的纳米粒，其中所述纳米粒包含固体芯，所述固体芯包含非交联白蛋白基质和单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体分布在整个所述白蛋白基质中，所述固体芯任选地涂覆有非离子聚合物。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170621 EP 17382383.21.用于医学的纳米粒，其中所述纳米粒包含固体芯，所述固体芯包含非交联白蛋白基质和单克隆抗体，并且其中所述单克隆抗体分布在整个所述白蛋白基质中，所述固体芯任选地涂覆有非离子聚合物。


2.根据权利要求1所述应用的纳米粒，其中当所述固体芯被涂覆时，所述纳米粒不存在不是非离子聚合物的任何其他聚合物涂层。


3.根据权利要求1至2中任一项所述应用的纳米粒，其中所述单克隆抗体/白蛋白重量比为0.01至0.5。


4.根据权利要求1至3中任一项所述应用的纳米粒，其中所述非离子聚合物/白蛋白比为0.02至5(w/w)。


5.根据权利要求1至4中任一项所述应用的纳米粒，其中所述白蛋白是人血清白蛋白或牛血清白蛋白。


6.根据权利要求1至5中任一项所述应用的纳米粒，其中所述单克隆抗体选自：贝伐单抗、兰尼单抗、曲妥珠单抗、西妥昔单抗和利妥昔单抗。


7.根据权利要求1至6中任一项所述应用的纳米粒，其中所述非离子聚合物是选自以下的水溶性纤维素：羟乙基纤维素、羟基正丙基纤维素、羟基正丁基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和乙基羟乙基纤维素；淀粉；葡聚糖；聚乙烯吡咯烷酮，选自商品名为Eudagrit的化合物的聚酯；或聚亚烷基二醇。


8.根据权利要求1至7中任一项所述应用的纳米粒，其中所述纳米粒能够通过以下方法获得，所述方法包括：
a)制备白蛋白与单克隆抗体的水溶液；
b)将步骤a)的水溶液滴定至pH为4至5；
c)向步骤b)的水溶液添加去溶剂化剂以形成白蛋白-单克隆抗体纳米粒；
d)任选地，将步骤c)中形成的所述白蛋白-单克隆抗体纳米粒与非离子聚合物一起孵育；以及任选地
e)通过真空干燥、喷...

【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔·阿尔贝托·阿勒曼迪，卡罗琳娜·博伊罗，胡安·曼努埃尔·伊拉切加雷塔，胡安·曼努埃尔·拉博特，伊内斯·路易斯德雷迪苏维拉，伊万·佩纽埃拉斯桑切斯，杰马·金科塞斯费尔南德斯，
申请(专利权)人：纳瓦拉大学，国家科学和技术研究委员会，科尔多瓦国立大学，
类型：发明
国别省市：西班牙;ES