一种抗人心肌肌钙蛋白I的抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种新颖的包含cTnI抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与人cTnI蛋白具有很高的亲和力，可广泛应用于cTnI蛋白的检测领域。

An antibody against human cardiac troponin I and its application

【技术实现步骤摘要】
一种抗人心肌肌钙蛋白I的抗体及其应用
本专利技术涉及生物技术和医学
，尤其是涉及一种抗人心肌肌钙蛋白I的抗体及其应用。
技术介绍
20世纪80年代前，世界卫生组织(WHO)一直将心肌酶谱活性作为急性心肌梗死(AMI)的诊断标准之一。20世纪80年代末，科研人员发现，肌钙蛋白(troponin，Tn)的敏感性和特异性高于磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶和天冬氨酸氨基转移酶等生物标志物。心肌肌钙蛋白(cTnI)仅存于心肌，是心肌细胞的标志物，其异常改变可影响心脏的舒缩功能，并可用于诊断心肌坏死，判断心肌损伤等，成为心肌细胞损伤敏感性和特异性最强的标志物之一，是公认的快速诊断AMI和急性冠脉综合征(acutecoronarysyndromes，ACS)以及协助ACS危险分层和反映其预后的主要生化标志。正常人血液中cTnI含量一般低于0.3μg/L。当心肌细胞胞膜完整性因缺血或缺氧等受到破坏时，游离的cTnI可迅速透过细胞膜进入血流。因此，在发病初期快速、灵敏且准确的测定人血中的cTnI及其变化趋势对急性心肌梗死的诊断、急性冠状动脉综合征的危险分层、监测各种因素导致的心肌损伤等有着重要的临床意义。临床上用于检测cTnI水平的方法有酶联免疫吸附法(ELISA)，化学发光，胶体金等，不同方法都有各自的优缺点，但是都需要针对于cTnI的特异性单克隆抗体。现有的cTnI抗体由于活性低、亲和力差，无法很好地应用于cTnI蛋白的检测中，因此本领域对于有效且特异性结合检测cTnI并对其进行检测的抗体存在着强烈需求。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术涉及一种新颖的包含cTnI抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与cTnI具有KD≤8.06×10-8mol/L的亲和力；互补决定区CDR-VH1为G-X1-T-F-S-X2-Y-W-M-X3，其中，X1是A或F，X2是G、E或D，X3是Q或N；互补决定区CDR-VH2为Q-X1-R-N-X2-P-Y-D-F-X3-T-F-Y-S，其中，X1是I或L，X2是K、G或R，X3是D或E；互补决定区CDR-VH3为T-X1-H-F-X2-H，其中，X1是G或P，X2是L、V或I；互补决定区CDR-VL1为S-X1-S-L-F-X2-S-G-N-Q-X3-N-Y-L-A，其中，X1是N或Q，X2是N、Y或F，X3是R或K；互补决定区CDR-VL2为G-X1-S-T-X2-E-F，其中，X1是A或P，X2是R、K或N；互补决定区CDR-VL3为Q-X1-D-X2-T-S-X3-Y-T，其中，X1是T或S，X2是R或K，X3是P或A。一个重要优点在于，所述结合蛋白活性强，与人cTnI具有很高的亲和力。具体实施方式本专利技术可通过后续对于本专利技术一些实施方案描述以及其中所包括的实施例的详细内容而更容易被了解。在进一步叙述本专利技术之前，应明了本专利技术不会被局限于所述特定实施方案中，因为这些实施方案必然是多样的。亦应明了本说明书中所使用的用语仅是为了阐述特定实施方案，而非作为限制，因为本专利技术的范围将会被仅仅界定在所附的权利要求中。除非本文另有定义，连同本专利技术使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。此外，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本专利技术的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。为了本专利技术可以更容易地理解，选择的术语在下文定义。术语“氨基酸”表示天然存在或非天然存在的梭基α-氨基酸。术语“氨基酸”用在本申请中可以包括天然存在的氨基酸和非天然存在的氨基酸。天然存在的氨基酸包括丙氨酸(三字母密码：A1a，单字母密码：A)，精氨酸(Arg，R)，天冬酰胺(Asn，N)，天冬氨酸(Asp，D)，半胱氨酸(Cys，c)，谷氨酰胺(G1n，Q)，谷氨酸(G1u，E)，甘氨酸(G1y，G)，组氨酸(His，H)，异亮氨酸(I1e，I)，亮氨酸(Leu，L)，赖氨酸(Lys，K)，甲硫氨酸(Met，M)，苯丙氨酸(Phe，F)，脯氨酸(Pro，P)，丝氨酸(Ser，S)，苏氨酸(Thr，T)，色氨酸(Trp，W)，酪氨酸(Tyr，Y)，和缬氨酸(Va1，V)。非天然存在的氨基酸包括但不限于α-氨基己二酸，氨基丁酸，瓜氨酸，高瓜氨酸，高亮氨酸，高精氨酸，羟基脯氨酸，正亮氨酸，吡啶基丙氨酸，肌氨酸等等。术语“分离的结合蛋白”是这样的蛋白，其由于衍生起源或来源不与天然结合的组分结合，所述天然结合的组分在其天然状态下与其伴随；基本上不含来自相同物种的其他蛋白；由来自不同物种的细胞表达；或在自然界中不存在。因此，化学合成或在不同于其天然起源的细胞的细胞系统中合成的蛋白将是与其天然结合的组分“分离的”。还可以通过分离，使用本领域众所周知的蛋白纯化技术，使得蛋白基本上不含大然结合的组分。术语“包括抗原结合结构域的分离的结合蛋白”泛指包含CDR区的一切蛋白/蛋白片段。“抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体以及这些抗体的抗原化合物结合片段，包括Fab、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv、双特异抗体和抗体最小识别单位，以及这些抗体和片段的单链衍生物。抗体的类型可以选择IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD。此外，“抗体”此用语包括天然发生的抗体以及非天然发生的抗体，包括例如嵌合型(chimeric)、双功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗体，以及相关的合成异构形式(isoforms)。“抗体”此用语可和“免疫球蛋白”互换使用。抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基端结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。这些结构域通常是抗体的最可变的部分，并含有抗原结合位点。轻链或重链可变区由被三个称为“互补决定区”或“CDR”的高变区打断的构架区构成。抗体的构架区，即构成要件轻链和重链的组合的构架区，起到定位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与cTnI具有K

【技术特征摘要】
1.一种包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其特征在于，所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区，或与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与cTnI具有KD≤8.06×10-8mol/L的亲和力；
互补决定区CDR-VH1为G-X1-T-F-S-X2-Y-W-M-X3，其中，
X1是A或F，X2是G、E或D，X3是Q或N；
互补决定区CDR-VH2为Q-X1-R-N-X2-P-Y-D-F-X3-T-F-Y-S，其中，
X1是I或L，X2是K、G或R，X3是D或E；
互补决定区CDR-VH3为T-X1-H-F-X2-H，其中，
X1是G或P，X2是L、V或I；
互补决定区CDR-VL1为S-X1-S-L-F-X2-S-G-N-Q-X3-N-Y-L-A，其中，
X1是N或Q，X2是N、Y或F，X3是R或K；
互补决定区CDR-VL2为G-X1-S-T-X2-E-F，其中，
X1是A或P，X2是R、K或N；
互补决定区CDR-VL3为Q-X1-D-X2-T-S-X3-Y-T，其中，
X1是T或S，X2是R或K，X3是P或A。


2.根据权利要求1所述的结合蛋白，其特征在于，所述互补决定区CDR-VH1中，X1是F；
所述互补决定区CDR-VH2中，X3是E；
所述互补决定区CDR-VH3中，X1是G；
所述互补决定区CDR-VL1中，X1是Q；
所述互补决定区CDR-VL2中，X1是A；
所述互补决定区CDR-VL3中，X1是S；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是G，X3是Q；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是G，X3是N；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是E，X3是Q；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是E，X3是N；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是D，X3是Q；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是D，X3是N；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X1是I，X2是K；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X1是I，X2是G；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X1是I，X2是R；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X1是L，X2是K；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X1是L，X2是G；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH2中，X1是L，X2是R；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是L；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是V；
进一步地，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是I；
进一步地，所述互补决定区CDR-VL1中，X2是N，X3是R；
进一步地，所述互补决定区CDR-VL1中，X2是N，X3是K；
进一步地，所述互补决定区CDR-VL1中，X2是Y，X3是R；
进一步地，所述互补决定区CDR-VL1中...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔鹏，何志强，孟媛，钟冬梅，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44