一种抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体制造技术

本发明专利技术涉及一种新颖的包含cTnI抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述结合蛋白活性强，与人cTnI蛋白具有很高的亲和力，可广泛应用于cTnI蛋白的检测领域。

A recombinant antibody against human cardiac troponin I

【技术实现步骤摘要】
一种抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体
本专利技术涉及免疫
，具体而言，涉及一种抗人心肌肌钙蛋白I的重组抗体。
技术介绍
20世纪80年代前，世界卫生组织(WHO)一直将心肌酶谱活性作为急性心肌梗死(AMI)的诊断标准之一。20世纪80年代末，科研人员发现，肌钙蛋白(troponin，Tn)的敏感性和特异性高于磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶和天冬氨酸氨基转移酶等生物标志物。心肌肌钙蛋白I(cTnI)仅存于心肌，是心肌细胞的标志物，其异常改变可影响心脏的舒缩功能，并可用于诊断心肌坏死，判断心肌损伤等，成为心肌细胞损伤敏感性和特异性最强的标志物之一，是公认的快速诊断AMI和急性冠脉综合征(acutecoronarysyndromes，ACS)以及协助ACS危险分层和反映其预后的主要生化标志。正常人血液中cTnI含量一般低于0.3μg/L。当心肌细胞胞膜完整性因缺血或缺氧等受到破坏时，游离的cTnI可迅速透过细胞膜进入血流。因此，在发病初期快速、灵敏且准确的测定人血中的cTnI及其变化趋势对急性心肌梗死的诊断、急性冠状动脉综合征的危险分层、监测各种因素导致的心肌损伤等有着重要的临床意义。临床上用于检测cTnI水平的方法有酶联免疫吸附法(ELISA)，化学发光，胶体金等，不同方法都有各自的优缺点，但是都需要针对于cTnI的特异性单克隆抗体。现有的cTnI抗体由于活性低、亲和力差，无法很好地应用于cTnI蛋白的检测中，因此本领域对于有效且特异性结合检测cTnI并对其进行检测的抗体存在着强烈需求。
技术实现思路
本专利技术涉及一种新颖的包含cTnI抗原结合结构域的分离的结合蛋白，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区；或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与心肌肌钙蛋白I具有KD≤1.43×10-9的亲和力；互补决定区CDR-VH1为A-S-G-F-X1-F-X2-T-F-A-M-S，其中，X1是S或T，X2是I、S或L；互补决定区CDR-VH2为I-S-S-G-G-S-Y-T-X1-Y-P-D-X2-V-K-G，其中，X1是Y、A或F，X2是T或S；互补决定区CDR-VH3为A-R-R-X1-Y-G-X2-S-W-X3-S-Y，其中，X1是P或A，X2是E或D，X3是P或F；互补决定区CDR-VL1为K-S-S-Q-S-X1-L-N-S-N-N-Q-X2-N-Y-L-A，其中，X1是I或L，X2是R或K；互补决定区CDR-VL2为Y-F-A-S-X1-R-X2-S-G-V-P-D，其中，X1是S或T，X2是D或E；互补决定区CDR-VL3为Q-X1-H-X2-S-X3-P-L-T-F-G，其中，X1是N或Q，X2是F、Y或V，X3是I或L。一个重要优点在于，所述结合蛋白活性强，与人cTnI蛋白具有很高的亲和力。具体实施方式本专利技术可通过后续对于本专利技术一些实施方案描述以及其中所包括的实施例的详细内容而更容易被了解。在进一步叙述本专利技术之前，应明了本专利技术不会被局限于所述特定实施方案中，因为这些实施方案必然是多样的。亦应明了本说明书中所使用的用语仅是为了阐述特定实施方案，而非作为限制，因为本专利技术的范围将会被仅仅界定在所附的权利要求中。名词定义“包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白”泛指包含CDR区的一切蛋白/蛋白片段。“抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体以及这些抗体的抗原化合物结合片段，包括Fab、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv、双特异抗体和抗体最小识别单位，以及这些抗体和片段的单链衍生物。抗体的类型可以选择IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD。此外，“抗体”此用语包括天然发生的抗体以及非天然发生的抗体，包括例如嵌合型(chimeric)、双功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗体，以及相关的合成异构形式(isoforms)。“抗体”此用语可和“免疫球蛋白”互换使用。抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基端结构域。重链的可变结构域可以被称为“VH”。轻链的可变结构域可以被称为“VL”。这些结构域通常是抗体的最可变的部分，并含有抗原结合位点。轻链或重链可变区(VL或VH)由被三个称为“互补决定区”或“CDR”的高变区打断的构架区构成。构架区和CDR的范围已被精确定义，例如在Kabat(参见《免疫重要的蛋白质的序列》(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest)，E.Kabat等，美国卫生与人类服务部(U.S.DepartmentofHealthandHumanServices)，(1983))和Chothia中。抗体的构架区，即构成要件轻链和重链的组合的构架区，起到定位和对齐CDR的作用，所述CDR主要负责与抗原的结合。当在本文中使用时，“构架”或“FR”区意味着抗体可变结构域的排除被定义为CDR的那些区域之外的区域。每个抗体可变结构域构架可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域(FR1、FR2、FR3和FR4)。通常情况下，重链和轻链的可变区VL/VH可由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。当在本文中使用时，与多肽或核酸相关联的术语“纯化的”或“分离的”是指多肽或核酸不是处于其天然介质中或天然形式下。因此，术语“分离的”包括从其原始环境，例如如果它是天然存在的，从天然环境取出的多肽或核酸。例如，分离的多肽通常不含通常与其结合或通常与其混合或在溶液中的至少某些蛋白质或其他细胞组分。分离的多肽包括细胞裂解物中包含的天然生产的所述多肽，纯化或部分纯化形式的所述多肽，重组多肽，被细胞表达或分泌的所述多肽，以及在异源宿主细胞或培养物中的所述多肽。与核酸相关联，术语分离的或纯化的指示例如所述核酸不在其天然的基因组背景中(例如在载体中，作为表达盒，连接到启动子，或人工引入到异源宿主细胞中)。本专利技术的示例性实施方案本专利技术涉及一种包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区；或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与心肌肌钙蛋白I具有KD≤1.43×10-9的亲和力；互补决定区CDR-VH1为A-S-G-F-X1-F-X2-T-F-A-M-S，其中，X1是S或T，X2是I、S或L；互补决定区CDR-VH2为I-S-S-G-G-S-Y-T-X1-Y-P-D-X2-V-K-G，其中，X1是Y、A或F，X2是T或S；互补决定区CDR-VH3为A-R-R-X1-Y-G-X2-S-W-X3-S-Y，其中，X1是P或A，X本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其特征在于，其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与心肌肌钙蛋白I具有K

【技术特征摘要】
1.一种包含抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其特征在于，其中所述抗原结合结构域包括选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与心肌肌钙蛋白I具有KD≤1.43×10-9的亲和力；
互补决定区CDR-VH1为A-S-G-F-X1-F-X2-T-F-A-M-S，其中，
X1是S或T，X2是I、S或L；
互补决定区CDR-VH2为I-S-S-G-G-S-Y-T-X1-Y-P-D-X2-V-K-G，其中，
X1是Y、A或F，X2是T或S；
互补决定区CDR-VH3为A-R-R-X1-Y-G-X2-S-W-X3-S-Y，其中，
X1是P或A，X2是E或D，X3是P或F；
互补决定区CDR-VL1为K-S-S-Q-S-X1-L-N-S-N-N-Q-X2-N-Y-L-A，其中，
X1是I或L，X2是R或K；
互补决定区CDR-VL2为Y-F-A-S-X1-R-X2-S-G-V-P-D，其中，
X1是S或T，X2是D或E；
互补决定区CDR-VL3为Q-X1-H-X2-S-X3-P-L-T-F-G，其中，
X1是N或Q，X2是F、Y或V，X3是I或L；
优选的：
所述互补决定区CDR-VH1中，X1是T；
所述互补决定区CDR-VH2中，X1是F；
所述互补决定区CDR-VH3中，X1是P；
所述互补决定区CDR-VL1中，X2是K；
所述互补决定区CDR-VL2中，X1是T；
所述互补决定区CDR-VL3中，X2是Y；
优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是I；
优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是S；
优选的，所述互补决定区CDR-VH1中，X2是L；
优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是T；
优选的，所述互补决定区CDR-VH2中，X2是S；
优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是E，X3是P；
优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是E，X3是F；
优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是D，X3是P；
优选的，所述互补决定区CDR-VH3中，X2是D，X3是F；
优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X1是I；
优选的，所述互补决定区CDR-VL1中，X1是L；
优选的，所述互补决定区CDR-VL2中，X2是D；
优选的，所述互补决定区CDR-VL2中，X2是E；
优选的，所述互补决定区CDR-VL3中，X1是N，X3是I；
优选的，所述互补决定区CDR-VL3中，X1是N，X3是L；
优选的，所述互补决定区CDR-VL3中，X1是Q，X3是I；
优选的，所述互补决定区CDR-VL3中，X1是Q，X3是L；

【专利技术属性】
技术研发人员：崔鹏，何志强，孟媛，钟冬梅，韩日才，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44