抗mSEB蛋白抗体及其应用和包含其的试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，提供抗mSEB蛋白单克隆抗体及其应用，所述抗体包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含3个CDR区，其中所述重链CDR区氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1～3或7～9所示，所述轻链CDR区氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4～6或10～12所示。本发明专利技术的抗mSEB蛋白抗体能够与mSEB蛋白特异性结合，有效地检测出mSEB蛋白的含量，灵敏度高。

Anti mseb antibody and its application and kit

【技术实现步骤摘要】
抗mSEB蛋白抗体及其应用和包含其的试剂盒
本专利技术属于生物
，涉及一种单克隆抗体及其应用。
技术介绍
金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)是超抗原外毒素，通常由致病性金黄色葡萄球菌特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)产生。SE可通过促使多数T细胞释放大量细胞因子而产生生物学效应，引起毒素休克综合征等临床症状。目前SE有SEA、SEB、SEC、SED和SEE等9个血清型。SEB在金黄色葡萄球菌各菌株中氨基酸序列高度保守。研究证实，SEB具有比其他抗原更好的体液应答优势，制备的人SEB单克隆抗体可有效治疗金葡菌感染常见的毒性休克综合症。申请人参照相关研究文献构建获得了SEB三位点(L45R,Y89A,Y94A)突变体mSEB作为重组金黄色葡萄球菌疫苗抗原组分之一。经体内外实验证实：mSEB不再具有野生型SEB的毒性及超抗原活性，安全性良好；同时保留了良好的免疫原性及免疫保护性。采用重组mSEB蛋白作为免疫原，经免疫、筛选、鉴定后获得的针对mSEB多个活性表位的单克隆抗体，可应用于制备免疫防治金黄色葡萄球菌感染的特异治疗性抗体药物、检测重组金黄色葡萄球菌疫苗中mSEB抗原含量的检测试剂盒。目前尚未有特异性mSEB抗体存在。
技术实现思路
基于上述原因，本专利技术提供一种抗mSEB蛋白的抗体，能够有效检测样品如疫苗中的mSEB蛋白的含量，以解决上述问题。第一个方面，本专利技术提供抗mSEB蛋白的抗体，所述抗体包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含3个CDR区，其中：所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYTFTSYW(SEQIDNO:1)；所述重链CDR2区的氨基酸序列为FDPSDSYT(SEQIDNO:2)；所述重链CDR3区的氨基酸序列为TRSYYGRGGFDC(SEQIDNO:3)；或者所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYSVTSGYA(SEQIDNO:7)；所述重链CDR2区的氨基酸序列为ISYNGIT(SEQIDNO:8)；所述重链CDR3区的氨基酸序列为AREYRFDGYYYAMDY(SEQIDNO:9)；以及所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLLNSGNQKNY(SEQIDNO:4)；所述轻链CDR2区的氨基酸序列为GAS(SEQIDNO:5)；所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QNDHSYPPT(SEQIDNO:6)；或者所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLVHSNGNTY(SEQIDNO:10)；所述轻链CDR2区的氨基酸序列为KVS(SEQIDNO:11)；所述轻链CDR3区的氨基酸序列为SRTTHVPFT(SEQIDNO:12)。优选地，所述抗体包含重链和轻链，其中，所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYTFTSYW(SEQIDNO:1)；所述重链CDR2区的氨基酸序列为FDPSDSYT(SEQIDNO:2)；所述重链CDR3区的氨基酸序列为TRSYYGRGGFDC(SEQIDNO:3)；所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLLNSGNQKNY(SEQIDNO:4)；所述轻链CDR2区的氨基酸序列为GAS(SEQIDNO:5)；所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QNDHSYPPT(SEQIDNO:6)；或者所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYSVTSGYA(SEQIDNO:7)；所述重链CDR2区的氨基酸序列为ISYNGIT(SEQIDNO:8)；所述重链CDR3区的氨基酸序列为AREYRFDGYYYAMDY(SEQIDNO:9)；所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLVHSNGNTY(SEQIDNO:10)；所述轻链CDR2区的氨基酸序列为KVS(SEQIDNO:11)；所述轻链CDR3区的氨基酸序列为SRTTHVPFT(SEQIDNO:12)。进一步优选地，所述抗体为抗体3C7，其重链和轻链序列分别为：重链：VKLQESGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWINWVKQRPGQGLEWIGNFDPSDSYTNYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYFCTRSYYGRGGFDCWGQGTTVTVSS(SEQIDNO:13)；轻链：DVLMTQSPSSLSVSAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRLTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDHSYPPTFGGGTKLEI(SEQIDNO:14)；或者所述抗体为抗体4C7，其重链和轻链序列分别为：重链：GPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSVTSGYAWNWIRQFPGNKLEWMGYISYNGITGYNPSLKSRVSLTRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCAREYRFDGYYYAMDYWGQGTPVTVSS(SEQIDNO:15)；轻链：DIVMTQTTLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSRTTHVPFTFGSGTKLEIK(SEQIDNO:16)。优选地，所述抗体为IgG抗体。第二个方面，本专利技术提供一种检测mSEB蛋白含量的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术的抗体。优选地，所述抗体为抗体3C7和4C7。优选地，所述试剂盒还包括人IgG、洗液、底物显色液A(EDTA-Na、柠檬酸、甘油、TMB)、底物显色液B(醋酸钠、柠檬酸、30％H2O2)、终止液(2MH2SO4)和BSA。优选地，所述试剂盒还包括酶联板和封板膜。优选地，所述试剂盒还包括mSEB蛋白标准品。更优选地，所述抗体3C7为检测抗体，所述抗体4C7为包被抗体。第三个方面，本专利技术提供一种检测mSEB蛋白含量的方法，包括使用抗体3C7和抗体4C7，利用双抗体夹心法进行Elisa检测。优选地，所述方法包括：1)使用抗体4C7包被酶联板；2)将被测样品与抗体4C7反应；3)使用抗体3C7进行检测和显色反应，测定450nm下吸光值；4)利用mSEB蛋白标准品制备标准曲线，根据标准曲线计算被测样品中mSEB蛋白含量。优选地，所述方法检测的mSEB蛋白含量范围是0.046875～3μg/ml。第四个方面，提供本专利技术的抗mSEB蛋白抗体在检测mSEB蛋白含量中的应用。本专利技术中，所述mSEB蛋白的序列为：MESQPDPKPDELHKSSKFTGLMENMKVLYDDNHVSAINVKSIDQFRYFDLIYSIKDTKLGNYDNVRVEFKNKDLADKYKDKYVDVFGANAYYQCAFSKKTNDINSHQTDKRKTCMYGGVTEH本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗mSEB蛋白的抗体，所述抗体包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含3个CDR区，其中：/n所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYTFTSYW(SEQ ID NO:1)；/n所述重链CDR2区的氨基酸序列为FDPSDSYT(SEQ ID NO:2)；/n所述重链CDR3区的氨基酸序列为TRSYYGRGGFDC(SEQ ID NO:3)；或者/n所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYSVTSGYA(SEQ ID NO:7)；/n所述重链CDR2区的氨基酸序列为ISYNGIT(SEQ ID NO:8)；/n所述重链CDR3区的氨基酸序列为AREYRFDGYYYAMDY(SEQ ID NO:9)；以及/n所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLLNSGNQKNY(SEQ ID NO:4)；/n所述轻链CDR2区的氨基酸序列为GAS(SEQ ID NO:5)；/n所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QNDHSYPPT(SEQ ID NO:6)；或者/n所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLVHSNGNTY(SEQ ID NO:10)；/n所述轻链CDR2区的氨基酸序列为KVS(SEQ ID NO:11)；/n所述轻链CDR3区的氨基酸序列为SRTTHVPFT(SEQ ID NO:12)。/n...

【技术特征摘要】
1.抗mSEB蛋白的抗体，所述抗体包含重链和轻链，所述重链和轻链分别包含3个CDR区，其中：
所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYTFTSYW(SEQIDNO:1)；
所述重链CDR2区的氨基酸序列为FDPSDSYT(SEQIDNO:2)；
所述重链CDR3区的氨基酸序列为TRSYYGRGGFDC(SEQIDNO:3)；或者
所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYSVTSGYA(SEQIDNO:7)；
所述重链CDR2区的氨基酸序列为ISYNGIT(SEQIDNO:8)；
所述重链CDR3区的氨基酸序列为AREYRFDGYYYAMDY(SEQIDNO:9)；以及
所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLLNSGNQKNY(SEQIDNO:4)；
所述轻链CDR2区的氨基酸序列为GAS(SEQIDNO:5)；
所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QNDHSYPPT(SEQIDNO:6)；或者
所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLVHSNGNTY(SEQIDNO:10)；
所述轻链CDR2区的氨基酸序列为KVS(SEQIDNO:11)；
所述轻链CDR3区的氨基酸序列为SRTTHVPFT(SEQIDNO:12)。


2.根据权利要求1所述的抗体，所述抗体包含重链和轻链，其中，
所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYTFTSYW(SEQIDNO:1)；
所述重链CDR2区的氨基酸序列为FDPSDSYT(SEQIDNO:2)；
所述重链CDR3区的氨基酸序列为TRSYYGRGGFDC(SEQIDNO:3)；
所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLLNSGNQKNY(SEQIDNO:4)；
所述轻链CDR2区的氨基酸序列为GAS(SEQIDNO:5)；
所述轻链CDR3区的氨基酸序列为QNDHSYPPT(SEQIDNO:6)；或者
所述重链CDR1区的氨基酸序列为GYSVTSGYA(SEQIDNO:7)；
所述重链CDR2区的氨基酸序列为ISYNGIT(SEQIDNO:8)；
所述重链CDR3区的氨基酸序列为AREYRFDGYYYAMDY(SEQIDNO:9)；
所述轻链CDR1区的氨基酸序列为QSLVHSNGNTY(SEQIDNO:10)；
所述轻链CDR2区的氨基酸序列为KVS(SEQIDNO:11)；
所述轻链CDR3区的氨基酸序列为SRTTHVPFT(SEQIDNO:12)。


3.根据权利要求2所述的抗体，其中，所述抗体为抗体3C7，其重链和轻链序列分别为：
重链：
VKLQESGAELVRP...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾浩，邹全明，章金勇，罗萍，敬海明，李海波，夏鑫，曾妮，
申请(专利权)人：成都欧林生物科技股份有限公司，中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：四川;51