ROR1 CAR T-细胞制造技术

描述了一种嵌合抗原受体(CAR)及其用途，所述嵌合抗原受体包含与受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)选择性结合的抗原结合结构域。还描述了包含CAR的T细胞及其在癌症治疗中的用途。

Ror1 car T-cell

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】ROR1CART-细胞本专利技术涉及一种嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor,CAR)及其用途，所述嵌合抗原受体包含与受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ReceptorTyrosineKinaseLikeOrphanReceptor1,ROR1)选择性结合的抗原结合结构域。
技术介绍
受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)(也称为神经营养性酪氨酸激酶，受体相关1，NeurotrophicTyrosineKinase,Receptor-Related1,NTRKR1)是在胚胎形成过程中表达的癌胚抗原，但在正常成人组织中表达有限。但是，它在许多血液和实体恶性肿瘤中表达：慢性淋巴细胞白血病(ChronicLymphocyticLeukaemia,CLL)、急性淋巴细胞白血病(AcuteLymphoblasticLeukaemia,ALL)、套细胞白血病、毛细胞白血病、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、膀胱癌、卵巢癌、恶性胶质瘤、睾丸癌、子宫癌、肾上腺癌、乳腺癌、肺癌、黑素瘤、神经母细胞瘤、肉瘤、肾癌。此外，ROR1在癌症干细胞的子集上表达。最近，已经对T细胞进行了基因工程改造，以在其表面上表达称为嵌合抗原受体或CAR的人工T细胞受体。CAR是这样的蛋白质，其允许T细胞识别在靶肿瘤细胞上发现的特定的、预先选择的蛋白质或抗原。可以在实验室中培养和扩增CAR-T细胞，然后将其重新注入患者体内。通过工程化的T细胞受体的指导，CAR-T细胞可以识别并破坏以下癌细胞：所述癌细胞在其表面上展示特定抗原。2014年，第一个基于嵌合抗原受体T(chimericantigenreceptorT,CAR-T)细胞的免疫疗法，称为CTL019，获得了美国食品药品监督管理局的突破性药物称号，用于治疗复发性和屈光性急性淋巴细胞白血病(ALL)，并且已经开始用于CLL、淋巴瘤和骨髓瘤。尽管基于CD19的CAR-T细胞在早期临床试验中已显示出巨大的希望，但它们也靶向正常的B细胞克隆体，从而导致B细胞发育不良和长时间的低丙球蛋白血症，而ROR1则不会发生这种情况。此外，大多数CAR-T细胞靶向疾病特异性抗原，因此靶向的肿瘤范围有限，而ROR1能够靶向广泛范围的血液恶性肿瘤和实体恶性肿瘤。本专利技术人已经将ROR1鉴定为有吸引力的治疗靶标，并且产生了与ROR1特异性结合并且可以用于治疗上述癌症的CAR-T细胞。
技术实现思路
本专利技术的第一方面涉及一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含与受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)选择性结合的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域与包含氨基酸Gln-261的ROR1的表位结合。在第一实施方案中，所述抗原结合结构域包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3，其中LCDR1包含SEQIDNO：16中所示的氨基酸序列；LCDR2包含SEQIDNO：18中所示的氨基酸序列；和LCDR3包含SEQIDNO：20中所示的氨基酸序列，并且其中所述重链可变结构域包含重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3，其中HCDR1包含SEQIDNO：23中所示的氨基酸序列；HCDR2包含SEQIDNO：25中所示的氨基酸序列，和HCDR3包含SEQIDNO：57中所示的氨基酸序列，其中每个互补决定区的序列可以在最多两个氨基酸位置处与给定序列不同。此外，本专利技术涉及编码所公开的CAR的分离的核酸分子。本专利技术还涉及包含所公开的CAR的细胞，优选T细胞，以及制备这种细胞的方法。或者，所述细胞可以是NK细胞，γ-δT细胞或iPS细胞。本专利技术进一步涉及包含所公开的CAR的细胞在治疗受试者的癌症中的应用，其中将包含ROR1选择性CAR的细胞给药受试者以引起恶性细胞的选择性消耗。本专利技术的其他方面涉及治疗癌症的方法。详细说明术语除非另有说明，否则根据常规用法使用技术术语。分子生物学中常用术语的定义可以在BenjaminLewin,GenesV,OxfordUniversityPress出版,1994(ISBN0-19-854287-9)；Kendrew等,(eds.),TheEncyclopediaofMolecularBiology,BlackwellScienceLtd.出版,1994(ISBN0-632-02182-9)；和RobertA.Meyers(ed.),MolecularBiologyandBiotechnology:aComprehensiveDeskReference,VCHPublishers,Inc.出版,1995(ISBN1-56081-569-8)中找到。除非另有说明，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。给药：通过选择的途径将组合物给药受试者。给药可以是局部的或全身的。例如，如果选择的途径是静脉内，则通过将组合物引入受试者的静脉中来给药组合物。例如，可以通过口服和肠胃外途径(腹膜内地，静脉内地，皮下地，经皮地，肌内地)给药或经由(例如通过导管或支架)局部递送来给药。在一些实例中，对受试者给药对ROR1多肽特异的CAR。通常，医生将确定最适合单个受试者的实际剂量，并且该剂量将随特定患者的年龄、体重和响应而变化。剂量是足以减少或耗尽恶性细胞的数量的量。试剂：可用于达到目的或结果的任何物质或物质的任何组合；例如，可用于预防或治疗癌症的物质或物质的组合。试剂包括但不限于蛋白质、核酸分子、化合物、小分子、有机化合物、无机化合物或其他感兴趣的分子。试剂可以包括治疗剂(例如抗病毒剂)、诊断剂或药剂。在一些实施方案中，所述试剂是CAR或包含CAR的细胞。本领域技术人员将理解，特定的试剂对于获得不止一个结果可能是有用的。氨基酸取代：用不同的氨基酸替换肽中的一个氨基酸。扩增：一种增加核酸分子(例如RNA或DNA)拷贝数的技术。扩增的例子是聚合酶链反应，其中在允许引物与样本中的核酸模板杂交的条件下，使生物样本与一对寡核苷酸引物接触。引物在合适的条件下延长，与模板解离，然后重新退火，延长，和解离，以增大核酸的拷贝数。扩增的产物可以通过电泳、限制性核酸内切酶切割模式、寡核苷酸杂交或连接，和/或使用标准技术的核酸测序来表征。扩增的其他实例包括如美国专利第5,744,311号中所公开的链置换扩增；如美国专利第6,033,881号中所公开的无转录等温扩增；如PCT公开号为WO90/01069中所公开的修复链反应扩增；如欧洲专利公开号为EP-A-320308中所公开的连接酶链反应扩增；如美国专利第5,427,930号中所公开的缺口填充连接酶链反应扩增；和如美国专利第6,025,134号中所公开的NASBATMRNA无转录扩增。动物：活的多细胞脊椎动物生物体，种类包括，例如，哺乳动物和鸟类。术语哺乳动物包括人类和非人类哺乳动物。类似地，术语“受试者”包括人类和兽医学受试者。抗体：基本上由单个免疫球蛋白基因或若干免疫球蛋白基因编码的多肽或其抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含与受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)选择性结合的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域与包含氨基酸Gln-261的ROR1的表位结合。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170705 GB 1710836.61.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含与受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)选择性结合的抗原结合结构域，其中所述抗原结合结构域与包含氨基酸Gln-261的ROR1的表位结合。


2.根据权利要求1所述的CAR，其中，所述抗原结合结构域包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含轻链互补决定区(LCDR)1、LCDR2和LCDR3，其中LCDR1包含SEQIDNO：16中所示的氨基酸序列；LCDR2包含SEQIDNO：18中所示的氨基酸序列；和LCDR3包含SEQIDNO：20中所示的氨基酸序列，并且其中所述重链可变结构域包含重链互补决定区(HCDR)1、HCDR2和HCDR3，其中HCDR1包含SEQIDNO：23中所示的氨基酸序列；HCDR2包含SEQIDNO：25中所示的氨基酸序列，和HCDR3包含SEQIDNO：57中所示的氨基酸序列，其中每个互补决定区的序列可以在最多两个氨基酸位置处与给定序列不同。


3.根据权利要求2所述的CAR，其中，每个CDR的序列可以在一个氨基酸位置处与给定序列不同。


4.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，LCDR1包含SEQIDNO：16中所示的氨基酸序列；LCDR2包含SEQIDNO：18中所示的氨基酸序列；和LCDR3包含SEQIDNO：20中所示的氨基酸序列，并且其中HCDR1包含SEQIDNO：23中所示的氨基酸序列；HCDR2包含SEQIDNO：25中所示的氨基酸序列；和HCDR3包含SEQIDNO：57中所示的氨基酸序列。


5.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，HCDR3包含选自SEQIDNO：27、36、44和49中所示的任何序列的氨基酸序列。


6.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，所述抗原结合结构域具有轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含轻链框架区(LCFR)1、LCFR2、LCFR3和LCFR4，所述轻链框架区(LCFR)1包含如SEQIDNO：15、29、50和53之一所示的氨基酸序列，所述LCFR2包含如SEQIDNO：17、30、38和46之一所示的氨基酸序列，所述LCFR3包含如SEQIDNO：19、31、39、47和54之一所示的氨基酸序列，和所述LCFR4包含如SEQIDNO：21、32和40之一所示的氨基酸序列，其中每个框架区的序列可以在最多五个氨基酸位置处与给定序列不同。


7.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，所述抗原结合结构域具有轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含LCFR1、LCFR2、LCFR3和LCFR4，所述LCFR1包含如SEQIDNO：29、50和53之一所示的氨基酸序列，所述LCFR2包含如SEQIDNO：30、38和46之一所示的氨基酸序列，所述LCFR3包含如SEQIDNO：31、39、47和54之一所示的氨基酸序列，和所述LCFR4包含如SEQIDNO：32和40之一所示的氨基酸序列，其中每个框架区的序列可以在最多五个氨基酸位置处与给定序列不同。


8.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，所述抗原结合结构域具有重链可变结构域，所述重链可变结构域包含重链框架区(HCFR)1、HCFR2、HCFR3和HCFR4，所述重链框架区(HCFR)1包含如SEQIDNO：22、33、41和55之一所示的氨基酸序列，所述HCFR2包含如SEQIDNO：24、34、42和51之一所示的氨基酸序列，所述HCFR3包含如SEQIDNO：26、35、43、48、52和56之一所示的氨基酸序列，和所述HCFR4包含如SEQIDNO：28、37和45之一所示的氨基酸序列，其中每个框架区的序列可以在最多五个氨基酸位置处与给定序列不同。


9.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，所述抗原结合结构域可以具有重链可变结构域，所述重链可变结构域包含HCFR1、HCFR2、HCFR3和HCFR4，所述HCFR1包含如SEQIDNO：33、41和55之一所示的氨基酸序列，所述HCFR2包含如SEQIDNO：34、42和51之一所示的氨基酸序列，所述HCFR3包含如SEQIDNO：35、43、48、52和56之一所示的氨基酸序列，所述HCFR4包含如SEQIDNO：37和45之一所示的氨基酸序列，其中每个框架区的序列可以在最多五个氨基酸位置处与给定序列不同。


10.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，所述轻链可变结构域包含如SEQIDNO：3、4、5、6、7和8之一所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。


11.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，所述轻链可变结构域包含如SEQIDNO：4、5、6、7和8之一所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。


12.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，所述重链可变结构域包含如SEQIDNO：9、10、11、12、13和14之一所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。


13.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，所述重链可变结构域包含如SEQIDNO：10、11、12、13和14之一所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。


14.根据前述权利要求中任一项所述的CAR，其中，所述轻链可变结构域包含如SEQIDNO：4、5、6、7和8之一所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列；和
所述重链可变结构域包含如SEQIDNO：10、11、12、13和14之一所示的氨基酸序列，或与其具有至少90％同一性的序列。

【专利技术属性】
技术研发人员：阿米特·纳什瓦尼，萨蒂恩·戈希尔，马可·德拉佩鲁塔，
申请(专利权)人：UCL商业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB