注射用重组人特立帕肽中咪唑残留的分析方法技术

本发明专利技术提供了一种注射用重组人特立帕肽中咪唑残留的分析方法。该分析方法包括：采用C18色谱柱，以溶液a和溶液b的混合溶液为流动相对注射用重组人特立帕肽中的咪唑残留进行高效液相色谱分析；其中，溶液a为0.4～0.6mg/ml辛烷磺酸钠水溶液，溶液b为乙腈‑甲醇溶液，乙腈‑甲醇溶液中乙腈与甲醇的体积比为20:80‑60:40。该分析方法能够使咪唑残留的出峰时间、峰型、分离度均良好，并通过咪唑限量检测法验证该分析方法的专属性、检测限与定量限、线性、重复性、准确性及耐用性均良好，将其应用于PTH中咪唑残留分析中有助于实现对PTH生产工艺过程和产品质量安全的控制。

Analysis method of imidazole residue in recombinant human trypatide for injection

【技术实现步骤摘要】
注射用重组人特立帕肽中咪唑残留的分析方法
本专利技术涉及残留物分析领域，具体而言，涉及一种注射用重组人特立帕肽中咪唑残留的分析方法。
技术介绍
针对咪唑残留物的检测，现有技术有针对动物源食品(比如猪肉、猪肝等)中的硝基咪唑残留进行检测的报道。其检测原理是将动物组织样品经乙酸乙酯振荡提取、液液分配和固相萃取净化后，用液相色谱-串联质谱检测，外标法定量。也有针对水产品中左旋咪唑采用液相色谱-串联质谱法进行检测的报道，其检测原理是：在碱性条件下直接用乙酸乙酯提取样品中的左旋咪唑，酸性水溶液萃取，酸性条件下用阳离子交换柱净化。还有针对保鲜剂噻苯咪唑残留的薄层色谱检测方法。但针对生物制剂产品，如注射用重组人特立帕肽(PTH)，一种用于治疗骨质疏松症的药物，现有技术中却未见有针对此类产品的原液及原液的中间产品进行咪唑残留检测的报道，然而，对咪唑的限量进行控制以达到在生产工艺过程和产品质量安全的控制，是此类生物制剂产品开发所必不可少的质控步骤。因此，急需提供一种针对注射用重组人特立帕肽(PTH)及其它生物制剂类产品中咪唑残留进行分析的方法。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种注射用重组人特立帕肽中咪唑残留的分析方法，以解决现有技术中尚无对注射用重组人特立帕肽等生物制剂类产品中的咪唑残留进行分析的问题。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种注射用重组人特立帕肽中咪唑残留的分析方法，该分析方法包括：采用C18色谱柱，以溶液a和溶液b的混合溶液为流动相对注射用重组人特立帕肽中的咪唑残留进行高效液相色谱分析；其中，溶液a为0.4～0.6mg/ml辛烷磺酸钠水溶液，溶液b为乙腈-甲醇溶液，乙腈-甲醇溶液中乙腈与甲醇的体积比为20:80-60:40。进一步地，注射用重组人特立帕肽的进样量为10-30μL。进一步地，溶液a与溶液b的体积比为76：24～80:20。进一步地，色谱柱的柱温为33～37℃。进一步地，C18色谱柱的规格为4.6mm*250mm，5μm。进一步地，流动相的流速为0.9～1.1ml/min。进一步地，高效液相色谱分析是在209-211nm紫外波长下对咪唑残留进行检测。进一步地，辛烷磺酸钠水溶液的pH值为2.35±0.05。进一步地，采用磷酸调节辛烷磺酸钠水溶液的pH值。应用本专利技术的技术方案，采用C18色谱柱，并采用无机相和有机相混合形成的混合溶液作为流动相进行高效液相色谱分析，其中，无机相采用辛烷磺酸钠水溶液，而有机相采用乙腈与甲醇按照上述体积比混合而成的混合液，这样形成的流动相在分析过程中能够使咪唑残留的出峰时间、峰型、分离度均良好，并通过咪唑限量检测法对该分析方法的专属性、检测限与定量限、线性、重复性、准确性及耐用性进行了验证，且验证结果良好。应用于PTH中咪唑残留分析中有助于实现对PTH生产工艺过程和产品质量安全的控制。附图说明构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1示出了本申请一种在测试条件下的咪唑残留的高效液相色谱图；图2示出了本申请另一种在测试条件下的咪唑残留的高效液相色谱图；图3示出了本申请第三种在测试条件下的咪唑残留的高效液相色谱图；图4示出了本申请第四种在测试条件下的咪唑残留的高效液相色谱图；图5示出了本申请第五种在测试条件下的咪唑残留的高效液相色谱图；图6至图10示出了本申请在第四种测试条件其他条件不变时，采用不同浓度的辛烷磺酸钠水溶液的咪唑残留的高效液相色谱图，其中，图6至图10中辛烷磺酸钠水溶液浓度依次为；0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml和0.7mg/ml；图11至图13示出了本申请在第四种测试条件其他条件不变时，采用不同体积的进样量时的咪唑残留的高效液相色谱图，其中，图11至图13中进样量体积依次为；10μL、20μL和30μL；图14至图18示出了本申请在第四种测试条件其他条件不变时，采用不同体积比的溶液a与溶液b时的咪唑残留的高效液相色谱图，其中，图14至图18中溶液a与溶液b的体积比为75:25、76:24、78:22、80:20及81:19；图19至图23示出了本申请在第四种测试条件其他条件不变时，采用不同柱温的情况下的咪唑残留的高效液相色谱图，其中，图19至图23中柱温分别为：32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃及38℃；图24至图27示出了本申请在第四种测试条件其他条件不变时，采用不同流速的流动相情况下的咪唑残留的高效液相色谱图，其中，图24至图27中流动相的流速分别为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min及1.3ml/min；图28至图31示出了本申请在第四种测试条件其他条件不变时，采用不同pH的辛烷磺酸钠水溶液情况下的咪唑残留的高效液相色谱图，其中，图28至图31中辛烷磺酸钠水溶液的pH分别为：2.30、2.35、2.40及2.42；图32示出了本申请在第四种测试条件其他条件不变时，采用醋酸调整辛烷磺酸钠水溶液pH值后的咪唑残留的高效液相色谱图；图33示出了本申请在实施例1中的咪唑残留分析方法的专属性检测结果；图34示出了本申请在实施例1中的咪唑残留分析方法的检测限检测结果；图35示出了本申请在实施例1中的咪唑残留分析方法的定量限检测结果；以及图36示出了根据本专利技术的优选的实施例中不同浓度的咪唑与峰面积之间的线性关系示意图。具体实施方式需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本专利技术。如
技术介绍
中所提到的，现有技术中尚无对注射用重组人特立帕肽等生物制剂类产品中的咪唑残留进行分析的报道，为了弥补这一空白，本申请的专利技术人以注射用重组人特立帕肽为研究对象，深入研究和开发了针对此类生物制品中的咪唑残留的检测方法。具体如下：产品中咪唑含量较低，且咪唑易溶于水，在210nm左右紫外波长处有较大吸收，产品主成分(PTH)为小分子蛋白质。初期尝试采用现有文献中报道的针对一些无机物成分中的咪唑残留检验方法进行检测，但是，由于小分子蛋白质成分较为复杂，未能达到较好的峰型和参数要求，实验证明这些分析方法并不适用于生物制剂类产品中咪唑的检测，后通过开发新方法来实现咪唑残留的检测。咪唑较小分子蛋白洗脱时间短，大比例水的流动相可以缩短咪唑的洗脱时间，出峰时间较短，可以节省检验时间。柱温设置为35℃(温度太低，夏季不容易控制柱温，温度太高会加剧色谱柱填充物的流失)。因此，首先采用高效液相色谱法C18色谱(150mm)柱，波长210nm，水相为大比例的流动相(水-乙腈90:10)，常规流速1.0ml/min，进行初步方法摸索。经测试发现，如图1所示，咪唑峰的峰型较宽且不对称，不能达到使用要求。为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种注射用重组人特立帕肽中咪唑残留的分析方法，其特征在于，所述分析方法包括：/n采用C18色谱柱，以溶液a和溶液b的混合溶液为流动相对所述注射用重组人特立帕肽中的咪唑残留进行高效液相色谱分析；/n其中，所述溶液a为0.4～0.6mg/ml辛烷磺酸钠水溶液，所述溶液b为乙腈-甲醇溶液，所述乙腈-甲醇溶液中乙腈与甲醇的体积比为20:80-60:40。/n

【技术特征摘要】
1.一种注射用重组人特立帕肽中咪唑残留的分析方法，其特征在于，所述分析方法包括：
采用C18色谱柱，以溶液a和溶液b的混合溶液为流动相对所述注射用重组人特立帕肽中的咪唑残留进行高效液相色谱分析；
其中，所述溶液a为0.4～0.6mg/ml辛烷磺酸钠水溶液，所述溶液b为乙腈-甲醇溶液，所述乙腈-甲醇溶液中乙腈与甲醇的体积比为20:80-60:40。


2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述注射用重组人特立帕肽的进样量为10-30μL。


3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述溶液a与所述溶液b的体积比为76：24～80:20。


4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟盼，陶芳，郭玉芬，闻亚磊，刘娜，
申请(专利权)人：北京博康健基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11