一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法技术

本发明专利技术公开了一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法，本发明专利技术具体包括以下步骤：S1、对厚叶岩白菜外植体消毒处理，S2、然后对步骤S1消毒后的外植体愈伤组织在防褐化培养基中进行防褐化和内生菌污染培养，S3、增殖培养：将步骤S2诱导生成的不定芽切下，在增殖培养基中进行培养，20‑25天继代一次，S4、生根培养：将步骤S3增殖培养的组培苗切成单株接种于生根培养基培养，本发明专利技术涉及植物培养技术领域。该防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法，可实现通过在培养过程中添加交联聚维酮(PVPP)和特美汀，能够很好的缓解厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌的滋生，具有使用方便、效果好以及种苗品质高的优点。

A method to prevent explant browning and endophyte contamination of Pakchoi

【技术实现步骤摘要】
一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法
本专利技术涉及植物培养
，具体为一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法。
技术介绍
厚叶岩白菜为虎耳草科岩白菜属多年生草本植物，具有非常高观赏价值和药用价值，厚叶岩白菜含有岩白菜素、酚类、黄酮以及多糖类物质，岩白菜素是治疗呼吸道疾病的特效药。随着厚叶岩白菜药用价值的拓展和绿化观赏价值的提升，野生厚叶岩白菜植物资源被过度采挖利用，并且厚叶岩白菜种子萌发率低，根茎分株繁育速度慢，导致野生资源日益濒危枯竭，开展的组织培养可以在短期内繁育大量的优良植株，成为了厚叶岩白菜育种中最为有效的快速繁殖手段之一。植物组织培养而言，褐化是影响组培成功的关键难题，褐化是植物材料受伤后，体内释放的酚类物质被氧化成褐色的醌类物质的结果，植物组织培养而言，大量酚类化合物也是内生菌类移向这些部位。本专利技术利用在培养基中添加防褐剂交联聚维酮(PVPP)缓解厚叶岩白菜外植体褐化，以及加特美汀防止内生菌滋生相关方法未见报道。
技术实现思路
(一)解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法，解决了现有植物组织培养过程中易褐化和内生菌滋生的问题。(二)技术方案为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法，具体包括以下步骤：S1、外植体的选取和消毒：首先从室外生长的厚叶岩白菜中取完全张开健康的叶片，用流动自来水冲洗20min，转到超净工作台上再用75％酒精处理30s后再用无菌水冲洗干净，然后用6％NaClO次氯酸钠处理12min后用已无菌水冲洗3次，浸泡期间晃动4-6次，随后放置于已灭菌的滤纸晾干，切除已消毒叶片的首尾，在叶片主脉横切；S2、防褐化培养：然后对步骤S1消毒后的外植体愈伤组织在防褐化培养基中进行防褐化和内生菌污染培养，控制白天温度为28℃，夜间温度为25℃，光照强度为2000Lux，光照时间为16小时/天，培养时间为40天，培养处理后，可以有效缓解褐化和内生菌污染的现象，改善外植体整体的分化状态；S3、增殖培养：将步骤S2诱导生成的不定芽切下，在增殖培养基中进行培养，20-25天继代一次；S4、生根培养：将步骤S3增殖培养的组培苗切成单株接种于生根培养基培养。优选的，所述步骤S2中防褐化培养基为：1/2DKW基本培养基中分别加入防褐添加剂0.1-0.2g/L交联聚维酮、抑制内生菌污染剂200mg/L特美汀、30g/L蔗糖和5.0g/L琼脂粉。优选的，所述1/2DKW基本培养基的配方包括：1/2DKW、0.2-0.5mg/L的6-BA细胞分裂素、0.5mg/L的KT激动素、0.1mg/L的TDZ噻苯隆和0.1mg/L的GA3赤霉素。优选的，所述步骤S2中防褐化培养基的pH值为5.8，并且在121℃的温度下灭菌20min。优选的，所述步骤S3中增殖培养基的组成成分是由1/2MS、0.05mg/L的IBA吲哚乙酸、0.02mg/L的NAA萘乙酸、200mg/L特美汀、30.0g/L蔗糖和5.0g/L琼脂粉组成。优选的，所述步骤S4中生根培养基的组成成分是由1/2MS、0.5-1.0mg/L的IBA吲哚乙酸、200mg/L特美汀、30.0g/L蔗糖和5.0g/L琼脂粉组成。(三)有益效果本专利技术提供了一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法。与现有技术相比具备以下有益效果：该防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法，具体包括以下步骤：S1、外植体的选取和消毒：首先从室外生长的厚叶岩白菜中取完全张开健康的叶片，用流动自来水冲洗20min，转到超净工作台上再用75％酒精处理30s后再用无菌水冲洗干净，然后用6％NaClO次氯酸钠处理12min后用已无菌水冲洗3次，浸泡期间晃动4-6次，随后放置于已灭菌的滤纸晾干，切除已消毒叶片的首尾，在叶片主脉横切，S2、防褐化培养：然后对步骤S1消毒后的外植体愈伤组织在防褐化培养基中进行防褐化和内生菌污染培养，控制白天温度为28℃，夜间温度为25℃，光照强度为2000Lux，光照时间为16小时/天，培养时间为40天，培养处理后，可以有效缓解褐化和内生菌污染的现象，改善外植体整体的分化状态，S3、增殖培养：将步骤S2诱导生成的不定芽切下，在增殖培养基中进行培养，20-25天继代一次，S4、生根培养：将步骤S3增殖培养的组培苗切成单株接种于生根培养基培养，可实现通过在培养过程中添加交联聚维酮(PVPP)和特美汀，能够很好的缓解厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌的滋生，改善外植体整体的分化状态，具有使用方便、效果好以及种苗品质高的优点。附图说明图1为本专利技术的流程图；图2为本专利技术厚叶岩白菜叶片外植体诱导初褐化培养过程图；图3为本专利技术厚叶岩白菜叶片外植体诱导增殖培养图；图4为本专利技术厚叶岩白菜叶片外植体诱导生根培养图；图5为本专利技术对照组采用普通培养基培养褐化和内生菌情况图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1-5，本专利技术实施例提供三种技术方案：一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法，具体包括以下实施例：实施例1S1、外植体的选取和消毒：首先从室外生长的厚叶岩白菜中取完全张开健康的叶片，用流动自来水冲洗20min，转到超净工作台上再用75％酒精处理30s后再用无菌水冲洗干净，然后用6％NaClO次氯酸钠处理12min后用已无菌水冲洗3次，浸泡期间晃动5次，随后放置于已灭菌的滤纸晾干，切除已消毒叶片的首尾，在叶片主脉横切；S2、防褐化培养：然后对步骤S1消毒后的外植体愈伤组织在防褐化培养基中进行防褐化和内生菌污染培养，控制白天温度为28℃，夜间温度为25℃，光照强度为2000Lux，光照时间为16小时/天，培养时间为40天，培养处理后，可以有效缓解褐化和内生菌污染的现象，改善外植体整体的分化状态，防褐化培养基为：1/2DKW基本培养基中分别加入防褐添加剂0.15g/L交联聚维酮、抑制内生菌污染剂200mg/L特美汀、30g/L蔗糖和5.0g/L琼脂粉，1/2DKW基本培养基的配方包括：1/2DKW、0.3mg/L的6-BA细胞分裂素、0.5mg/L的KT激动素、0.1mg/L的TDZ噻苯隆和0.1mg/L的GA3赤霉素，防褐化培养基的pH值为5.8，并且在121℃的温度下灭菌20min；S3、增殖培养：将步骤S2诱导生成的不定芽切下，在增殖培养基中进行培养，20-25天继代一次，增殖培养基的组成成分是由1/2MS、0.05mg/L的IBA吲哚乙酸、0.02mg/L的NAA萘乙酸、200mg/L特本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：/nS1、外植体的选取和消毒：首先从室外生长的厚叶岩白菜中取完全张开健康的叶片，用流动自来水冲洗20min，转到超净工作台上再用75％酒精处理30s后再用无菌水冲洗干净，然后用6％ NaClO次氯酸钠处理12min后用已无菌水冲洗3次，浸泡期间晃动4-6次，随后放置于已灭菌的滤纸晾干，切除已消毒叶片的首尾，在叶片主脉横切；/nS2、防褐化培养：然后对步骤S1消毒后的外植体愈伤组织在防褐化培养基中进行防褐化和内生菌污染培养，控制白天温度为28℃，夜间温度为25℃，光照强度为2000Lux，光照时间为16小时/天，培养时间为40天；/nS3、增殖培养：将步骤S2诱导生成的不定芽切下，在增殖培养基中进行培养，20-25天继代一次；/nS4、生根培养：将步骤S3增殖培养的组培苗切成单株接种于生根培养基培养。/n

【技术特征摘要】
1.一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
S1、外植体的选取和消毒：首先从室外生长的厚叶岩白菜中取完全张开健康的叶片，用流动自来水冲洗20min，转到超净工作台上再用75％酒精处理30s后再用无菌水冲洗干净，然后用6％NaClO次氯酸钠处理12min后用已无菌水冲洗3次，浸泡期间晃动4-6次，随后放置于已灭菌的滤纸晾干，切除已消毒叶片的首尾，在叶片主脉横切；
S2、防褐化培养：然后对步骤S1消毒后的外植体愈伤组织在防褐化培养基中进行防褐化和内生菌污染培养，控制白天温度为28℃，夜间温度为25℃，光照强度为2000Lux，光照时间为16小时/天，培养时间为40天；
S3、增殖培养：将步骤S2诱导生成的不定芽切下，在增殖培养基中进行培养，20-25天继代一次；
S4、生根培养：将步骤S3增殖培养的组培苗切成单株接种于生根培养基培养。


2.根据权利要求1所述的一种防止厚叶岩白菜外植体褐化和内生菌污染的方法，其特征在于：所述步骤S2中防褐化培养基为：1/2DKW基本培养基中分别加入防褐添加剂0.1-0.2g/L交联聚维酮、抑制内生菌污染剂200mg/L特美汀、30g/...

【专利技术属性】
技术研发人员：李艳艳，王俊青，李鹏，许英豪，杨风岭，邱德有，
申请(专利权)人：平顶山学院，
类型：发明
国别省市：河南;41