检测下咽癌lncRNA标志物的试剂在制备诊断下咽癌产品中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医学技术领域，具体涉及检测下咽癌lncRNA标志物的试剂在制备诊断下咽癌产品中的应用。所述lncRNA标志物为RP11‑156L14.1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述RP11‑156L14.1与人类下咽癌发生密切相关，在下咽癌组织中呈现高水平表达，正常组织中低表达，人为敲低lncRNA RP11‑156L14.1可抑制下咽癌细胞的细胞增殖，细胞周期，细胞迁移和侵袭，表明RP11‑156L14.1在下咽癌发生过程中，可以作为诊断下咽癌的新的分子标记和药物靶标。

The application of reagents for the detection of lncrna markers in the preparation and diagnosis of hypopharyngeal cancer products

【技术实现步骤摘要】
检测下咽癌lncRNA标志物的试剂在制备诊断下咽癌产品中的应用
本专利技术涉及生物医学
，具体涉及检测下咽癌lncRNA标志物的试剂在制备诊断下咽癌产品中的应用。
技术介绍
下咽癌是原发于下咽黏膜上皮的恶性肿瘤，好发于50-60岁男性，约占头颈部恶性肿瘤的1.4-5.0％，占全身恶性肿瘤的0.5％。下咽癌中95％以上为鳞状细胞癌，其中56％-71％的肿瘤细胞分化较差，易于黏膜下广泛扩散。下咽癌好发部位依次为：梨状窝区(70-80％)，下咽后壁区(5-22％)，环后区(3-12％)。由于下咽癌具有以下特性：位置隐蔽，早期多无特异性症状，各种临床症状出现相对较晚；局部呈侵袭性生长并沿黏膜下浸润；易发生颈部淋巴结转移和远处转移(就诊时50％-60％有颈淋巴结转移)，为临床诊疗带来一定难度，故预后较差。因此，通过较为准确、简便的方法检测相关指标，正确评估该恶性肿瘤生物学行为，有助于及时、合理采取综合治疗措施，有利于提高患者生存率。长链非编码RNA(Longnon-codingRNA，lncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA。研究表明，lncRNA在剂量补偿效应(Dosagecompensationeffect)、表观遗传调控、细胞周期调控和细胞分化调控等众多生命活动中发挥重要作用，成为遗传学研究热点。研究发现，lncRNA在多种肿瘤细胞中存在表达异常，寻找下咽癌lncRNA标志物、进一步了解lncRNA在下咽癌病变早期的生物学功能具有重要的意义。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供了检测下咽癌lncRNA标志物的试剂在制备诊断下咽癌产品中的应用，所述下咽癌lncRNA标志物为RP11-156L14.1，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。进一步的，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测RP11-156L14.1表达量时使用的PCR扩增引物。更进一步的，所述引物如SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。进一步步的，所述下咽癌是由人下咽癌细胞FaDu引起的。本专利技术还提供了所述下咽癌lncRNA标志物表达的试剂在制备预防或防治下咽癌的药物组合物中的应用。本专利技术还提供了RP11-156L14.1在制备预防或防治下咽鳞状细胞癌的药物组合物中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的长链非编码RNARP11-156L14.1与人类下咽癌发生密切相关，在下咽癌组织中呈现高水平表达，正常组织中低表达，人为敲低lncRNARP11-156L14.1可抑制下咽癌细胞中的细胞增殖，细胞周期，细胞迁移和侵袭，表明RP11-156L14.1在下咽癌发生过程中，可以作为诊断下咽癌的新的分子标记和药物靶标。附图说明图1为实施例1下咽癌组织与正常组织中RP11-156L14.1的差异表达。图2为实施例2结果图，其中，图2A为RP11-156L14.1过表达情况统计图，图2B为RP11-156L14.1沉默情况的统计图，图2C为MIT法检测RP11-156L14.1过表达细胞存活率结果，图2D为MIT法检测RP11-156L14.1沉默细胞存活率结果，图2E为沉默/过表达RP11-156L14.1对下咽癌细胞增殖的影响((1)为下咽癌细胞荧光图，(2)为细胞增殖抑制率统计图)，图2F为细胞克隆实验结果。图3A为实施例2过表达RP11-156L14.1对下咽癌细胞周期的影响统计图，图3B为实施例2沉默RP11-156L14.1对下咽癌细胞周期的影响统计图。图4为实施例3结果图，其中，图4A行为过表达RP11-156L14.1FaDu细胞的划痕实验结果((1)显微镜拍摄0h，48h两个时间段的划痕部位，(2)相对伤口闭合统计图)，图4B行为沉默RP11-156L14.1FaDu细胞的划痕实验结果((1)显微镜拍摄0h，48h两个时间段的划痕部位，(2)相对伤口闭合统计图),图4C行为transwell法检测过表达RP11-156L14.1FaDu细胞侵袭能力结果图((1)显微镜拍摄转染48h后FaDu细胞图，(2)迁移细胞统计，(3)侵入细胞统计)，图4D行为transwell法检测沉默RP11-156L14.1FaDu细胞侵袭能力结果图(((1)显微镜拍摄转染48h后FaDu细胞图片，(2)迁移细胞统计，(3)侵入细胞统计))，图4E为Westernblot检测结果。图5为实施例4结果图，其中，图5A为阴性对照和实验组荷瘤取材后体积对比图，图5B为阴性对照和实验组荷瘤取材体积比较的折线图，图5C为阴性对照和实验组荷瘤取材体积比较的柱形图，图5D为注射后14天时阴性对照和实验组荷瘤取材重量比较。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1RP11-156L14.1在下咽癌组织中的表达1.材料人下咽癌细胞FaDu，购自中国科学院上海细胞生物研究所，常规复苏后使用。组织来源2019年1月至2019年6月，我科收治下咽癌患者20例。患者均接受手术治疗，标本分别取自下咽组织及经过术后病理证实无癌侵犯的正常组织。新鲜标本手术切除后迅速保存于-80℃或者液氮中，待用。本实验经由我院医学伦理委员会批准，所有患者均被告知了用于科学研究中的内容，并签署了知情同意书。(1)引物设计与合成运用PrimerPremier5.0软件设计RP11-156L14.1和内参U6的PCR反应引物。PCR引物序列交由上海公司合成，引物信息见表1。表1序列信息(2)RT-PCR检测总RNA提取方法：采用经典Trizol提取法提取总RNA，参照Invitrogen公司Trizol试剂说明书进行操作。a.将-80℃保存的组织样品切取50mg左右，迅速将组织转移到预冷的研钵内，并不断加入液氮，研磨组织至粉末状。将1mLTrizol加入至研钵，保证样品完全溶解，室温静置，至透明状裂解液，再转移到DEPC水预处理过的离心管中，后需要室温放置5min，12000g4℃离心15min；b.如果提取细胞总RNA，就需要用4℃PBS洗涤培养皿中的细胞，再加入Trizol1ml，轻轻吹打，再室温静置，随后高速冷冻离心机离心，12000rpm，4℃离心5min，弃沉淀；c.随后200μl氯仿加入到含有上述液体的离心管中，轻柔颠倒混匀充分，放置5min，待分层后离心；e.4℃12000rpm离心15min，弃去下层有机相；f.加入500μl异丙醇/mlTrizol，上下颠倒混匀，室温放置10-20min；g.4℃，12000rpm转速离本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测下咽癌lncRNA标志物的试剂在制备诊断下咽癌产品中的应用，其特征在于，所述下咽癌lncRNA标志物为RP11-156L14.1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.检测下咽癌lncRNA标志物的试剂在制备诊断下咽癌产品中的应用，其特征在于，所述下咽癌lncRNA标志物为RP11-156L14.1，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测RP11-156L14.1表达量时使...

【专利技术属性】
技术研发人员：王正辉，闫静，任晓勇，许映龙，高天喜，闫妍，杨慧，
申请(专利权)人：西安交通大学医学院第二附属医院，
类型：发明
国别省市：陕西;61