一种淋巴瘤预后试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种淋巴瘤预后试剂盒。通过将活检取材的组织进行DNA抽提后，然后用本发明专利技术提供提供的淋巴瘤预后试剂盒，检测HOXC5基因，SRPRB基因，CELF2基因，PRR36基因甲基化的表达水平，进而判断成人T淋巴细胞的预后。本发明专利技术首次提供了一种针对成人T淋巴母细胞淋巴瘤的预后试剂盒，可以有效预测成人T淋巴母细胞淋巴瘤病人的预后，并可为适合骨髓移植的患者做出有指导意义的评价。

A prognosis kit for lymphoma

【技术实现步骤摘要】
一种淋巴瘤预后试剂盒
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种淋巴瘤预后试剂盒。
技术介绍
淋巴瘤是起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤，主要表现为无痛性淋巴结肿大，肝脾肿大，全身各组织器官均可受累，伴发热、盗汗、消瘦、瘙痒等全身症状。根据瘤细胞分为非霍奇金淋巴瘤(NHL)和霍奇金淋巴瘤(HL)两类。病理学特征在霍奇金淋巴瘤为瘤组织内含有淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、浆细胞和特异性的里-斯(Reed-Steinberg)细胞，HL按照病理类型分为结节性富含淋巴细胞型和经典型，后者包括淋巴细胞为主型、结节硬化型、混合细胞型和淋巴细胞消减型。NHL发病率远高于HL,是具有很强异质性的一组独立疾病的总和，病理上主要是分化程度不同的淋巴细胞、组织细胞或网状细胞，根据NHL的自然病程，可以归为三大临床类型，即高度侵袭性、侵袭性和惰性淋巴瘤。根据不同的淋巴细胞起源，可以分为B细胞、T细胞和NK细胞淋巴瘤。淋巴瘤临床表现多样，虽然可以有慢性、进行性、无痛性淋巴结肿大，但也可以表现为其他系统受累或全身症状。临床上怀疑淋巴瘤时，可以做淋巴结或其他受累组织或器官的病理切片检查(活检)以确诊。淋巴瘤的预后和病理、分期、病人的体能等因素有关，有些患者得了淋巴瘤以后，看上去非常虚弱，体能比较差，可能预后就比较差。还有一个因素就是病人的肿瘤负荷，以及治疗是否规范综合考虑。因此淋巴瘤的预后需参考患者年龄、体能状态、病情分期及病人治疗是否规范等因素判别，不能一概而论。一般而言，预后较好，早期淋巴瘤患者2年生存率可达70％左右，5年生存率可达50％以上。因此，淋巴瘤的预后评估及治疗同样重要，对人体的生命健康十分重要。而现有技术中并未发现良好的可以检测淋巴瘤预后效果的方法。因此，开发一种淋巴瘤预后试剂盒对人类健康至关重要。
技术实现思路
针对现有技术存在的缺点，本专利技术创造性的提供了一种淋巴瘤预后试剂盒。该试剂盒包含五种试剂，可以通过检测HOXC5基因，SRPRB基因，CELF2基因，PRR36基因甲基化的表达水平，进而判断成人T淋巴细胞的预后。本专利技术首次提供了一种针对成人T淋巴母细胞淋巴瘤的预后试剂盒，可以有效预测成人T淋巴母细胞淋巴瘤病人的预后，并可为适合骨髓移植的患者做出有指导意义的评价。为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种淋巴瘤预后试剂盒，包含五种试剂：检测HOXC5甲基化位点的序列，检测SRPRB甲基化位点的序列，检测CELF2甲基化位点的序列和检测PRR36甲基化位点的序列。优选地，五种试剂中甲基化序列信息分别为：HOXC5甲基化序列信息如SEQIDNO.1所示；SRPRB甲基化序列信息如SEQIDNO.2所示；CELF2甲基化序列信息如SEQIDNO.3所示；PRR36甲基化序列信息如SEQIDNO.4所示。AAGTGATAGTAGGAGTTATATA(SEQIDNO.1)；GATTTTAGGTTAGAGAAGATTT(SEQIDNO.2)；AATTAGAAATTAGTTGAGTGAA(SEQIDNO.3)；GAAAGGAATAGGAGGG(SEQIDNO.4)；优选地，扩增HOXC5甲基化序列的为引物HOXC5；扩增SRPRB甲基化序列的为引物SRPRB；扩增CELF2甲基化序列的为引物CELF2；扩增PRR36甲基化序列的为引物PRR36。优选地，引物HOXC的上游序列如SEQIDNO.5所示，下游引物序列如SEQIDNO.6所示；引物SRPRB的上游序列如SEQIDNO.7所示，下游引物序列如SEQIDNO.8所示；引物CELF2的上游序列如SEQIDNO.9所示，下游引物序列如SEQIDNO.10所示；引物PRR36的上游序列如SEQIDNO.11所示，下游引物序列如SEQIDNO.12所示。HOXC5-F：TATTTGGTTGGTGTAGTTGTTTATAGTAGG(SEQIDNO.5)；HOXC5-R：AAATTTCACCCAAATCCCAATCA(SEQIDNO.6)；SRPRB-F：TTGTTAGATTATTTTTGGAAGTGATAGTAG(SEQIDNO.7)；SRPRB-R：TAAAACTATTCCACCTCAAATCATCAA(SEQIDNO.8)；CELF2-F：AGGGATTTATAGTAGTGTTTTAAGGAAGA(SEQIDNO.9)；CELF2-R：TTCATAACCCTTACATTACAAACCTAAC(SEQIDNO.10)PRR36-F：GGGAATTTTAGGATGTAAGGTAGAT(SEQIDNO.11)；PRR36-R：CCCTACAAACCACTAAATCACCTCTCACA(SEQIDNO.12)；优选地，所述试剂盒还包括dNTP，酶混合物，底物混合物。优选地，所述酶混合物由DNAPolymerase，ATPsulfurylase，Luciferase和Apyrase按体积比1：1：1：1组成；所述底物混合物由APS和Luciferin按体积比1：1组成。与现有技术相比，本专利技术提供的淋巴瘤预后试剂盒，具有如下优点：(1)本专利技术提供的淋巴瘤预后试剂盒，可以同时检测HOXC5基因，SRPRB基因，CELF2及PRR36甲基化位点，且检测结果精确可靠；(2)本专利技术提供的淋巴瘤预后试剂盒，通过检测不同基因的甲基化位点，进一步评估淋巴瘤患者的预后情况，操作简单，且成本低，不会给患者带来痛苦；(3)本专利技术提供的淋巴瘤预后试剂盒，可以直接根据甲基化值判断淋巴瘤病人的预后效果，参考价值高，可以为适合骨髓移植的患者做出有指导意义的评价。附图说明图1为构建CpG标签各预后指标结果图；图2.为四个CpG位点的分布及临床价值示意图；图3为构建CpG标签的分布及临床价值示意图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步解释，但是应当注意的是，以下实施例仅用以解释本专利技术，而不能用来限制本专利技术，所有与本专利技术相同或相近的技术方案均在本专利技术的保护范围之内。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料为市售商品。实施例1DNA的制备1.石蜡标本中提取DNA将石蜡标本放置于1mlEP管中，使用梯度二甲苯和酒精进行脱蜡处理后，加入180ulATLbuffer和20ul蛋白水解酶，放入56℃水浴锅孵育过夜。待组织消化完毕，90℃金属浴1小时，使用200ulATLbuffer和200ul乙醇混匀，离心后将上清移至吸附柱内，13000rpm离心后，将离心柱内液体离心至收集管中，弃去收集管，将吸附柱放于新的收集管中，加入AW1buffer500ul1200rpm离心1min，后再加入AW2500ul离心1分钟，将吸附柱放于干净的1.5mlEP管中，加入100ulATEbuffer，置于70℃10分钟，130本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种淋巴瘤预后试剂盒，其特征在于，包含五种试剂：检测HOXC5甲基化位点的序列，检测SRPRB甲基化位点的序列，检测CELF2甲基化位点的序列和检测PRR36甲基化位点的序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种淋巴瘤预后试剂盒，其特征在于，包含五种试剂：检测HOXC5甲基化位点的序列，检测SRPRB甲基化位点的序列，检测CELF2甲基化位点的序列和检测PRR36甲基化位点的序列。


2.如权利要求1所述的淋巴瘤预后试剂盒，其特征在于，五种试剂中甲基化序列信息分别为：HOXC5甲基化序列信息如SEQIDNO.1所示；SRPRB甲基化序列信息如SEQIDNO.2所示；CELF2甲基化序列信息如SEQIDNO.3所示；PRR36甲基化序列信息如SEQIDNO.4所示。


3.如权利要求1所述的淋巴瘤预后试剂盒，其特征在于，扩增HOXC5甲基化序列的为引物HOXC5；扩增SRPRB甲基化序列的为引物SRPRB；扩增CELF2甲基化序列的为引物CELF2；扩增PRR36甲基化序列的为引物PRR36。


4.如权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡清清，谢丹，田小朋，
申请(专利权)人：蔡清清，
类型：发明
国别省市：广东;44