一种多粘类芽孢杆菌Lla-02及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多粘类芽孢杆菌Lla‑02(Paenibacillus polymyxa)，保藏号CGMCC NO.18753，保藏日期：2019年10月28日。所述多粘类芽孢杆菌Lla‑02对尖孢镰刀菌、灰霉葡孢、百合枯萎病菌、葡萄座腔菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌均具有抑菌活性。所述多粘类芽孢杆菌Lla‑02能够使‘穿梭’的株高、叶片长度和根长得到显著提高，使‘白天堂’的株高、鳞茎重和根长得到显著提高。

A polymyxobacilli, lla-02 and its application

【技术实现步骤摘要】
一种多粘类芽孢杆菌Lla-02及其应用
本专利技术涉及微生物领域，特别是涉及一种多粘类芽孢杆菌Lla-02及其应用。
技术介绍
多粘类芽孢杆菌在分类学上的地位是：厚壁菌门，芽孢杆菌科，类芽孢杆菌属(Paenibacillus)。类芽孢杆菌属的细菌在自然界中分布较广，它们是一类生理特性多样的杆状细菌，也是土壤与植物微生态的优势种群之一。在农业中的应用主要体现在两个方面：一是作为微生物肥料促进植物的生长和增产；二是作为生物农药防治植物多种病害。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种多粘类芽孢杆菌Lla-02及其应用。多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)对人畜无致病性，可产生多种抗菌蛋白、多粘菌素、核苷类、酚类以及吡嗪类化合物等抗菌物质以及IAA等植物生长调节剂，有很好的应用前景。本专利技术从百合鳞片中分离到一株内生多粘类芽孢杆菌，命名为Lla-02。以尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)、灰霉葡孢(Botrytiscinerea)、百合枯萎病菌(Fusariumproliferatum)、葡萄座腔菌(Botryosphaeriadothidea)、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌为指示菌，进行抑菌活性测定，Lla-02对所有测定的菌株都具有抑菌活性。一种多粘类芽孢杆菌Lla-02(Paenibacilluspolymyxa)，保藏号CGMCCNO.18753，保藏日期：2019年10月28日。本专利技术所述的多粘类芽孢杆菌Lla-02，其具有如下微生物学特性：菌落突出、呈水滴样、表面湿润、有光泽、半透明，菌落边缘整齐，菌体直径0.7μm，长2-4μm。本专利技术所述的多粘类芽孢杆菌Lla-02，其核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:1所示。本专利技术所述的多粘类芽孢杆菌Lla-02对尖孢镰刀菌、灰霉葡孢、百合枯萎病菌、葡萄座腔菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌均具有抑菌活性。本专利技术所述的多粘类芽孢杆菌Lla-02在促进‘穿梭’和‘白天堂’两个百合品种生长发育中以及在提高植物抗旱性能中的应用。本专利技术所述的应用，其中，所述多粘类芽孢杆菌Lla-02能够使‘穿梭’的株高、叶片长度和根长得到显著提高，所述多粘类芽孢杆菌Lla-02能够使‘白天堂’的株高、鳞茎重和根长得到显著提高。本专利技术多粘类芽孢杆菌Lla-02与现有技术不同之处在于：本专利技术通过研究发现多粘类芽孢杆菌Lla-02对对尖孢镰刀菌、灰霉葡孢、百合枯萎病菌、葡萄座腔菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌均具有抑菌活性。‘穿梭’、‘白天堂’两种商业百合都表现出生长促进作用，能够使‘穿梭’的株高、叶片长度和根长得到显著提高，能够使‘白天堂’的株高、鳞茎重和根长得到显著提高。植物的根长与植物的抗旱性能有密切关系，增加根长同时对于植物抗旱性能也有一定的作用。更重要的是，多粘类芽孢杆菌Lla-02处理显著增加了白天堂的球茎重量，因此，对于百合种球的生产具有增产的作用。下面结合附图对本专利技术的多粘类芽孢杆菌Lla-02及其应用作进一步说明。附图说明图1为本专利技术中多粘类芽孢杆菌Lla-02的菌落形态；图2为本专利技术中多粘类芽孢杆菌Lla-02电镜图片；图3为本专利技术中多粘类芽孢杆菌Lla-02的抑菌活性试验图；其中，A，尖孢镰刀菌；B，灰霉葡孢；C，百合枯萎病菌；D，葡萄座腔菌；E，大肠杆菌；F，金黄色葡萄球菌；G，沙门氏菌。具体实施方式1材料与方法1.1供试菌株指示菌株：尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)、灰霉葡孢(Botrytiscinerea)、百合枯萎病菌(Fusariumproliferatum)、葡萄座腔菌(Botryosphaeriadothidea)、大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，ATCC29213)、沙门氏菌(Salmonella)。1.2供试培养基LB培养基：胰蛋白胨(Tryptone)10g/L，酵母提取物(Yeastextract)5g/L，氯化钠(NaCl)10g/L。PDA培养基：马铃薯提取物4g，葡萄糖20g，琼脂粉15g，pH5.6。优化培养基：蔗糖，15％，硫酸镁，5％，蛋白胨，10％。1.3PCR引物采用细菌16SrDNA的通用引物：上游引物F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，下游引物R：5'-CGGTGTGTACSSGGCCCGGGAACG-3'，由上海生工生物工程技术有限公司合成。1.4方法1.4.1百合内生菌的分离筛选百合鳞片(百合为卷丹Liliumlancifolium)用流水冲洗干净，之后用75％乙醇处理1min，水洗1次，3％二氯异氰尿酸钠处理20min，水洗3-5次。最后一次洗涤的水作为阴性对照。百合鳞片表面切除，之后切成小块，放于LB培养基上，28℃培养两天，挑取单菌落进行纯化培养。1.4.2抗真菌菌活性的测定将指示菌在PDA培养基上活化4天，用微量移液器枪头尾部圆孔将该培养基戳下若干个“小圆片”；用枪尖将其挑起，将菌圆片接种在新鲜的PDA培养基中间，置于28℃恒温培养箱中培养2-3天，在培养皿底部画“十字”形分割线分为四个平均大小相同的区域，接着在距离菌圆片2-3cm的等距离的4个区域，接上25uL待测菌菌悬液。实验组和对照组各做三个重复，在28℃培养箱培养4～5天后观察拮抗效果。1.4.2抗细菌活性测定采用牛津杯法测定抗细菌活性：将指示菌涂布于LB固体培养基平板上，每个平板上打两个孔，一个点样30μL发酵液，一个点样30μL空白培养基。28℃培养24h后，测量抑菌圈直径，每组试验重复测3次。1.4.316SrDNA序列比对及系统发育分析提取细菌基因组DNA，采用细菌16SrDNA的通用引物进行扩增。扩增体系为rTaq酶(5U/μL)12.5μL，上游引物和下游引物(2.5μmol/L)各1μL，模板DNA2μL，最后加双蒸水至50μL，PCR反应条件：94℃变性5min，94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸1min，共30个循环，最后72℃延伸10min反应结束。PCR产物由上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。将16SrDNA序列与GenBank数据库中的核苷酸序列进行同源性分析(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/blast)，利用Mega软件进行比对及建树，重复次数为1000次。1.4.4发酵条件的优化及发酵液的制备将多粘类芽孢杆菌菌株Lla-02在LB培养基中30℃，180rpm，振荡培养18-24小时。1％转接到不同培养基中进行培养基的筛选优化，培养条件为30℃，180rpm，48小时。测定600nm的OD值，根据OD值选择最佳培养基。以优化培养基进行菌株本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多粘类芽孢杆菌Lla-02(Paenibacillus polymyxa)，保藏号CGMCC NO.18753，保藏日期：2019年10月28日。/n

【技术特征摘要】
1.一种多粘类芽孢杆菌Lla-02(Paenibacilluspolymyxa)，保藏号CGMCCNO.18753，保藏日期：2019年10月28日。


2.根据权利要求1所述的多粘类芽孢杆菌Lla-02，其特征在于：具有如下微生物学特性：菌落突出、呈水滴样、表面湿润、有光泽、半透明，菌落边缘整齐，菌体直径0.7μm，长2-4μm。


3.根据权利要求1所述的多粘类芽孢杆菌Lla-02，其特征在于：所述多粘类芽孢杆菌Lla-02的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:1所示。


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【专利技术属性】
技术研发人员：薛静，张秀海，车云林，陈绪清，刘敬振，杨凤萍，张国宁，张铭芳，杜运鹏，高俊莲，
申请(专利权)人：北京农业生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：北京;11