一种孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法技术

本发明专利技术的孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法。包括如下步骤：S1、取孕马血清，加偏磷酸溶液1调pH至3.0‑3.8，得偏磷酸/孕马血清混悬液；S2、将偏磷酸/孕马血清混悬液泵入板框压滤机中，板框压滤机装有经预处理的过滤纸板，固液分离后得到蛋白清液。步骤S2中过滤纸板的预处理包括以下步骤：将过滤纸板浸泡在0.05‑0.2％(m/v)的偏磷酸溶液2中50‑100min，沥干后装入板框压滤机。本发明专利技术采用板框压滤机代替传统的沉降式离心机，解决了孕马血清生产PMSG过程中“偏磷酸/孕马血清混悬液”大规模进行固液分离的瓶颈。具有劳动强度小、工作效率高、能量消耗少、PMSG收率和活性高等优点。

A solid-liquid separation method of suspension in the process of extracting crude gonadotropin from pregnant horse serum

【技术实现步骤摘要】
一种孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法
本专利技术属于孕马血清促性腺激素粗品生产
，具体涉及一种孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法。
技术介绍
孕马血清促性腺激素(简称PMSG)是孕中母马尿囊绒毛膜细胞分泌的糖蛋白类促性腺激素。PMSG具有类似促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)的双重活性，但以FSH的作用为主，具有明显的促卵泡发育作用；同时，也有一定的促排卵和黄体形成的功能，对雄性动物具有促使精细管发育和性细胞分化的功能。实践上，PMSG可以调控母畜同期发情，实现可控同步批次化生产，并缩短配种时间、降低不孕概率、提高繁殖效率。目前，PMSG已经广泛应用于动物的诱导发情、同期发情，超数排卵或增加排卵率；同时对卵巢发育不全或雄性生精能力衰退等也有良好的疗效。PMSG生产的原料为采自于怀孕40-120天的母马血清，经典的提取方法是：首先用偏磷酸(HPO3)与血清进行“偏磷酸-蛋白”反应，使血清中的杂蛋白沉淀，再进行固液分离得到清液；然后用乙醇与清液进行“乙醇-蛋白”分级，使血清中部分杂蛋白沉淀，再进行固液分离得到清液，最后用乙醇沉淀蛋白得到PMSG粗品。小规模的PMSG生产过程中，固液分离方法都是采用沉降式离心分离法。由于“偏磷酸-蛋白”反应的混悬液含固量高达9％以上，实践中，如果使用管式离心机分离，由于其转鼓体积小，容固量有限，对于含固量高的物料，生产操作过程中需要频繁卸料和清洗，工作效率低下；另外由于血浆蛋白形成的混悬液中颗粒的特殊性，碟式离心机也无法解决“偏磷酸-蛋白”反应形成的混悬液的固液分离问题，所得“清液”仍然很混浊。且随着集约化、规模化的高效畜牧业的发展，市场对PMSG的需求量大幅提升，孕马血浆的日加工能力需要从100kg上升到2000kg，传统的沉降式离心方法已经不能满足血浆提取中的固液分离，寻求大规模固液分离方法及设备成为必然。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术中PMSG制备过程中出现的问题，提供一种使用板框压滤机替代沉降离式离心机进行混悬液的大规模料液固液分离，解决了孕马血浆生产PMSG过程中进行固液分离的瓶颈，极大提高了工作效率、降低了能耗，同时节约了工艺时间，对保有PMSG的生物活性起到了积极的作用。本专利技术的以上目的通过以下技术方案来实现：一种孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法，包括如下步骤：S1、取孕马血清，加偏磷酸溶液1调pH至3.0-3.8，得偏磷酸/蛋白混悬液；S2、将偏磷酸/蛋白混悬液泵入板框压滤机中，板框压滤机装有经预处理的过滤纸板，固液分离后得到蛋白清液A；作为优选，步骤S2中过滤纸板的预处理包括以下步骤：将过滤纸板浸泡在偏磷酸溶液2中50-100min，沥干后装入板框压滤机。作为优选，所述偏磷酸溶液2的质量浓度为0.05-0.2％(m/v)。作为优选，步骤S1中所述偏磷酸溶液1的质量浓度为2-8％(m/v)。作为优选，加偏磷酸溶液1调pH至3.5。作为优选，板框压滤机在装入预处理的过滤纸板后，用偏磷酸溶液3循环清洗所述预处理的过滤纸板20-40min。作为优选，所述偏磷酸溶液3的质量浓度为0.03-0.06％(m/v)。作为优选，所述板框压滤机的过滤压力为0.05-0.12MPa。作为优选，所述过滤纸板的孔径为1-20μm。与现有技术相比，本专利技术的有益效果体现在：本专利技术采用板框压滤机代替传统的沉降式离心机，解决了孕马血清生产PMSG过程中“偏磷酸/蛋白混悬液”大规模进行固液分离的瓶颈，与离心法相比，具有劳动强度小、工作效率高、能量消耗少等优点。并通过对过滤滤材进行预处理，消除过滤纸板内在所带的电荷，从而减少对目标蛋白(PMSG)的吸附，有效提高PMSG粗品的生物活性和收率。附图说明图1为板框压滤机过滤示意图。其中，1、偏磷酸/蛋白混悬液储液罐，2、泵，3、板框压滤机，4、过滤纸板，5、蛋白清液A储液罐。具体实施方式在下文中，针对本专利技术的孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法描述一些实施方式，然而，这些实施方式是示例性的，本专利技术公开内容不限于此。且本文中所使用的附图，仅仅是为了更好地说明本专利技术所公开内容，对保护范围并不具有限制作用。在本专利技术的一些实施方式中，孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法包括以下步骤：S1、取孕马血清，加偏磷酸溶液1调pH至3.0-3.8，得偏磷酸/蛋白混悬液；S2、将偏磷酸/蛋白混悬液泵入板框压滤机中，板框压滤机装有经预处理的过滤纸板，固液分离后得到蛋白清液。孕马血清中含有许多蛋白质，其种类繁多，而PMSG在孕马血浆中的浓度很低，需要首先除去大量杂蛋白，进行浓缩富集PMSG。偏磷酸溶液中存在大量电荷高、分子量大的多聚体，能有效地中和掉蛋白质胶粒表面的电荷，破坏胶粒表面的水化膜，使蛋白质胶粒凝聚而沉淀，调pH至3.0-3.8之间，孕马血浆中的大部分杂蛋白沉淀，“偏磷酸-蛋白”反应后的混悬液含固量可以高达9％以上，如果涉及大规模化生产PMSG，采用沉降式离心机处理该混悬液的工作效率将会大大减低、成本大大增高。本专利技术采用板框压滤机处理“偏磷酸-蛋白”反应后的混悬液，利用板框压滤机过滤面积大、滤材通透性好、滤窒容固量多的特点，来替代普通沉降式离心机进行大规模料液的固液分离。且本专利技术板框压滤机中的过滤纸板在使用前需要预先进行处理：将市售的过滤纸板浸泡在偏磷酸溶液2中50-100min。过滤纸板经过偏磷酸溶液的浸泡处理，可以消除过滤纸板内在所带的电荷，从而减少对目标蛋白(PMSG)的吸附，使用偏磷酸处理的过滤纸板还能较高地保留PMSG的生物活性。如果直接使用市售未经处理的过滤纸板，最终PMSG粗品的收率和活性都会显著降低。浸泡过滤纸板的偏磷酸溶液2的质量浓度不宜太低或太高，浓度太低，处理过滤纸板效果不明显，太高的话会显著降低过滤纸板的pH，破坏过滤纸板纤维结构，偏磷酸溶液2的质量浓度选择为0.05-0.2％(m/v)。本专利技术采用含有特殊预处理过滤纸板的板框压滤机处理“偏磷酸-蛋白”反应后的混悬液，克服了离心分离方法以下缺点：一是剪切力对蛋白质的影响，高速离心所产生的剪切力会造成蛋白质立体结构的变化；二是产热对蛋白质的影响，高速离心过程中机器会产生热量，从而蛋白质受热变性；实际生产过程中，为降低高速离心产热，离心机需要搭配高性能压缩机组提供冷环境，以降低腔体内转子高速旋转产生的热量，压缩机所产生的能耗加上离心机本身的高耗电，离心过程所产生的能耗非常大；三是离心操作由于单台离心机容量有限，需要多台离心机同时开启，生产人员劳动强度大，安全风险高，并且在操作过程中，物料“滴、漏、洒”不可避免。因此本专利技术采用板框压滤机处理悬浮液，解决了孕马血浆生产PMSG过程中进行固液分离的瓶颈，极大提高了工作效率、降低了能耗，同时节约了工艺时间，对保有PMSG的生物活性起到了积极的作用，PMSG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1、取孕马血清，加偏磷酸溶液1调pH至3.0-3.8，得偏磷酸/蛋白混悬液；/nS2、将偏磷酸/蛋白混悬液泵入板框压滤机中，板框压滤机装有经预处理的过滤纸板，固液分离后得到蛋白清液。/n

【技术特征摘要】
1.一种孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、取孕马血清，加偏磷酸溶液1调pH至3.0-3.8，得偏磷酸/蛋白混悬液；
S2、将偏磷酸/蛋白混悬液泵入板框压滤机中，板框压滤机装有经预处理的过滤纸板，固液分离后得到蛋白清液。


2.根据权利要求1所述的孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法，其特征在于，步骤S2中过滤纸板的预处理包括以下步骤：将过滤纸板浸泡在偏磷酸溶液2中50-100min。


3.根据权利要求2所述的孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法，其特征在于，所述偏磷酸溶液2的质量浓度为0.05-0.2％(m/v)。


4.根据权利要求1所述的孕马血清促性腺激素粗品提取过程中悬浮液的固液分离方法，其特征在于，步骤S1中所述偏磷酸溶液1的质量浓度为2-8％(m/v)。

【专利技术属性】
技术研发人员：俞通泰，沙乐，龙昌伟，李浩光，
申请(专利权)人：甘肃天祁生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：甘肃;62