一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，包括如下步骤：制取间充质干细胞培养上清液，制备基底液，待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅拌，含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其面膜液包括：由按质量比计的0.1‑5％间充质干细胞培养上清液和95‑99.9％的基底液组成。本发明专利技术，将间充质干细胞培养上清液与抗糖化功效成分相结合，取得比仅使用间充质干细胞培养上清液或白藜芦醇、肌肽、硫辛酸等抗糖化功效成分更佳的皮肤改善效果，增加皮肤弹性、提亮肤色和光泽度、改善皮肤屏障功能、锁水保湿、并改善皱纹及皮肤纹理等，从内部细胞层面解决皮肤问题。

Anti saccharifying mask containing mesenchymal stem cell culture supernatant and preparation method thereof

【技术实现步骤摘要】
一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法
本专利技术涉及化妆品
，具体为一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法。
技术介绍
随着社会发展和人们生活水平的提高，人们对自身的保养护肤更加重视，尤其是女性，而目前市场上的化妆品品种繁多，功效差异较大，消费者难以分辨。一些精细化工护肤品为追求美白效果，添加铅汞等对对人体肌肤有害的物质，造成皮肤炎症及感染问题。另一方面，目前化妆品产品中含有生物活性物质较少，不能从根本上改善表皮细胞的生长状态及新陈代谢，对皮肤的修复作用有限。随着人的年纪增长，细胞活性减弱，使体内代谢机能变差，从而导致老化、糖化等种种现象。糖化主要是由于人体所摄食的多余糖分，会与体内的蛋白质结构结合，产生老化物质——糖化终产物(AGEs)，其会介入人体代谢，使蛋白结构交联，使肌肤难以修复，造成肌肤肤色发黄暗沉、松弛、皱纹增多，产生衰老的迹象。糖化还会导致泌油量大，毛孔粗大，产生痤疮、皮肤变得粗糙不光滑。抗糖化化妆品，主要使用白藜芦醇、肌肽、硫辛酸等具有抗氧化、美白功效的成分，达到改善肌肤糖化问题的效果。间充质干细胞是存在于机体的多种组织器官中，是一群具有多向分化潜能的多能干细胞，包括骨髓、脐带、脂肪等来源的间充质干细胞，具有取材方便、易扩增、低免疫源性等特点。现有研究表明间充质干细胞具有组织修复、免疫修复、调节免疫功能等作用，间充质干细胞可分泌多种生长因子，包括表皮生长因子EGF，碱性成纤维生长因子bFGF等。间充质干细胞培养上清液中含有上述生长因子，可显著促进真皮成纤维细胞的增殖，胶原蛋白和弹性蛋白的产生，在化妆品领域具有抗老化潜力。目前培养间充质干细胞，获取间充质干细胞培养上清的方法仍需改进，以满足大量稳定生产的需要。专利技术人发现现有技术提供的抗糖化产品，尚未有高效的含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜。基于此，本专利技术提供了一种优于现有抗糖化成分的抗糖化面膜，该抗糖化面膜具有良好的保湿效果，增加皮肤弹性，提高皮肤肤色和光泽度，能明显减少细纹，使皮肤细腻光滑，改善皮肤炎症等，其效果优于单纯添加脂肪间充质干细胞培养上清液或白藜芦醇、肌肽、硫辛酸等抗糖化成分的面膜，从而完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜及其制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，包括如下步骤：(1)制取间充质干细胞培养上清液：使用粘连蛋白对细胞培养容器进行预处理，预处理后将粘连蛋白吸走，然后将驯化后的P1-P30代间充质干细胞在培养容器进行铺板且在第二天换液，第三天开始收取培养上清，过0.22μm滤膜后备用；(2)制备基底液：将包括按质量比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、0.1-0.3％黄原胶和余量水的A组分高速混合器加热到80-85℃，进行高速混合搅拌,高速混合器冷却到40℃以下时投入包括按质量比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水的B组分高速混合搅拌，然后投入包括按质量比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；(3)待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅拌。优选的，所述间充质干细胞的驯化方法为以无血清培养基培养。优选的，所述含有间充质干细胞的组织来源于健康者的脐带、胎盘、脂肪、骨髓或牙髓。优选的，所述含有间充质干细胞的提取方法为用磷酸盐缓冲液洗去血细胞后，剪碎成大约1mm3的细小组织块后，加入2mL的1mg/mL的I型胶原酶消化液处理后，转移至15mL离心管中，37℃恒温摇床振荡消化30min，没有大的组织块后，加入等体积间充质干细胞完全培养基终止消化，1000rpm离心8min沉降细胞，弃去上清液及悬浮脂肪组织，加入脂肪间充质干细胞完全培养基，接种于细胞培养皿中，置于37℃的CO2培养箱中培养，48小时后首次换液，培养4-7天后，更换新的完全培养基再培养2-3天，达到80-90％融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养48小时，进行传代培养，即得可用无血清培养基培养的间充质干细胞。优选的，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.0-7.2。优选的，所述在培养容器进行铺板的间充质干细胞的密度大于1.8×104/cm2。优选的，所述使用粘连蛋白进行预处理的条件为在37℃处理1小时。优选的，所述粘连蛋白采用iMatrix-511粘连蛋白。一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜，其特征在于其面膜液包括：由按质量比计的0.1-5％间充质干细胞培养上清液和95-99.9％的基底液组成。优选的，所述基底液包括A组分、B组分、C组分：所述A组分包括按质量百分比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、0.1-0.3％黄原胶和余量水；所述B组分包括按质量百分比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水；所述C组分包括按质量百分比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1.本专利技术提供的面膜中，含有由间充质干细胞培养上清液和促进保持生物活性的基底液组成。通过合理的制备工艺与配方，面膜液中各组分相互作用、协调增效，实现良好的保湿效果，提高皮肤肤色，能明显减少细纹，使皮肤细腻光滑，改善皮肤炎症等。利用间充质干细胞培养上清液，产生出具有多种生长因子的活性物质，并通过特有的配方提供一种增加皮肤弹性、保湿锁水、抗炎亮肤效果，且安全无任何毒副作用的面膜及制备方法。2.本专利技术将间充质干细胞培养上清液与抗糖化功效成分相结合，取得比仅使用间充质干细胞培养上清液或白藜芦醇、肌肽、硫辛酸等抗糖化功效成分更佳的皮肤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于包括如下步骤：/n(1)制取间充质干细胞培养上清液：使用粘连蛋白对细胞培养容器进行预处理，预处理后将粘连蛋白吸走，然后将驯化后的P1-P30代间充质干细胞在培养容器进行铺板且在第二天换液，第三天开始收取培养上清，过0.22μm滤膜后备用；/n(2)制备基底液：将包括按质量比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、0.1-0.3％黄原胶和余量水的A组分经高速混合器加热到80-85℃，进行高速混合搅拌,高速混合器冷却到40℃以下时投入包括按质量比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水的B组分高速混合搅拌，然后投入包括按质量比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；/n(3)待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅拌。/n...

【技术特征摘要】
1.一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)制取间充质干细胞培养上清液：使用粘连蛋白对细胞培养容器进行预处理，预处理后将粘连蛋白吸走，然后将驯化后的P1-P30代间充质干细胞在培养容器进行铺板且在第二天换液，第三天开始收取培养上清，过0.22μm滤膜后备用；
(2)制备基底液：将包括按质量比计的1-10％甘油、1-4％丁二醇、1-5％1,2-戊二醇、0.1-5％双丙甘醇、0.5-5％双甘油、0.5-4％蔗糖、0.5-3％PCA钠、0.01-1％PEG-60氢化蓖麻油、0.1-0.3％黄原胶和余量水的A组分经高速混合器加热到80-85℃，进行高速混合搅拌,高速混合器冷却到40℃以下时投入包括按质量比计的0.1-0.5％柠檬酸、0.1-0.5％柠檬酸钠和余量水的B组分高速混合搅拌，然后投入包括按质量比计的0.1-0.5％苯氧乙醇、0.1-1％甜菜碱、0.1-1％羟乙基纤维素、0.0001-1％肌肽、0.0001-0.1％硫辛酸、0.0001-1％白藜芦醇、0.001-1％葡萄籽提取物、0.001-1％野大豆提取物、0.001-1％积雪草提取物、0.01-1％水解蚕丝、0.0001-1％寡肽-5、0.001-1％水解酵母提取物、0.001-0.3％日用香精和余量水的C组分进行高速混合搅拌；
(3)待高速混合器冷却到室温后，在步骤(2)的基底液中加入步骤(1)中的间充质干细胞培养上清液，进行高速混合搅拌。


2.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞的驯化方法为以无血清培养基培养。


3.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述含有间充质干细胞的组织来源于健康者的脐带、胎盘、脂肪、骨髓或牙髓。


4.根据权利要求1所述的一种含有间充质干细胞培养上清液的抗糖化面膜制备方法，其特征在于：所述含有间充质干细胞的提取方法为用磷酸盐缓冲液洗去血细胞后，剪碎成大约1mm3的细小组织块后，加入2mL的1mg/mL的I型胶原酶消化液处理后，转移至15mL离心管中，37℃恒温摇床振荡消化30min，没有大的组织块后，加入等体积间充质干细胞完全培养基终止消化，1000rpm离心8min沉降细胞，弃去上清液及悬浮脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：李慧芳，王悦朋，孙爽，
申请(专利权)人：盛世荣恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31