一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN）的方法技术

本发明专利技术涉及检测技术领域，特别涉及一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的定量检测方法。本方法用甲醇进行超声提取工业大麻花叶中的大麻酚（CBN)，用高效液相色谱仪（HPLC）对待测液进行检测。采用外标法定量得到花叶样品中大麻酚（CBN)的含量。本方法操作简单、分离效果好、稳定性好，使得大麻花叶中的大麻酚（CBN）得到快速准确的定量。

A method for determination of cannabinol (CBN) in industrial marijuana by HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN）的方法
本专利技术涉及检测
，特别涉及一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法。
技术介绍
工业大麻是指四氢大麻酚（THC）含量低于0.3%的大麻，是大麻科大麻属一年生草本植物，大麻中的主要活性成分是大麻素类化合物，主要的大麻酚类化合物有四氢大麻酚（THC）、大麻酚（CBN）、大麻二酚（CBD）、大麻萜酚（CBG）、大麻环萜酚（CBC）等，其中前三者约占大麻酚类化合物的90%以上。目前人们对大麻素的研究主要集中在四氢大麻酚和大麻二酚，对大麻酚(以下简称CBN)的研究较少。CBN为叶状结晶体，具有镇定、止咳、抗痉挛、安眠等作用，含量很少，精神活性是THC的1/10，是一个极具医疗用途的大麻素。现有技术中大部分关于大麻酚类化合物成分的检测都局限于THC和CBD的检测。CBN有较高的医用价值，故准确测定花叶原料中的CBN含量十分重要。但目前尚未有权威的CBN检测标准，因此开发一种能够准确测定工业大麻花叶中CBN含量的检测方法十分必要。
技术实现思路
本专利技术使用甲醇超声提取工业大麻花叶中的大麻酚（CBN），用高效液相色谱仪(HPLC)检测，外标法进行定量，能够准确、快速的检测工业大麻花叶中的大麻酚（CBN）含量。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供了一种工业大麻花叶中大麻酚（CBN）含量的测定方法，包括如下步骤：①样品的准备：将新鲜工业大麻花叶样品于烘箱中60℃下干燥，粉碎机粉碎，混匀待测。②样品的前处理：准确称取花叶样品于离心管中，加入有机溶剂，超声提取，离心收集上清液，残渣重复超声提取一次，离心，合并上清液，浓缩定容得到样品处理待测液。③标准工作溶液的配置：将购买的大麻酚（CBN）标准溶液用甲醇稀释至浓度范围为1μg/mL～100μg/mL的混合标准工作溶液，其浓度范围覆盖试样中待测组份的含量。④用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品进行测定，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测。高效液相色谱仪（HPLC）条件如下：流动相为乙腈（色谱纯）和水（去离子水），乙腈与水的比例为65%：35%，等度洗脱，流速为1mL/min；进样量为10uL；柱温为30℃；检测器检测波长为220nm。进一步的，步骤①中所述大麻花叶为9月采摘的成熟工业大麻的叶和花苞组合物。进一步的，步骤②中所述有机溶剂为色谱纯甲醇，甲醇所用体积量与花叶样品质量比为10:1；所述超声时间为20min，超声功率为250W，工作频率为40kHz；所述离心的转速为10000转/分钟，时间为5分钟。进一步的，步骤③中所述配制浓度范围为1μg/mL～100μg/mL的CBN系列标准工作溶液步骤为：①将购自美国Sigma公司的CBN标准物质（1mg/mL，共1mL）转移至10mL容量瓶中，用色谱级甲醇洗涤原瓶及滴管数次，并全部转移至容量瓶中（注意转移过程中不能洒出），定容，得CBN溶液浓度为100μg/mL。②用移液管分别吸取100μg/mL的CBN标准溶液2mL、1mL、1mL分别至5mL、5mL、10mL的容量瓶中用甲醇定容得到40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL的CBN标准溶液。③用移液管吸取40μg/mL的CBN标准溶液1mL至10mL的容量瓶中用甲醇定容得到4μg/mL的CBN标准溶液。④用移液管吸取10μg/mL的CBN标准溶液1mL至10mL的容量瓶中用甲醇定容得到1μg/mL的CBN标准溶液。进一步地，所述高效液相色谱仪品牌型号为安捷伦1260；流动相的乙腈为色谱纯，水为去离子水；色谱柱为AgilentZORBAXEclipsePlusC18；所述检测器为二极管阵列检测器(简称DAD检测器)。本专利技术的优点：①本专利技术建立了一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，能够对工业大麻中CBN化合物进行定性和定量分析，为大麻酚成分和含量的准确判定和快速检测提供科学依据。②本专利技术用甲醇进行超声提取大麻花叶中的CBN，实验操作简单，处理时间短，分离效果好，检测结果准确稳定。附图说明图1大麻酚（CBN）标准对照品色谱图。图2大麻酚（CBN）标准曲线。图3实施例1大麻花叶样品色谱图。具体实施方式以下实施例仅是对本专利技术予以解释说明，并未对本专利技术的保护范围进行任何限制。对于本领域技术人员而言，凡未脱离本专利技术技术精神所作的同等实施方式或变更均在本专利技术的保护范围之内。实施例1（1）样品的准备：将新鲜工业大麻花叶样品于60℃下干燥12小时（水分小于5%），粉碎机粉碎至20目，混匀待测。（2）样品的前处理：准确称取花叶样品1.0g于离心管中，加入10mL色谱纯甲醇，超声提取20分钟，然后用离心机10000转/分钟离心5分钟，转移上清液至浓缩瓶中，残渣用10mL甲醇重复超声提取一次，离心，合并上清液，用旋转蒸发仪（温度40℃）浓缩除去部分溶剂，浓缩液转移至10mL容量瓶中，甲醇定容，过0.22μm有机滤膜得到待测液。（3）标准工作溶液的配置：配制1μg/mL、4μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、100μg/mL的CBN系列对照品溶液，步骤如下：①将购自美国Sigma公司的CBN标准物质（1mg/mL，共1mL）转移至10mL容量瓶中，用色谱级甲醇洗涤原瓶及滴管数次，并全部转移至容量瓶中（注意转移过程中不能洒出），定容，得CBN溶液浓度为100μg/mL。②用移液管分别吸取100μg/mL的CBN标准溶液2mL、1mL、1mL分别至5mL、5mL、10mL的容量瓶中用甲醇定容得到40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL的CBN标准溶液。③用移液管吸取40μg/mL的CBN标准溶液1mL至10mL的容量瓶中用甲醇定容得到4μg/mL的CBN标准溶液。④用移液管吸取10μg/mL的CBN标准溶液1mL至10mL的容量瓶中用甲醇定容得到1μg/mL的CBN标准溶液。（4）用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品进行测定，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测。高效液相色谱仪（HPLC）品牌型号为安捷伦1260条件如下：流动相为乙腈和水，乙腈为色谱纯，水为去离子水，乙腈与水的比例为65%：35本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n（1）样品的准备：将新鲜工业大麻花叶样品于烘箱中60℃下干燥，粉碎机粉碎，混匀待测；/n（2）样品的前处理：准确称取花叶样品于离心管中，加入有机溶剂，超声提取，离心收集上清液，残渣重复超声提取一次，离心，合并上清液，浓缩定容得到样品处理待测液；/n（3）标准工作溶液的配置：将购买得大麻酚（CBN）标准溶液用甲醇稀释至浓度范围为1μg/mL～100μg/mL的标准工作溶液，其浓度范围覆盖试样中待测组份的含量；/n（4）用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品进行测定，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）样品的准备：将新鲜工业大麻花叶样品于烘箱中60℃下干燥，粉碎机粉碎，混匀待测；
（2）样品的前处理：准确称取花叶样品于离心管中，加入有机溶剂，超声提取，离心收集上清液，残渣重复超声提取一次，离心，合并上清液，浓缩定容得到样品处理待测液；
（3）标准工作溶液的配置：将购买得大麻酚（CBN）标准溶液用甲醇稀释至浓度范围为1μg/mL～100μg/mL的标准工作溶液，其浓度范围覆盖试样中待测组份的含量；
（4）用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品进行测定，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测。


2.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪（HPLC）条件如下：流动相为乙腈（色谱纯）和水（去离子水），乙腈与水的比例为65%：35%，等度洗脱，流速为1mL/min；进样量为10uL；柱温为30℃；检测器检测波长为220nm。


3.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，其特征在于，所述大麻花叶为9月采摘的成熟工业大麻的叶和花苞组合物，60℃干燥至水分小于5%，粉碎机粉碎至20目。
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘胜贵，王钲霖，马海悦，付彬彬，李智高，孔令羽，
申请(专利权)人：云南绿新生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53