一种STD核酸提取和检测试剂及方法技术

本发明专利技术揭示了一种STD核酸提取和检测试剂及方法，所述试剂包括核酸提取试剂和核酸检测试剂，核酸提取试剂包括细胞裂解液、核酸洗涤液和核酸洗脱液，核酸检测试剂包括可冻干的多重PCR反应缓冲液、STD不同病原体靶标基因的特异性引物及探针，以及内标质控的特异性引物及探针等，所述STD不同病原体包括沙眼衣原体、淋球菌、解脲脲原体和微小脲原体。本发明专利技术提供了一种针对STD核酸的提取、纯化和检测分型的试剂，该试剂灵敏度高、使用操作简便，耗时短，对操作人员的专业要求低，且整个封装试剂可以在常温下运输和储存。

An STD nucleic acid extraction and detection reagent and method

【技术实现步骤摘要】
一种STD核酸提取和检测试剂及方法
本专利技术涉及一种核酸提取纯化领域，尤其是涉及一种STD核酸提取和检测试剂及方法。
技术介绍
性传播疾病(SexuallyTransmittedDisease，STD)常见的病原体有以下几种：沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis，CT)、淋球菌(Neisseriagonorrhoeae，NG)、解脲脲原体(Ureaplasmaurealyticum，UU)、微小脲原体(Ureaplasmaparvum，UP)。其中，目前常规的病原检测技术有：(1)、分离培养技术：病原体分离培养，是早期的病原体检测的金标准。该方法具有较高的特异性和敏感性，但临床检测时间过长，过程繁琐，不适用于大范围检测。(2)、免疫学检测：以基于抗原-抗体的免疫反应，从蛋白水平对病原体进行检测。该方法存在检测灵敏度较低，且特异性受环境等影响较大，检测的窗口期较长，无法满足诊疗需求，仅适用于初筛而不能作为及时确诊的依据，不能够识别同一类病原的不同亚型等问题。(3)、基于PCR的检测方法：包括有普通PCR，荧光PCR法，基因芯片、测序方法等PCR是从核酸水平对病原体进行检测，整个实验需要1～2小时完成。该方法的主要缺点在于进行PCR检测时需要依赖PCR仪或昂贵的实时定量PCR仪，及其它多种配套设备，以及专门的PCR实验室和专业操作人员。PCR检测无法实现即时检验、床旁诊断和无特定实验室检测条件的场景应用，因此无法满足基层、用户终端、现场的检验需求。同时，PCR检测可能存在灵敏度低，因毒性质粒丢失导致的假阴性等问题。目前基于多重PCR或多重荧光PCR方法进行性传播疾病的病原体CT/NG/UU/UP的多重检测试剂盒，普遍存在对于CT和NG基因检测仅选择病原体内源毒力质粒基因，该质粒易出现丢失的现象，从而易导致病原体的漏检。另外大多数试剂盒仅能检测解脲脲原体，不能够区分解脲脲原体和微小脲原体。而且，这些PCR检测试剂的使用，都需要先采用手工或半自动核酸提取设备进行样本的核酸提取、纯化然后进行核酸提取产物的扩增检测。另外，这些检测试剂盒大多都需要低温储存和运输，对试剂的储存和运输环境要求较高。不仅如此，试剂的使用对操作人员专业技能和硬件设备的要求较高，不利于临床推广。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种STD核酸提取和检测试剂及方法。为实现上述目的，本专利技术提出如下技术方案：一种STD核酸提取和检测试剂，所述试剂包括核酸提取试剂和核酸检测试剂，所述核酸提取试剂包括细胞裂解液、核酸洗涤液和核酸洗脱液，所述核酸检测试剂包括可冻干的多重PCR反应缓冲液、STD不同病原体靶标基因的特异性引物及探针，以及内标质控基因的特异性引物及探针，所述STD不同病原体包括沙眼衣原体、淋球菌、解脲脲原体和微小脲原体。优选地，所述细胞裂解液包括：10～15mM的Tris-HCl、2.5～5mM的EDTA、30～40％TritonX-100，以及内质控质粒模板；所述核酸洗涤液包括：2.5～5mM的Tris-HCl、0.1～0.2mM的EDTA、0.7％Nacl；所述核酸洗脱液包括：1.5～2.5mM的Tris-HCl。优选地，所述可冻干的多重PCR反应缓冲液包括：50～70mM的Tris-Hcl、15～30mM的KCl、2.5～4.5mM的MgCl2、20～40μg/μL的BSA、0.2mM的dATP、0.4mM的dUTP、0.2mM的dCTP、0.2mM的dGTP、2～3U的DNA聚合酶、0.1～0.2U的TS-UNG酶、0.3～0.5M的海藻糖、0.001～0.002M的PEG8000、0.04～0.08M甘露醇。优选地，所述STD不同病原体靶标基因的特异性引物及探针的序列，以及内标质控的特异性引物及探针的序列为：其中，F为上游引物序列，R为下游引物序列，P为双标记探针序列。优选地，所述PCR检测试剂同时检测5个荧光检测通道，每个所述荧光检测通道检测一种STD病原体或内标质控。优选地，所述STD核酸提取和检测试剂封装于一封闭的试剂装置中，所述试剂装置包括核酸提取腔室和核酸检测腔室，所述核酸提取试剂和核酸检测试剂分别封装于所述核酸提取腔室和核酸检测腔室内。本专利技术还揭示了另外一种技术方案：一种STD核酸提取和检测方法，包括：S1，采集STD感染者的待检样本；S2，取所述待检样本，注入核酸提取腔室，由预封装于不同核酸提取腔室内的细胞裂解液，核酸洗涤液以及核酸洗脱液分别对检测样本进行裂解、洗涤、洗脱处理后得到核酸提取纯化物；S3，所述核酸提取纯化物分别流入核酸检测腔室后，溶解预设于所述核酸检测腔室内的核酸检测试剂，以进行核酸提取纯化物的PCR扩增和荧光检测。本专利技术的有益效果是：1、本专利技术提供了一种性传播疾病(STD)核酸的提取、纯化和检测分型的试剂，该检测试剂的灵敏度高，对于病原体的检测灵敏度可达到50拷贝/反应，且检测试剂的使用操作简便，耗时短，对操作人员的专业要求低，另外，PCR扩增试剂采用冻干形式封装在试剂装置中，使得整个试剂可以在常温下运输和储存。2、本专利技术在配套仪器的作用下，能够在同一封闭装置中完成性传播疾病(STD)四种病原体的提取、纯化和检测过程，大大简化性传播疾病(STD)CT/NG/UU/UP四种病原体的检测分析流程。附图说明图1是本专利技术试剂封装的试剂装置的正面结构示意图；图2是本专利技术核酸检测试剂5个通道阳性检测结果图。附图标记：1、核酸检测腔室，2、核酸检测试剂，3、加样口，4、第一试剂腔室，5、第二试剂腔室，6、产物腔室，7、核酸吸附腔室，8、第四试剂腔室，9、第三试剂腔室，10、沙眼衣原体(CT)，11、淋球菌(NG)，12、解脲脲原体(UU)，13、微小脲原体(UP)，14、内标质控(IC)。具体实施方式下面将结合本专利技术的附图，对本专利技术实施例的技术方案进行清楚、完整的描述。本专利技术所揭示的一种STD核酸提取和检测试剂及方法，能够在同一封闭装置中完成性传播疾病(STD)CT/NG/UU/UP4种病原体核酸的提取、纯化和检测的整个过程，检测试剂的灵敏度高、使用操作简便，耗时短，对操作人员的专业要求低，且整个封装试剂可以在常温下运输和储存。本专利技术所揭示的一种STD核酸提取和检测试剂，包括：核酸提取试剂和核酸检测试剂，其中，核酸提取试剂可以完成对STD核酸的提取和纯化，其包括细胞裂解液、核酸洗涤液和核酸洗脱液，具体地，细胞裂解液实施时可包括：10～15mM的Tris-HCl、2.5～5mM的EDTA、30～40％TritonX-100，以及内质控质粒模板。本实施例中，细胞裂解液含量为700～800uL，其成分包括：15mM的Tris-HCl(Tris为三羟甲基氨基甲烷)、5mM的EDTA(乙二胺四乙酸)、30％TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)，以及内质控质粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种STD核酸提取和检测试剂，其特征在于，所述试剂包括核酸提取试剂和核酸检测试剂，所述核酸提取试剂包括细胞裂解液、核酸洗涤液和核酸洗脱液，所述核酸检测试剂包括可冻干的多重PCR反应缓冲液、STD不同病原体靶标基因的特异性引物及探针，以及内标质控基因的特异性引物及探针，所述STD不同病原体包括沙眼衣原体、淋球菌、解脲脲原体和微小脲原体。/n

【技术特征摘要】
1.一种STD核酸提取和检测试剂，其特征在于，所述试剂包括核酸提取试剂和核酸检测试剂，所述核酸提取试剂包括细胞裂解液、核酸洗涤液和核酸洗脱液，所述核酸检测试剂包括可冻干的多重PCR反应缓冲液、STD不同病原体靶标基因的特异性引物及探针，以及内标质控基因的特异性引物及探针，所述STD不同病原体包括沙眼衣原体、淋球菌、解脲脲原体和微小脲原体。


2.根据权利要求1所述的STD核酸提取和检测试剂，其特征在于，
所述细胞裂解液包括：10～15mM的Tris-HCl、2.5～5mM的EDTA、30～40％TritonX-100，以及内质控质粒模板；
所述核酸洗涤液包括：2.5～5mM的Tris-HCl、0.1～0.2mM的EDTA、0.7％Nacl；
所述核酸洗脱液包括：1.5～2.5mM的Tris-HCl。


3.根据权利要求1所述的STD核酸提取和检测试剂，其特征在于，
所述可冻干的多重PCR反应缓冲液包括：50～70mM的Tris-Hcl、15～30mM的KCl、2.5～4.5mM的MgCl2、20～40μg/μL的BSA、0.2mM的dATP、0.4mM的dUTP、0.2mM的dCTP、0.2mM的dGTP、2～3U的DNA聚合酶、0.1～0.2U的TS-UNG酶、0.3～0.5M的海藻糖、0.001～0.002M的PEG8000、0.04～0.08M甘露醇。


4.根据权利要求1所述的STD核酸提取和检测试剂，其特征在于，所述STD不同病原体靶标基因的特异性引物及探针的序列，以及内标质控的特异性引物及探针的序列为：









其中，F为上游引物序列，R为下游引物序列，P为双标记探针序列。


5.根据权利要求5所述的STD核酸提取和检测试剂，其特征在于，所述PCR检测试剂同时...

【专利技术属性】
技术研发人员：解信美，李红东，苗保刚，李明，彭年才，
申请(专利权)人：苏州天隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32