一种齐拉西酮人工抗原及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种齐拉西酮人工抗原及其制备方法，在齐拉西酮的仲氨基上直接引入戊二酸酐连接臂，制备齐拉西酮半抗原，本发明专利技术引入的连接臂没有其他特征结构，可以有效降低因为连接臂而带来的非特异性结合，制备得到的人工抗原具有更好的特异性；该半抗原与N‑羟基琥珀酰亚胺及N,N‑环己基碳二酰亚胺反应得到活性酯，其活性酯与载体蛋白发生偶联反应得到齐拉西酮人工抗原；本发明专利技术齐拉西酮人工抗原的制备工艺简单、生产成本低、所制备的齐拉西酮人工抗原可进行动物免疫，得到相应的抗体；所制备的齐拉西酮人工抗原及抗体可以被用来利用免疫检测方法检测样本中是否含有齐拉西酮以及其衍生类药物。

An artificial antigen of ziprasidone and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种齐拉西酮人工抗原及其制备方法
本专利技术具体涉及一种齐拉西酮人工抗原及其制备方法。
技术介绍
齐拉西酮是一种非典型抗精神病药，其结构式为：体外研究显示，齐拉西酮对多巴胺D2,D3,5-羟色胺5HT2A,5HT2C、5HT1A、5HT1D、a-肾上腺素能受体具有较高的亲和力，对组胺H1受体具有中等亲和力，对包括M胆碱能受体在内的其他受试受体/结合位点未见亲和力。齐拉西酮对多巴胺D2，5-HT2A，5-HT1D具有拮抗作用，对5-HT1A受体起激动作用。齐拉西酮抑制突触对5-HT和去甲肾上腺素的再摄取。治疗药物监测(therapeuticdrμgmonitoring,简称TDM)是指在临床进行药物治疗过程中，观察药物疗效的同时，定时采集患者的血液(有时采集尿液、唾液等液体)，测定其中的药物浓度，探讨药物的体内过程，以便根据患者的具体情况，以药动学和药效学基础理论为指导，借助先进的分析技术与电子计算机手段，并利用药代动力学原理和公式，使给药方案个体化。从而达到满意的疗效及避免发生毒副反应，同时也可以为药物过量中毒的诊断和处理提供有价值的实验室依据，将临床用药从传统的经验模式提高到比较科学的水平。此类监测允许例如识别不依从他们的服药方案的患者、未达到治疗剂量的患者、在治疗剂量下非响应的患者、具有亚最佳耐药性的患者、具有药代动力学药物-药物相互作用的患者、或具有导致血浆浓度不良的异常代谢的患者。患者吸收、分布、代谢、及排泄药物的能力存在相当大的个体差异。此类差异可能由并发症、年龄、伴随药物或遗传特性引起。不同的药物配方也能够影响药物的代谢。TDM允许进行剂量优化用于个体患者，改善治疗和功能结果。用于测定药物(例如齐拉西酮)的血清或血浆浓度水平的方法涉及使用带有UV或质谱检测的高效液相色谱(HPLC)，气相色谱-质谱联用分析仪(GC-MS)进行检测，以及免疫测定等，其中，高效液相色谱(HPLC)，气相色谱-质谱联用分析(GC-MS)等需要大型分析仪器，这些分析方法存在仪器昂贵，需要专业技术人员操作，需要在专业实验室中进行等缺点。由于齐拉西酮是一个小分子，只具备免疫反应性，不具备免疫原性，必须将它连结到蛋白质大分子上，借助大分子的T细胞表位刺激机体才能产生抗体特异性免疫应答。因此研制和开发出一种新的、有效的齐拉西酮人工抗原的合成方法是非常必要的。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供一种齐拉西酮人工抗原及其制备方法。为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：一种齐拉西酮半抗原，其具有如式(Ⅰ)所示的结构：一种齐拉西酮人工抗原，其具有如式(Ⅱ)所示的结构：其中，p为载体蛋白，n表示一个载体蛋白上偶联的齐拉西酮半抗原的个数；n的取值范围为5-60；其中，-CONH-表示酰胺基，即进一步地，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、牛γ球蛋白、牛甲状腺球蛋白、钥孔血蓝蛋白和鸡卵清白蛋白中的任意一种。一种制备齐拉西酮半抗原的方法，该方法用于制备以上所述的半抗原，包括如下步骤：将齐拉西酮加入反应容器中，然后再加入吡啶、戊二酸酐，室温下搅拌反应2-24小时；反应结束后，蒸干溶剂，用薄层色谱法纯化，得到齐拉西酮半抗原；其中，齐拉西酮：戊二酸酐＝1:1-1:4，此比例为物质的量之比。一种制备齐拉西酮人工抗原的方法，该方法用于制备以上所述的齐拉西酮人工抗原，包括如下步骤：(1)齐拉西酮半抗原的制备：将齐拉西酮加入反应容器中，然后再加入吡啶、戊二酸酐，室温下搅拌反应2-24小时；反应结束后，蒸干溶剂，用薄层色谱法纯化，得到齐拉西酮半抗原；其中，齐拉西酮：戊二酸酐＝1:1-1:4，此比例为物质的量之比；(2)齐拉西酮人工抗原的制备：a.称取齐拉西酮半抗原于另一反应容器中，加入N,N-二甲基甲酰胺，再加入N-羟基琥珀酰亚胺和N,N-二环己基碳二亚胺，室温搅拌反应过夜，反应结束后离心，取上清液记为A液；其中，齐拉西酮半抗原：N-羟基琥珀酰亚胺：N,N-二环己基碳二亚胺＝1:1:1～1:7:7，此比例为物质的量之比；b.制备pH为7.2～7.4的PBS缓冲液；c.称取载体蛋白溶于步骤b中所述的PBS缓冲液中，得到的溶液记为B液；B液中，载体蛋白浓度为2-20mg/ml；d.搅拌下，将A液滴加到B液，得到的混合液在4℃条件下静置过夜，得到齐拉西酮人工抗原混合液；A液：B液＝(1～5000):1000，此比例为体积比；e.将齐拉西酮人工抗原混合液移入透析袋中，用步骤b中的PBS缓冲液透析，透析结束后，离心取上清液即得到齐拉西酮人工抗原。一种抗体，该抗体是采用以上所述的齐拉西酮人工抗原免疫动物而获得。进一步地，所述抗体为单克隆抗体或者多克隆抗体。本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术以齐拉西酮为原料生产人工抗原，在仲氨基上直接引入戊二酸酐连接臂，制备齐拉西酮半抗原，半抗原与N-羟基琥珀酰亚胺及N,N-环己基碳二酰亚胺反应得到活性酯，其活性酯与蛋白发生偶联反应得到齐拉西酮人工抗原。本专利技术只需要一步就能得到半抗原，大大节约了时间成本和人工成本，工艺简洁、生产成本低、原料来源不受限，另外本专利技术引入的连接臂没有其他特征结构，可以有效降低因为连接臂而带来的非特异性结合，所制备的人工抗原具有更高的特异性，可进行动物免疫，得到相应的抗体。(2)本专利技术制备的齐拉西酮人工抗原及抗体可以被用来利用免疫检测方法检测样本中是否含有齐拉西酮以及其衍生类药物，这里的样本是指哺乳动物或者人的体液样本，例如唾液、尿液、汗液，或者哺乳动物或者人的组织样本，例如肝脏、脾等组织。齐拉西酮人工抗原及抗体还可以广泛应用于药物依赖的检测以及治疗药物监测(TDM)及优化；免疫检测方便，准确，价格低廉，操作简单，可以很好地代替液相色谱HPLC和气相色谱-质谱联用分析仪GC/MS等方法，具有很好的应用价值。附图说明图1是齐拉西酮半抗原的合成路线图。图2是齐拉西酮人工抗原的合成路线图。图3是齐拉西酮半抗原、齐拉西酮人工抗原、牛血清白蛋白的紫外扫描图谱。图4是横向流动测试试纸的结构示意图。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的技术方案做进一步详细说明，应当指出的是，具体实施方式只是对本专利技术的详细说明，不应视为对本专利技术的限定。以下实施例中所使用的物质(包括反应原料、其他试剂等)及仪器等均能够通过商业途径获得。实施例1(1)齐拉西酮半抗原的制备称取100mg(0.24mmol)齐拉西酮，加入50ml单口圆底烧瓶中，然后再加入5ml吡啶中，50mg(0.44mmol)戊二酸酐，加入搅拌子，室温下搅拌反应20小时；反应结束后，减压蒸干溶剂，用薄层色谱法纯化，TLC：层析液为乙酸乙酯，产物比移值Rf＝0.2～0.3；得到半抗原(2)75mg，具体合成路线如图1所示。(2)齐拉西酮人工抗原的制备a.称本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种齐拉西酮半抗原，其特征在于，其具有如式(Ⅰ)所示的结构：/n

【技术特征摘要】
1.一种齐拉西酮半抗原，其特征在于，其具有如式(Ⅰ)所示的结构：





2.一种齐拉西酮人工抗原，其特征在于，其具有如式(Ⅱ)所示的结构：其中，p为载体蛋白，n表示一个载体蛋白上偶联的齐拉西酮半抗原的个数；





3.根据权利要求2所述的一种齐拉西酮人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白选自牛血清白蛋白、牛γ球蛋白、牛甲状腺球蛋白、钥孔血蓝蛋白和鸡卵清白蛋白中的任意一种。


4.一种制备齐拉西酮半抗原的方法，其特征在于，该方法用于制备权利要求1所述的半抗原，包括如下步骤：
将齐拉西酮加入反应容器中，然后再加入吡啶、戊二酸酐，室温下搅拌反应2-24小时；反应结束后，蒸干溶剂，用薄层色谱法纯化，得到齐拉西酮半抗原；其中，齐拉西酮：戊二酸酐＝1:1-1:4，此比例为物质的量之比。


5.一种制备齐拉西酮人工抗原的方法，其特征在于，该方法用于制备权利要求2-3任一项所述的齐拉西酮人工抗原，包括如下步骤：
(1)齐拉西酮半抗原的制备：
将齐拉西酮加入反应容器中，然后再加入吡啶、戊二酸酐，室温下搅拌反应2-24小时；反应结束后，蒸干溶剂，用薄层色谱法纯化，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：王百龙，苏祥煌，
申请(专利权)人：杭州博拓生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33