一种N-亚硝胺的提取分离检测方法技术

本发明专利技术公开了一种N‑亚硝胺的提取分离检测方法，包括以下步骤：(1)将N‑亚硝胺供试品加入水性溶剂中溶解得水性溶液；(2)在步骤(1)中的水性溶液中加入非水溶剂，充分混合得混合液，分离出非水性溶液为提取液；(3)对剩余水性溶液重复步骤(2)中非水溶剂添加和非水性溶液分离，合并所有提取液得N‑亚硝胺提取液；(4)将N‑亚硝胺提取液进行旋蒸或氮吹，除去大部分溶剂后浓缩至0.1～10ml得N‑亚硝胺浓缩液；(5)对N‑亚硝胺浓缩液，进行气相色谱分析和/或液相色谱分析。本发明专利技术提供的提取分离检测方法，有效地解决了现有检测方法中基质干扰、系统污染的问题，可实现N‑亚硝基胺的准确测定，具有良好的应用前景。

A method of extraction, separation and detection of N-nitrosamine

【技术实现步骤摘要】
一种N-亚硝胺的提取分离检测方法
本专利技术涉及化学分析领域，尤其涉及一种N-亚硝胺的提取分离检测方法。
技术介绍
沙坦类药物为血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，是目前治疗高血压的一线用药，常见的有缬沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦钾、替米沙坦等。此类抗高血压药生产过程中使用过量的叠氮化钠，反应结束后需要对残存的叠氮化合物进行淬灭处理。在现有技术中，通常是用亚硝酸在酸性条件下处理除去叠氮化钠。残留的微量亚硝酸会与反应系统中因各种原因带入的胺类化合物反应生成具有基因毒性的N-亚硝基胺。其他药物因受合成反应副产物、生产过程污染或自身降解等因素影响，也可能含有N-亚硝基胺杂质，为了能够实现对药物或药物组合物进行质量控制，需要对相关产品中的N-亚硝胺杂质进行检测。现有方法以药物的甲醇或二氯甲烷溶液进样，进行气相质谱检测(国家药典会缬沙坦国家标准修订征求意见稿，CombinedDirectInjectionN-Nitrosodimethylamine(NDMA)andN-Nitrosodiethylamine(NDEA)ImpurityAssaybyGC/MS美国FDAFY19-006-DPA-S)。本申请的专利技术人发现采用上述现有技术，大量难挥发性的基质进入检测系统，对进样口、色谱柱、离子源均会造成污染，使系统噪声升高，灵敏度降低，稳定性降低。因此，有必要开发一种合适的前处理方法及检测方法，以便对相关药物中的N-亚硝胺杂质进行监测和质量控制。
技术实现思路
本专利技术为解决现有技术中的上述问题，通过液液萃取和色谱分析技术的利用提出了一种N-亚硝胺的提取分离检测方法，提高检测的精确度，同时减少对设备的污染。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供了一种N-亚硝胺的提取分离检测方法，包括以下步骤：(1)将N-亚硝胺供试品加入水性溶剂中溶解得水性溶液；(2)在步骤(1)中所述的水性溶液中加入非水溶剂，充分混合得混合液，分离出非水性溶液为提取液；(3)对剩余水性溶液重复步骤(2)中所述非水溶剂添加和非水性溶液分离，合并所有所述提取液得N-亚硝胺提取液；(4)将所述N-亚硝胺提取液进行旋蒸或氮吹，除去大部分溶剂后浓缩至0.1～10ml得N-亚硝胺浓缩液；(5)对所述N-亚硝胺浓缩液，进行气相色谱分析和/或液相色谱分析。优选地，步骤(4)中浓缩至1ml；进一步优选地，浓缩过程中可加水溶液0.1～5ml，优选为1ml。优选地，步骤(1)中所述供试品选自可在水性溶剂中溶解的化合物及可在水性溶剂中溶解的药物的制剂中的一种或多种。优选地，步骤(1)中所述供试品选自盐酸盐化合物及盐酸盐原料药的各种制剂中的一种或多种。优选地，步骤(1)中所述供试品选自盐酸二甲双胍、盐酸雷尼替丁或盐酸二甲双胍、盐酸雷尼替丁制剂的一种或多种。优选地，步骤(1)中所述供试品选自硫酸盐化合物及硫酸盐原料药的各种制剂中的一种或多种。优选地，步骤(1)中所述供试品选自硫酸沙丁胺醇或硫酸沙丁胺醇制剂的一种或多种。优选地，步骤(1)中所述供试品选自含联苯四氮唑结构的原料药、含联苯四氮唑结构的中间体、含联苯四氮唑结构原料药的各种制剂中的一种或多种。优选地，所述供试品为沙坦类化合物或沙坦类化合物的制剂中的一种或多种；进一步地，所述供试品选自缬沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、氯沙坦钾中的一种或多种。更近一步的，供试品为药物复合物时，将制剂研细，取细粉，加水性溶剂使主成份溶解，离心，取上清液，用非水溶剂提取。优选地，步骤(4)中所述N-亚硝胺浓缩液中包括N-亚硝基二甲胺(NDMA)、N-亚硝基二乙胺(NDEA)、N-亚硝基甲基乙基胺(NMEA)、N-亚硝基二丙胺(NDPrA)、N-亚硝基二丁胺(NDBuA)、N-亚硝基吡咯(NPyr)、N-亚硝基哌啶(NPiP)、N-亚硝基吗啉(NMorph)、N-亚硝基二苯胺(NDPhA)、N-亚硝基二苄胺(NDBeA)、N-亚硝基二异丙胺(NDIPA)、N-亚硝基乙基异丙胺(NEIPA)中的一种或多种。优选地，水性溶剂为中性水溶液或碱性水溶液，供试品与水性溶剂的用量比为1:1～1:100(g:ml)；进一步优选为1：10～1:30(g:ml)。优选地，所述水性溶剂选自水、氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、氨水溶液、磷酸氢二钠水溶液中的一种；进一步优选为优选氢氧化钠水溶液，氢氧化钾水溶液中的一种。进一步地，步骤(1)中所述水性溶剂为酸性水溶液将样品溶解后，再加入碱性水溶液调至中性或碱性。可根据基质的溶解性能选择合适的溶剂。如氯沙坦钾可选择水和碱性溶剂溶解，盐酸二甲双胍、盐酸雷尼替丁选择用水溶解，而缬沙坦则选择碱性溶剂如氢氧化钠水溶液溶解。还可将样品在酸性水溶液中溶解后，再加碱性水溶液将溶液调至中性/碱性。进一步地，水性溶剂包括：水，无机或有机碱或盐溶解后形成的碱性水溶液；水和碱性溶液中可加N-亚硝基二甲胺d6和/或N-亚硝基二丙胺d14，作为内标物质，其浓度为10-500ng/ml，优选为20-100ng/ml，也可不加内标。优选地，所述碱性水溶液中盐的浓度为0.001-5mol/L；进一步优选地，优选为1-2mol/L。优选地，非水溶剂为二氯甲烷或三氯甲烷。优选地，步骤(2)中所述非水溶剂提取中，非水溶剂与水性溶液的体积比为1：1～1：10；进一步优选为1：2～1：4。优选地，所述气相色谱分析具体为：将所述N-亚硝胺浓缩液进样至气相色谱质谱系统，程序升温；其中，所述气相色谱质谱系统的气相色谱柱固定相选自聚硅氧烷聚合物、聚硅氧烷共聚物和聚乙二醇中的一种或多种。优选地，所述色谱分析具体为：将所述N-亚硝胺浓缩液进样至气相色谱质谱系统，程序升温；其中，气相色谱条件为：色谱柱：VF-WAXms：30m*0.25mm*0.5μm或类似性能色谱柱；进样口温度：180～230℃；程序升温：初始柱温为40～60℃，保持1min，随后以15℃/min的速率升温至130℃，保持2min，再以20℃/min的速率升温至250℃，保持10min；质谱分析条件：离子源温度230℃；电压70ev；传输线温度250～280℃；溶剂延迟4min；选择离子监测模式检测或多反应离子检测模式检测。优选地，所述液相色谱分析具体为：将所述N-亚硝胺浓缩液进样至液相色谱质谱系统或液相色谱紫外系统，梯度洗脱；其中，所述液相色谱仪的色谱柱为C8或C18色谱柱，柱温为20-50℃；所述液相色谱仪的流动相选自甲醇-水溶液、乙腈-水溶液、流动相体系中可含有0.001％～5％的甲酸或甲酸铵，进一步优选为含0.01％～0.5％的甲酸。优选地，检测器为质谱检测器或紫外检测器。本专利技术采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：通过液液萃取，实现了N-亚硝基胺杂质与基质的分离提取，采用本专利技术提供的提取分离方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种N-亚硝胺的提取分离检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将N-亚硝胺供试品加入水性溶剂中溶解得水性溶液；/n(2)在步骤(1)中所述的水性溶液中加入非水溶剂，充分混合得混合液，分离出非水性溶液为提取液；/n(3)对剩余水性溶液重复步骤(2)中所述非水溶剂添加和非水性溶液分离，合并所有所述提取液得N-亚硝胺提取液；/n(4)将所述N-亚硝胺提取液进行旋蒸或氮吹，除去大部分溶剂后浓缩至0.1～10ml得N-亚硝胺浓缩液；/n(5)对所述N-亚硝胺浓缩液，进行气相色谱分析和/或液相色谱分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种N-亚硝胺的提取分离检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将N-亚硝胺供试品加入水性溶剂中溶解得水性溶液；
(2)在步骤(1)中所述的水性溶液中加入非水溶剂，充分混合得混合液，分离出非水性溶液为提取液；
(3)对剩余水性溶液重复步骤(2)中所述非水溶剂添加和非水性溶液分离，合并所有所述提取液得N-亚硝胺提取液；
(4)将所述N-亚硝胺提取液进行旋蒸或氮吹，除去大部分溶剂后浓缩至0.1～10ml得N-亚硝胺浓缩液；
(5)对所述N-亚硝胺浓缩液，进行气相色谱分析和/或液相色谱分析。


2.根据权利要求1所述的N-亚硝胺的提取分离检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述供试品选自水性溶剂中可溶解的化合物及其制剂。


3.根据权利要求2所述的N-亚硝胺的提取分离检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述供试品为盐酸盐化合物及盐酸盐原料药的制剂，或硫酸盐化合物及硫酸盐原料药的制剂。


4.根据权利要求1所述的N-亚硝胺的提取分离检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述溶解具体为，将所述供试品研细，取细粉加入所述水性溶剂，离心取上清液得水性溶液。


5.根据权利要求1所述的N-亚硝胺的提取分离检测方法，其特征在于，步骤(1)中所述供试品选自含联苯四氮唑结构的原料药、含联苯四氮唑结构的中间体、含联苯四氮唑结构原料...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶晓霞，葛雨琦，王彦，杨永健，任美婷，乐健，
申请(专利权)人：上海市食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：上海;31